Aquí se proporcionan métodos para la inducción simple y rápida de un modelo de dolor de espalda en ratones utilizando una inyección intraligamentosa de activador del plasminógeno urinario.
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Artículo de método
Modelo de dolor de espalda de ratón inducido por activador del plasminógeno de tipo uroquinasa
En este artículo
Resumen
Resumen
Se puede inducir un modelo de dolor lumbar persistente en ratones con la metodología simple descrita en este documento. Aquí se proporcionan métodos paso a paso para la inducción simple y rápida de un modelo de dolor de espalda persistente en ratones utilizando una inyección de activador del plasminógeno de tipo uroquinasa (uroquinasa), una serina proteasa presente en humanos y otros animales. La metodología para la inducción del dolor lumbar persistente en ratones implica una simple inyección de uroquinasa a lo largo de la región de inserción ligamentosa de la columna lumbar. El agente inflamatorio de la uroquinasa activa el plasminógeno a plasmina. Normalmente, el modelo puede inducirse en 10 minutos y la hipersensibilidad persiste durante al menos 8 semanas.
La hipersensibilidad, la alteración de la marcha y otras medidas estándar similares a la ansiedad y la depresión se pueden probar en el modelo persistente. El dolor de espalda es el tipo de dolor más prevalente. Para mejorar la concienciación sobre el dolor de espalda, la Asociación Internacional para el Estudio del Dolor (IASP) nombró a 2021 el "Año Mundial sobre el Dolor de Espalda" y a 2022 el "Año Mundial para Trasladar el Conocimiento del Dolor a la Práctica". Una limitación del avance terapéutico de la terapéutica del dolor es la falta de modelos adecuados para evaluar el dolor persistente y crónico. Las características de este modelo son adecuadas para probar posibles terapias dirigidas a la reducción del dolor de espalda y sus características auxiliares, lo que contribuye a que la IASP haya nombrado 2022 como el Año Mundial para Trasladar el Conocimiento del Dolor a la Práctica.
Introducción
El dolor lumbar es una de las causas más comunes de discapacidad, ya que 1 de cada 5 personas losufre en todo el mundo. A pesar de estos esfuerzos, pocos modelos animales confiables de dolor de espalda se utilizan popularmente en la investigación con animales en el campo del dolor, especialmente en ratones. Los modelos anteriores han utilizado casi exclusivamente ratas para la inducción de dolor de espalda crónico (CBP), como los inducidos por la inyección de un activador del plasminógeno urinario (uPA) en la articulación facetaria lumbar 2,3, la inyección de factor de crecimiento nervi....
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Protocolo
Todos los procedimientos con animales descritos cumplen con la Guía de los NIH para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio. Los estudios fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso Institucional local (IACUC #23-201364-HSC) del Centro de Ciencias de la Salud de la Universidad de Nuevo México. Todos los estudios cumplen con las políticas bajo los auspicios de una Garantía de Cumplimiento de la OLAW (A3002-01) sobre el uso de animales en investigación, como se describe en la Parte III. II. Garantías y certificaciones. Los animales se alojan en las instalaciones de alojamiento del Centro de Recursos Animales (ARC, por sus siglas en inglés) mantenidas por el pers....
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Resultados
Pruebas conductuales relacionadas con la nociceptividad y análisis de datos
Medidas evocadas
La hipersensibilidad en la almohadilla del pie se desarrolla dentro de un día después de la inyección de uroquinasa. En 1 semana, el umbral de retirada se reduce significativamente y persiste hasta la eutanasia; esto se muestra a lo largo de la semana postquirúrgica 4 (Figura 4A). La latencia de retirada de las patas se analiza mediante el método up-down de von.......
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Discusión
Este modelo de dolor de espalda crónico es fácil de inducir, y la hipersensibilidad establecida en 1 semana puede durar hasta (y posiblemente más) 8 semanas. Esto permite un estudio preciso del estado de dolor crónico a diferencia de otros modelos agudos que solo duran una o dos semanas. Si bien mostramos el modelo en ratones, el modelo CBP inducido por uPA también se puede establecer en ratas2. Una ventaja del modelo es que el curso prolongado del tiempo provoca el desarrollo de comportamientos s.......
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Divulgaciones
Los autores declaran que no hay intereses financieros contrapuestos. KNW reconoce la consulta no remunerada con NeuroChronix, Bessor Pharma y USA Elixeria BioPharm, Inc.
Agradecimientos
La subvención fue proporcionada por NIH HEAL UG3 NS123958. Las instalaciones de alojamiento fueron inspeccionadas y acreditadas por AAALAC. Los animales fueron alojados en las instalaciones de alojamiento del Centro de Recursos Animales (ARC, por sus siglas en inglés) mantenidas por el personal del laboratorio y el personal de la División de Recursos de Laboratorio y Animales (DLAR, por sus siglas en inglés). Los procedimientos para las pruebas conductuales son métodos estándar en el campo aprobados por la Sociedad Americana del Dolor y la Asociación Internacional para el Estudio del Dolor. El método de eutanasia es consistente con las recomendaciones del Panel de Eut....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Animales y consumibles | |||
| 70% etanol | Origen | ||
| BALB/c ratones | Envigo | 20-25 g | |
| Bolas de algodón | Fisher Scientific | 19-090-702 | |
| Aplicadores con punta de algodón | Fisher Scientific | 19-062-616 | |
| Inhalante de isoflurano anestésico | MedVet | RXISO-250 | |
| Cinta de etiquetado | Fisher Scientific | NGFP7002 | |
| Guantes de examen de nitrilo | Fisher Scientific | ||
| oxígeno | Local Source | ||
| Paño quirúrgico, Steri-Drape Hoja de utilidad, absorbente Prevención | VWR | 76246-788 | cortado en trozos de 15 x 15 cm |
| Tubo Tygon de 3 mm diámetro interior | Grainger | 22XH87 | |
| Equipo | |||
| #11 cuchillas de bisturí de acero al carbono | VWR | 21909-612 | |
| Cámara de inducción de anestesia | Summit Medical Equipment Company | AS-01-0530-LG | |
| Autoclave | |||
| Unidad Local Biología Pinzas Dumont #5 | Fine Science Tools | 11252-30 | |
| Esterilizador de perlas de vidrio Germinador 500 | VWR | 102095-946 | |
| IITC Ciencias de la Vida Serie 8 Modelo PE34 Medidor de analgesia de placa caliente/fría IITC | PE34 | ||
| Integra Miltex algodón & alicates de vestir | Safco Dental Supply | 66-317 | |
| OPTIKA CL31 iluminador LED de doble brazo | New York Microscope Company | OPCL-31 | |
| Sistema de prueba plantar con emisor de infrarrojos, es decir, aparato Hargreaves Ugo | Basile | 37370-001 y 37370-002 | |
| Mango de bisturí n.º 3 | VWR | 25607-947 | |
| Almohadilla térmica para animales pequeños | Valley Vet Supply | 47375 | |
| Student Vannas tijeras de resorte, hoja recta | Fine Science Tools | 91500-09 | |
| Estación de trabajo de anestesia portátil para investigación animal de sobremesa " PAM" | Patterson Scientific | AS-01-0007 | |
| Filamentos Von Frey Ugo | Basile | 37450-275 |
Referencias
- O'Sullivan, P. B., et al. Back to basics: 10 facts every person should know about back pain. British Journal of Sports Medicine. 54 (12), 698-699 (2020).
- Nauta, H. J., McIlwrath, S. L., Westlund, K. N.
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Reimpresiones y permisos
