Inducción de la inflamación de la superficie ocular y recolección de tejidos afectados

Resumen

La inflamación de la superficie ocular daña los tejidos de la superficie ocular y compromete las funciones vitales del ojo. El presente protocolo describe un método para inducir inflamación ocular y recolectar tejidos comprometidos en un modelo de ratón de disfunción de la glándula de Meibomio (MGD).

Resumen

Las enfermedades de la superficie ocular incluyen una variedad de trastornos que alteran las funciones y estructuras de la córnea, la conjuntiva y la red de glándulas de la superficie ocular asociada. Las glándulas de Meibomio (MG) secretan lípidos que crean una capa de cobertura que evita la evaporación de la parte acuosa de la película lagrimal. Neutrófilos y trampas de ADN extracelular pueblan MG y la superficie ocular en un modelo de ratón de enfermedad ocular alérgica. Las trampas extracelulares agregadas de neutrófilos (aggNET) formulan una matriz en forma de malla compuesta de cromatina extracelular que ocluye las salidas de MG y condiciona la disfunción de MG. Aquí, se presenta un método para inducir inflamación de la superficie ocular y disfunción de MG. Los procedimientos para recolectar órganos relacionados con la superficie ocular, como la córnea, la conjuntiva y los párpados, se describen en detalle. Utilizando técnicas establecidas para procesar cada órgano, también se muestran las principales características morfológicas e histopatológicas de la disfunción de MG. Los exudados oculares ofrecen la oportunidad de evaluar el estado inflamatorio de la superficie ocular. Estos procedimientos permiten la investigación de intervenciones antiinflamatorias tópicas y sistémicas a nivel preclínico.

Introducción

Cada parpadeo de un ojo repone la suave película lagrimal dispersa sobre la córnea. Los epitelios de la superficie ocular facilitan la distribución y correcta orientación de la película lagrimal sobre la superficie ocular. Las mucinas son proporcionadas por la córnea y las células epiteliales de la conjuntiva para ayudar a colocar la parte acuosa de la película lagrimal proveniente de las glándulas lagrimales en la superficie de los ojos. Finalmente, la MG secreta lípidos que crean una capa de recubrimiento que evita la evaporación de la parte acuosa de la película lagrimal ^1,2,3

Protocolo

Todos los procedimientos con animales se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices institucionales sobre bienestar animal y aprobadas por la comisión de bienestar animal de la Universidad Friedrich-Alexander Erlangen-Nuremberg (FAU) (número de permiso: 55.2.2-2532-2-1217). Para el presente estudio se utilizaron ratones hembra C57Bl/6, de 7 a 9 semanas de edad. Los ratones se obtuvieron de fuentes comerciales (ver Tabla de materiales) y se mantuvieron en condiciones específicas libres de patógenos con ciclos de día / noche de 12 h.

1. Inducción de inflamación murina de la superficie ocular

1. Rea....

Resultados

El presente protocolo describe los pasos secuenciales para establecer un modelo murino de inflamación de la superficie ocular. Los protocolos tienen como objetivo mostrar cómo aplicar la terapéutica localmente, obtener exudados oculares y extirpar órganos accesorios asociados, como párpados sanos e inflamados (Figura 2), la córnea y la conjuntiva. Se debe prestar atención cuando se diseccionan los párpados superiores para el aislamiento de la conjuntiva, y debe almacenarse en 1x PBS durante .......

Discusión

La secreción oleosa de las glándulas de Meibomio es de gran importancia para un ojo sano²². Sin embargo, la obstrucción de estas glándulas sebáceas por trampas extracelulares agregadas de neutrófilos (aggNETs) que se alinean como hebras paralelas ubicadas en las placas tarsales de ambos párpados puede alterar la película lagrimal²³. Esta alteración resulta en disfunción de la glándula de Meibomio (DGM)¹ y evaporación lagrimal acelerada y condiciona e.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
1x PBS	Gibco
Hidróxido de aluminio	Imject alumbre Adyuvante	77161	40 mg/ mL Concentración final: in vivo: 1 mg/ 100 y micro; L
C57Bl/6 ratones, de 7 años; 9 semanas	Laboratorios Charles River
Calcio	Carl roth	CN93.1	1 M Concentración final: 5 mM
Pinza curva	FST de Dumont SWITZERLAND	5/45 11251-35
Tijera afilada	fina FST Acero inoxidable, Alemania	15001-08
Armario de seguridad laminar	Herasafe
Macrophotography Camera	Cámara de	Canon EOS6D
(sin filtro IR)	Nikon	D5300
Mnase	New England biolabs	M0247S	2 x 106 gel U/mL
Kit de ensayo de flujo multianalito (panel personalizado de ratón 13-plex)	Biolegend	CLPX-200421AM-UERLAN
NaCl 0,9% (solución salina)	B.Braun
Ovoalbúmina (OVA)	Endofit, Invivogen	9006-59-1	10 mg/200 y micro; L en toxina salina
la tos ferina	ThermoFisher Scientific	PHZ1174	50 y micro; g/ 500 y micro; L en solución salina Concentración final: in vivo: 100 µ g/ 100 y micro; L
Petridish	Greiner bio-one	628160
Bisturí	Pluma bisturí desechable	Nº 21	Concentración final: in vivo:  300 ng/ 100 µ L
Microscopio estereoscópico	Zeiss	Stemi508
Jeringa (lavado de córnea/iris)	BD Microlane	27 G x 3/4 - Nr.20 0,4 x 19 mm
Jeringa (inmunización i.p)	BD Microlane	24 G1"-Nr 17, 055* 25 mm

macrofotografía para