El presente protocolo describe las lesiones traumáticas de los nervios periféricos (TPNI), incluyendo el aplastamiento calibrado con precisión, la laceración estrictamente alineada y desalineada, así como los espacios injertados y no injertados del nervio ciático en ratones. Se desarrollan sensores diseñados a medida para medir el traumatismo nervioso, inducido con herramientas comúnmente disponibles para garantizar resultados reproducibles posteriores a la TPNI.
Artículo de método
Lesión traumática de los nervios periféricos en ratones
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
La lesión traumática de los nervios periféricos (TPNI) es una causa frecuente de morbilidad después de un traumatismo ortopédico. Los métodos reproducibles y precisos para lesionar el nervio y denervar el músculo han sido durante mucho tiempo un objetivo en la investigación musculoesquelética. Muchas extremidades lesionadas traumáticamente tienen un traumatismo nervioso que define el resultado a largo plazo del paciente. A lo largo de varios años, se han desarrollado métodos precisos para producir lesiones nerviosas microquirúrgicas, como aplastamientos, laceraciones e injertos de espacio nervioso, lo que permite evaluar los resultados de forma reproducible. Además, se crean nuevos métodos para lesiones por aplastamiento calibradas que ofrecen correlaciones clínicamente relevantes con los resultados utilizados para evaluar a los pacientes humanos. Los principios de manipulación mínima para garantizar una baja variabilidad en la lesión nerviosa permiten agregar aún más lesiones tisulares asociadas a estos modelos. Esto incluye el aplastamiento muscular directo y otros componentes de la lesión de las extremidades. Finalmente, la evaluación de la atrofia y el análisis preciso de los resultados conductuales hacen de estos métodos un paquete completo para estudiar el trauma musculoesquelético que incorpora de manera realista todos los elementos de la lesión traumática de las extremidades humanas.
Introducción
La lesión traumática de los nervios periféricos (TPNI) es una causa frecuente de morbilidad tras un traumatismo ortopédico 1,2,3. Anualmente, aproximadamente el 3% de los pacientes con traumatismos sufren lesiones nerviosas 1,4, con una incidencia de 350.000 casos5, lo que resulta en 50.000 reparaciones quirúrgicas6. Las TPNI ocurren en un amplio rango de gravedad, y la recuperación funcional depende directamente del tipo y la gravedad d....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
El diseño experimental y los protocolos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Facultad de Medicina de la Universidad Estatal de Pensilvania. Para los estudios se utilizaron ratones machos C57BL/6J adultos, de 10 semanas de edad, con un peso de 20-25 g. Los animales fueron alojados en el animalario bajo condiciones de manejo estéril y fueron aclimatados al menos 5 días antes de realizar los estudios.
1. Preparación animal
- Anestesiar profundamente a los animales con un cóctel de ketamina (100 mg/kg) y xilacina (10 mg/k....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
El dispositivo sensor de presión digital hecho a medida (Figura 1D) funciona detectando el cambio en la resistencia del FSR cuando se aplica una fuerza. Este dispositivo detecta y registra las cantidades de presión más modestas que se le aplican con un tiempo de respuesta de <5 μs, una frecuencia de muestreo de 20 Hz y un rango de presión de 2,5-25 lbs31. Las diferencias en la presión SNCI inducida por las pinzas (Figura 1C) (
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
La historia de la investigación en TPNI se extiende a lo largo de varias décadas11,12. Los primeros experimentos con perros y especies más grandes establecieron la importancia de los modelos animales en el estudio de los resultados de la TPNI 36,37,38. Con el tiempo, estos modelos se han trasladado a roedores más pequeños, con sus medida.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por subvenciones de los NIH (K08 AR060164-01A) y el DOD (W81XWH-16-1-0725; W81XWH-19-1-0773) además del apoyo institucional de la Facultad de Medicina de la Universidad Estatal de Pensilvania, Hershey, PA 17033, EE. UU.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Preparación de alcohol | COVIDIEN | 5110 | |
| Buprenorfina | ZooPharm | BSRLAB0.5-211706 | |
| C57BL/6J | Jackson Laboratories, Bar Harbor | N/A | |
| Aplicadores con punta de algodón | Puritan | 25-8062WC | |
| Tijera de disección | ASSI | ASSI. | |
| Pegamento de fibrina-TISSEEL | Baxter | 1501263 | |
| Resistencia sensible a la fuerza (FSR) | N/A | Pinzas FlexiForce A301 | |
| FST-Dumont | 5SF Inox, 11252-00 | ||
| GraphPad Prism | GraphPad Software Inc. | Versión 8.4.3. | |
| Almohadilla térmica homeotérmica | Kent Scientific | RJ1675 | |
| Ketamina/Ketaved | VEDCO | VED1220 | |
| Pinzas microquirúrgicas | Miltex Premium instruments | BL1901 | |
| Pomada lubricante oftálmica | Akorn Animal Health | NDC 59399-162-35 | |
| Placa de Petri | VWR | 25384-092 | |
| Solución salina tamponada con fosfato | Gibco | 14190-144 | |
| Povidona yodada | Solimo | L0017765SA | |
| Dispositivo sensor de presión de pellizco de precisión | Tijera N/A | a medida | |
| Miltex Premium | 21-536 | ||
| Microscopio binocular estereoscópico con zoom | World Precision Instruments | Modelo PZMIII | |
| Guantes estériles | Cardinal Health | 9L19E511 | |
| 3M-Precise | DS-25 | ||
| Cinta quirúrgica | 3M-Microphore | 1530-0 | |
| Suturas | Ethicon | BV130-5 | |
| Jeringa | BD | 309597 | |
| Philips Electronics | MG3750 | ||
| Xilacina/Anased | Akorn Salud Animal, Inc. |
Referencias
- Robinson, L. R. Traumatic injury to peripheral nerves. Muscle & Nerve. 23 (6), 863-873 (2000).
- Campbell, W. W. Evaluation and management of peripheral nerve injury. Clinical Neurophysiology. Official Journal of the Internation....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
Solicitar permiso para reutilizar el texto o las figuras de este artículo de JoVE
Solicitar permiso