Evaluación de un biomarcador fiable en un modelo de sepsis de sepsis inducida por punción cecal y ligadura cecal

Resumen

Este protocolo presenta los detalles operatorios de la ligadura y punción cecal (CLP) en un modelo de sepsis en ratones. CLP es una de las técnicas más utilizadas para crear un modelo animal de sepsis. Por lo tanto, se requiere un protocolo CLP estandarizado para el logro de resultados de investigación confiables.

Resumen

La sepsis es una enfermedad grave potencialmente mortal y de rápido desarrollo que causa millones de muertes anualmente en todo el mundo. Los investigadores han hecho enormes esfuerzos para dilucidar la fisiopatología de la sepsis utilizando varios modelos animales; el modelo de ratón de sepsis inducida por ligadura y punción cecal (CLP) es ampliamente utilizado en los laboratorios. Los tres aspectos técnicos que afectan la gravedad y replicabilidad del modelo CLP son el porcentaje de ciego ligado, el tamaño de la aguja utilizada para la punción cecal y el volumen de heces comprimidas en la cavidad abdominal. El diagnóstico rápido y específico de sepsis es un factor crucial que afecta el resultado. El estándar de oro para el diagnóstico de sepsis es el cultivo microbiano; Sin embargo, este proceso lleva mucho tiempo y, a veces, es inexacto. La detección de biomarcadores específicos de sepsis es rápida, pero los biomarcadores existentes son insatisfactorios debido a una vida media corta, no especificidad y sensibilidad insuficiente. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de un biomarcador confiable de sepsis en las primeras etapas. Publicaciones anteriores sugieren que el exceso de trampas extracelulares de neutrófilos (TNE) ocurren en la sepsis. La histona citrulinada H3 (CitH3), como componente NET, está elevada tanto en animales sépticos como en pacientes, y la presencia de CitH3 es un biomarcador diagnóstico fiable de sepsis. El presente estudio tuvo como objetivo describir un modelo estandarizado de ratón de sepsis inducida por CLP y establecer un biomarcador sanguíneo confiable de sepsis. Nuestro trabajo puede contribuir al diagnóstico temprano y preciso de la sepsis en el futuro.

Introducción

La sepsis se define como una disfunción orgánica potencialmente mortal causada por una respuesta desregulada del huésped a la infección¹, y el shock séptico es la principal causa de muerte en casos graves de sepsis². La sepsis y el shock séptico causan millones de muertes en todo el mundo cada año³. La clave para mejorar el resultado de los pacientes con sepsis es el inicio oportuno de tratamientos como los antibióticos⁴. El método estándar de oro para el diagnóstico de la sepsis es el cultivo microbiano; Sin embargo, el cultivo microbiano consume mucho tiempo y puede condu....

Protocolo

Todos los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices aprobadas por el Comité de Revisión de Animales del Hospital Xiangya y la Universidad Central del Sur (No. 202103149).

1. Preparación

1. Seleccione ratones machos C57BL / 6J (peso: 20-25 g; edad: 8-12 semanas) y albergue durante 3 días antes de realizar cualquier procedimiento.
2. Pesa el ratón.
3. Anestesiar al ratón con isoflurano al 1,5% por inhalación y pellizcar los dedos de los pies para comprobar la profundidad de la anestesia.
4. Fije el ratón en la almohadilla térmica. Aplique crema depilatoria en el abdomen....

Resultados

Como se muestra en la Figura 2A, no se detectó CitH3 en el grupo simulado por Western blotting. La concentración sérica de CitH3 aumentó significativamente después de CLP, y este aumento fue bloqueado por la inhibición de la formación de NET a través de la administración de YW3-56, un inhibidor de la EAP¹⁰. La figura 2B muestra las concentraciones séricas de CitH3 determinadas por ELISA. A las 24 h después de CLP, la concentració.......

Discusión

CLP introduce patógenos en el abdomen para crear un modelo preclínico de sepsis. Al realizar CLP, es importante utilizar condiciones estériles para eliminar la interferencia de bacterias exógenas y utilizar dosis precisas de anestésicos¹⁶. Los tres aspectos técnicos de CLP que afectan la gravedad y replicabilidad del modelo de sepsis son el porcentaje de ciego ligado, el tamaño de la aguja utilizada para la punción cecal y el volumen de heces comprimidas en la cavidad abdominal. La ligadura de apr.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Aguja
3,3',5,5'-tetrametilbenzidina	R& D Systems Inc	DY999
anti-CitH3 anticuerpo monoclonal	laboratorio
	Abcam	ab5103
anti-conejo anticuerpo secundario	ImmunoResearch	111-035-003
C57BL/6 ratones	Escuela de Medicina Xiangya, Universidad
Cl-amidina	Sigma Aldrich	SML2250
			depilatoria
Dnase I	Sigma Aldrich	11284932001
isoflurano	Sigma-Aldrich	26675-46-7
ketoprofeno	Sigma Aldrich	PHR1375
suturas de seda (4-0 y 6-0)
instrumental quirúrgico& nbsp;
YW3-56	GLPBIO	GC48263

21G de anti-CitH3 anticuerpo policlonal anti-CitH3 de desarrollo propio Jackson Central del Surcrema