Lisado plasmático rico en plaquetas para el tratamiento de enfermedades de la superficie ocular

Resumen

Los lisados plaquetarios representan una herramienta emergente para el tratamiento de las enfermedades de la superficie ocular. Aquí, proponemos un método para la preparación, dispensación, almacenamiento y caracterización del lisado plaquetario recolectado de donantes de plaquetas.

Resumen

Varias enfermedades de la superficie ocular se tratan con gotas oculares derivadas de la sangre. Su uso se ha introducido en la práctica clínica debido a su contenido de metabolitos y factores de crecimiento, lo que promueve la regeneración de la superficie ocular. Las gotas oftálmicas a base de sangre se pueden preparar a partir de diferentes fuentes (es decir, donación de sangre total o aféresis plaquetaria), así como con diferentes protocolos (por ejemplo, diferentes diluciones y ciclos de congelación / descongelación). Esta variabilidad dificulta la estandarización de los protocolos clínicos y, en consecuencia, la evaluación de su eficacia clínica. Detallar y compartir los procedimientos metodológicos puede contribuir a definir directrices comunes. En los últimos años, los productos alogénicos se han ido difundiendo como alternativa a los tratamientos autólogos, ya que garantizan mayores estándares de eficacia; entre ellos, las gotas oftálmicas de lisado de plasma rico en plaquetas (PRP-L) se preparan con procedimientos de fabricación simples. En la unidad de medicina transfusional de AUSL-IRCCS di Reggio Emilia, Italia, el PRP-L se obtiene de la donación de aféresis plaquetaria. Este producto se diluye inicialmente a 0,3 x 10 9 plaquetas/ml (a partir de una concentración media de 1 x 10 9 plaquetas/ml) en NaCl al^0,9%. Las plaquetas diluidas se congelan/descongelan y, posteriormente, se centrifugan para eliminar los residuos. El volumen final se divide en alícuotas de 1,45 ml y se almacena a −80 °C. Antes de ser dispensado a los pacientes, las gotas para los ojos se prueban para determinar su esterilidad. Los pacientes pueden almacenar lisados plaquetarios a -15 °C durante un máximo de 1 mes. La composición del factor de crecimiento también se evalúa a partir de alícuotas seleccionadas al azar, y los valores medios se informan aquí.

Introducción

Los productos derivados de la sangre son ampliamente utilizados en el cuidado de heridas¹, cirugía maxilofacial y ortopédica, y para el tratamiento de diferentes enfermedades de la superficie ocular² como la enfermedad del ojo seco (DED)³. En la DED, la homeostasis de la película lagrimal se ve afectada como consecuencia del funcionamiento anormal de diferentes factores involucrados en la producción de lágrimas y la integridad de la superficie ocular ^4,5.

La DED se caracteriza por heterogen....

Protocolo

El PRP-L utilizado para la evaluación cuantitativa de los factores de crecimiento se recogió en un estudio más amplio sobre la caracterización de productos de PRP con fines regenerativos, llevado a cabo en el AUSL-IRCCS di Reggio Emilia y aprobado por el Comité de Ética del Área Vasta Emilia Nord el 10 de enero de 2019 (número de protocolo 2019/0003319). Los donantes dieron su consentimiento informado de conformidad con la Declaración de Helsinki. No fue necesaria la aprobación ética para recopilar los datos agregados y anónimos del cuestionario Ocular Surface Disease Index (OSDI), que los médicos utilizan habitualmente para controlar los síntomas del síndrome del ojo....

Resultados

La justificación para el uso de gotas oftálmicas derivadas del suero (que es el producto a base de sangre más utilizado para el tratamiento de enfermedades de la superficie ocular) radica en su contenido de GF, que se derivan casi por completo de las plaquetas circulantes. El PRP contiene un número significativamente mayor de plaquetas (y, en consecuencia, de GF derivados de plaquetas) en comparación con el suero de sangre periférica, que oscila entre 0,15 x 10 9-0,45 x 10⁹ PLTs/mL. De acuerdo con l.......

Discusión

En los últimos años, el uso clínico de productos a base de plaquetas para patologías de la superficie ocular ha aumentado, pero su difusión se ve obstaculizada por la falta de robustez científica. Esto se debe principalmente a la gran heterogeneidad en las fuentes de donantes y los protocolos de preparación, que a menudo no se divulgan completamente o no están diseñados específicamente para el propósito para el que se dispensan. En particular, todavía falta información sobre los productos a base de plaquetas recopilados .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Equipments
CompoSeal Mobilea II	Fresenius Kabi, Alemania		selladora de bolsas
HeraSafe capucha Heraeus	Instruments, Alemania		Campana de riesgo biológico de clase II
MCS+ 9000 Sistema móvil de recolección de plaquetas	Haemonetics, Italia		Equipo automatizado de recolección de plasma y multicomponente para la donación de plaquetas, glóbulos rojos, plasma o componentes sanguíneos combinados
Agitador de plaquetas, PF396i	Helmer, EE. UU.		Agitador de plaquetas
Raycell Irradiador de sangre de rayos X	MDS Nordion, Canadá		Irradiador de sangre de rayos X
ROTIXA 50RS	Hettich Zentrifugen, Alemania		Entrifuge de alta velocidad
Sysmex XS-1000i	Sysmex Europe GMBH, Alemania		Hemocitómetro para el recuento de plaquetas
Baño tibio, WB-M15	Falc Instruments, Italia		Baño tibio
Materiales
Solución anticoagulante ACD-A A	Fenwal Inc., Estados Unidos	DIN 00788139	solución anticoagulante para la aféresis plaquetaria (1000 ml)
BD BACTEC Peds Plus/F Viales de cultivo	BD Biosciences, EE. UU.	BD 442020	Ensayo de esterilidad
BD BACTEC Peds Plus/F Viales de cultivo	BD Biosciences, EE. UU	442020	Al menos 2 viales para ensayo de esterilidad
BD Luer Lok Jeringa	BD Plastipack, EE. UU.	300865	Al menos 4 jeringas estériles (50 ml)
Bio-Plex Panel de cáncer humano 1	BioRad Laboratories, EE. UU	171AC500M	Panel estándar para la evaluación
de isoformas de PDGFBio-Plex Panel de Cáncer Humano 2	BioRad Laboratories, EE. UU	171AC600M	Panel estándar para la evaluación de EGF
Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader	BioRad Laboratories, EE. UU	Magpix	Este instrumento permite múltiples inmunoensayos utilizando perlas magnéticas funcionalizadas.
Ensayo Bio-Plex Pro TGF-b BioRad	Laboratories, EE. UU.	10024984	Conjunto y estándares para la evaluación de isoformas de TGFb
BioRet	ARIES s.r.l., Italia	A2DH0020	Al menos 4 picos perforantes para bolsas de sangre
Tubo de extracción de sangre	BD Vacutainer, EE. UU	367835	1 tubo, necesario para realizar recuentos
de plaquetasKit de gotas para los ojos. COL Medical Device para la aplicación y conservación de colirios a partir de hemocomponentes	Biomed Device s.r.l., Italia	COLC50	Kit de colirios. Al menos 2 kits por cada unidad de PRP recolectada
Cáncer Humano PDGF-AB/BB Set 1x96well	BioRad Laboratories, EE. UU.	171BC511	Set para la evaluación de isoformas de PDGF
Cancer Humano2 EGF Set 1x96well	BioRad Laboratories, EE. UU.	171BC603M	Set para la evaluación de EGF
Solución estéril de NaCl al 0,9%	Baxter S.p.A., Italia	B05BB01	1000 ml
Cuestionario OSDI	Allergan Inc., EE. UU.	OSDI	Cuestionario de Índice de Enfermedad
Ocular Espiga perforante	BioRet ARIES s.r.l., Italia	BS051004	Espiga Solución
aditivo plaquetario A+ T-PAS+	TERUMO BCT Inc., Italia	40842	solución conservante para concentrados de plaquetas (1000 ml)
Software Excel	Microsoft, Estados Unidos	Excel	Software de análisis de datos
Teruflex Bolsa de transferencia 1000 ml	TERUMO BCT Inc., Italia	BB*T100BM	1 para dilución de PRP
Teruflex Bolsa de transferencia 300 ml	TERUMO BCT Inc., Italia	BB*030CM	Al menos 6 por cada unidad de PRP recogida

. . . . . de la Superficie de