Preparación de muestras para el análisis rápido de lípidos en el cerebro de Drosophila utilizando imágenes de espectrometría de masas de desorción / ionización láser asistidas por matriz

Yuki X. Chen; Kelly Veerasammy; Jun Yin; Tenzin Choetso; Tiffany Zhong; Muniyat A. Choudhury; Cory Weng; Ethan Xu; Mayan A. Hein; Rinat Abzalimov; Ye He

doi:10.3791/63930

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Artículo de método

Preparación de muestras para el análisis rápido de lípidos en el cerebro de Drosophila utilizando imágenes de espectrometría de masas de desorción / ionización láser asistidas por matriz

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DOI:

10.3791/63930

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14 de julio de 2022

Yuki X. Chen^*¹^,⁵^,⁶ , Kelly Veerasammy^*¹^,² , Jun Yin^*³ , Tenzin Choetso¹^,⁴ , Tiffany Zhong⁷ , Muniyat A. Choudhury¹^,⁴^,⁵ , Cory Weng¹^,⁴^,⁵ , Ethan Xu⁸ , Mayan A. Hein⁹^,¹⁰ , Rinat Abzalimov² , Ye He¹

¹Advanced Science Research Center, Neuroscience Initiative, the City University of New York, Graduate Center New York, ²Advanced Science Research Center, Structural Biology Initiative, the City University of New York, Graduate Center, ³National Institute of Neurological Disorders and Stroke, National Institutes of Health, ⁴The City College of New York, CUNY, ⁵Macaulay Honors College, CUNY, ⁶Graduate School of Public Health and Health Policy, The City University of New York, ⁷Princeton University, ⁸Ardrey Kell High School, ⁹The Borough of Manhattan Community College, CUNY, ¹⁰Gallatin School of Individualized Study, New York University

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

El objetivo de este protocolo es proporcionar una guía detallada sobre la preparación adecuada de la muestra para el análisis de lípidos y metabolitos en tejidos pequeños, como el cerebro de Drosophila , utilizando imágenes de espectrometría de masas de desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI).

Resumen

El perfil lipídico, o lipidómica, es una técnica bien establecida utilizada para estudiar todo el contenido de lípidos de una célula o tejido. La información adquirida de la lipidómica es valiosa para estudiar las vías involucradas en el desarrollo, la enfermedad y el metabolismo celular. Muchas herramientas e instrumentaciones han ayudado a proyectos de lipidómica, especialmente varias combinaciones de técnicas de espectrometría de masas y cromatografía líquida. La espectrometría de masas de desorción/ionización por láser asistida por matriz (MALDI MSI) ha surgido recientemente como una poderosa técnica de imagen que complementa los enfoques convencionales. Esta novedosa técnica proporciona información única sobre la distribución espacial de los lípidos dentro de los compartimentos tisulares, que antes era inalcanzable sin el uso de modificaciones excesivas. La preparación de muestras del enfoque MALDI MSI es fundamental y, por lo tanto, es el foco de este documento. Este artículo presenta un análisis rápido de lípidos de un gran número de cerebros de Drosophila incrustados en un compuesto de temperatura de corte óptima (OCT) para proporcionar un protocolo detallado para la preparación de tejidos pequeños para el análisis de lípidos o análisis de metabolitos y moléculas pequeñas a través de MALDI MSI.

Introducción

Los lípidos están involucrados en una amplia gama de procesos biológicos y pueden clasificarse ampliamente en cinco categorías basadas en su diversidad estructural: ácidos grasos, triacilgliceroles (TAG), fosfolípidos, lípidos de esteroles y esfingolípidos¹. Las funciones fundamentales de los lípidos son proporcionar fuentes de energía para los procesos biológicos (es decir, TAG) y formar membranas celulares (es decir, fosfolípidos y colesterol). Sin embargo, se han observado funciones adicionales de los lípidos en el desarrollo y las enfermedades, y se han estudiado ampliamente en el campo biomédico. Por ejemplo, los informes han demostrado qu....