Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.

Artículo de método

Métodos para estudiar las contribuciones uterinas al establecimiento del embarazo en un modelo de ratón ovariectomizado

2.8K vistas

DOI:

10.3791/64763

7 de abril de 2023

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

El establecimiento del embarazo es un proceso dinámico que involucra diafonía compleja entre embriones y úteros. Las contribuciones precisas del entorno uterino materno a estos procesos siguen siendo un área activa de investigación. Aquí, se proporcionan protocolos detallados para ayudar en el diseño de modelos animales in vivo para abordar estas preguntas de investigación.

Resumen

Para que se establezca el embarazo, un blastocisto viable debe interactuar con éxito con un revestimiento uterino receptivo (endometrio) para facilitar la implantación y la formación de placenta y permitir el embarazo continuo. Las limitaciones para el éxito del embarazo causadas por defectos embrionarios son bien conocidas y se han superado en gran medida en las últimas décadas con el aumento de la fertilización in vitro (FIV) y las tecnologías de reproducción asistida. Hasta ahora, sin embargo, el campo no ha superado las limitaciones causadas por un endometrio inadecuadamente receptivo, lo que resulta en un estancamiento de las tasas de éxito de la FIV. Las funciones ováricas y endometriales están estrechamente entrelazadas, ya que las hormonas producidas por el ovario son responsables de la ciclicidad menstrual del endometrio. Como tal, cuando se utilizan modelos de embarazo con roedores, puede ser difícil determinar si un resultado observado se debe a un déficit ovárico o uterino. Para superar esto, se desarrolló un modelo de ratón ovariectomizado con transferencia embrionaria o decidualización artificial para permitir el estudio de las contribuciones específicas uterinas al embarazo. Este artículo proporcionará instrucciones sobre cómo realizar la ovariectomía y ofrecerá información sobre diversas técnicas para suministrar hormonas exógenas para apoyar la decidualización artificial exitosa o el embarazo después de la transferencia de embriones de donantes sanos. Estas técnicas incluyen inyección subcutánea, pellets de liberación lenta y mini bombas osmóticas. Se discutirán las ventajas y desventajas clave de cada método, lo que permitirá a los investigadores elegir el mejor diseño de estudio para su pregunta de investigación específica.

Introducción

Con el creciente uso de tecnologías de reproducción asistida en las últimas décadas, se han superado muchas barreras para la concepción, lo que permite a muchas parejas formar familias a pesar de los problemas de fertilidad1. Los déficits de ovocitos o espermatozoides a menudo se pueden evitar mediante fertilización in vitro o inyección intracitoplasmática de espermatozoides; Sin embargo, las cuestiones relacionadas con el útero y la receptividad endometrial siguen siendo una elusiva "caja negra" de potencial reproductivo2.

El embarazo se establece cuando un embrión de alta calidad in....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Protocolo

Todos los animales fueron alojados en instalaciones de alta barrera con temperatura controlada (Laboratorio de Investigación Animal de la Universidad de Monash) con acceso gratuito a alimentos y agua y un ciclo de luz-oscuridad de 12 h. Todos los procedimientos se realizaron de acuerdo con la aprobación del comité de ética de la Plataforma de Investigación Animal de Monash (# 21908, 17971) y se realizaron de acuerdo con el Código de Práctica del Consejo Nacional de Investigación Médica y de Salud para el cuidado y uso de animales.

1. Preparación quirúrgica

  1. Autoclave todos los instrumentos quirúrgicos, gasas y toal....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Resultados

En este documento de protocolo se describe un modelo bien caracterizado de decidualización artificial (Figura 1A). Aquí, ratones hembra adultos jóvenes (8 semanas de edad) se sometieron a ovariectomía quirúrgica como se describe en la sección 1 y la sección 2. Luego, los ratones descansaron durante 2 semanas para asegurarse de que las hormonas ováricas endógenas se disiparan antes de ser apoyadas con hormonas exógenas como se describe en las secciones 3-7 y sección 9. L.......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Discusión

Este artículo proporciona instrucciones paso a paso sobre cómo realizar OVX y proporcionar hormonas exógenas para estudios centrados en la comprensión de las contribuciones uterinas al embarazo y la fertilidad. Se proporcionan dos protocolos detallados sobre dos aplicaciones experimentales de estos métodos, incluida la realización de la transferencia de embriones y la inducción de la decidualización artificial.

Si bien realizar OVX puede ser un desafío inicialmente, especialmente para los inve.......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Divulgaciones

Los autores declaran que no hay intereses financieros o de otro tipo en conflicto.

Agradecimientos

Este trabajo fue posible gracias al Apoyo a la Infraestructura Operativa del Gobierno del Estado de Victoria y al Consejo Nacional de Investigación Médica y de Salud del Gobierno de Australia (NHMRC) IRIISS. Este trabajo fue apoyado por la Subvención de Acceso a la Plataforma de Ciencias de la Salud de la Facultad de Medicina, Enfermería y Ciencias de la Salud de la Universidad de Monash a A.L.W. (Winship-PAG18-0343) para acceder a la Plataforma de Servicios Reproductivos de Monash. A.L.W. cuenta con el apoyo de DECRA financiando DE21010037 del Consejo Australiano de Investigación (ARC). J.N.H. y L.R.A. cuentan con el apoyo de una beca del Programa de Capacitación en ....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Mini bombas osmóticas ALZET 1002BioScientific1002Entrega 0.25 µ L/h durante 14 días. Uso para la sección 7 (Procedimiento experimental - Transferencia de embriones).
Mini bombas osmóticas ALZET 1003DBioScientific1003DEntrega 1 µ L/h durante 14 días. Uso para la sección 8 (Procedimiento experimental - Decidualización artificial).
ALZET Pinzas Reflex de 7 mmBioScientific0009971 Para el cierre de heridas se pueden utilizar pinzas Reflex o pinzas Michel para el cierre de heridas, según las preferencias
Aplicador de pinzas ALZET ReflexBioScientific0009974Para el cierre de heridas se pueden utilizar pinzas Reflex o pinzas Michel, según las preferencias.
ALZET Reflex clip removerBioScientific0009976Se pueden utilizar clips Reflex o clips Michel para el cierre de heridas, según las preferencias
Bupivicaine inyectablePfizerNAStock 0,5%. Usar al 0,05% en solución salina
EstradiolSigma E8875
MeloxicamIliumNAConstituyente activo 0,5 mg/mL. Use 3.5 mL por cada botella de agua de jaula de 400 mL, o según lo recete el veterinario de su institución.
Pinzas MichelDanielsNS-000242
Sellador multiusosDow Corning732
Dispositivo de transferencia de embriones no quirúrgico (NSET)ParaTechs60010Contiene espéculo de 6 mm. Solo de un solo uso.
ProgesteronaSigmaP0130Soluble en etanol. Uso para  sección 3 (Preparación hormonal - inyección subcutánea) y  sección 4 (Preparación hormonal - pellets de liberación lenta)
ProgesteronaSigmaP7556Soluble en agua. Úselo para la sección 5 (Preparación de hormonas - minibombas osmóticas)
Pomada refrescante para los ojosAllerganNA42,5% p/v parafina líquida, 57,3% p/v parafina blanca blanda
Rimadyl Carprofeno ZoetisNAStock 50 mg/mL. Usar a 1 mg/ml (para dosis de 5 mg/kg)
Tubo de gomaDow Corning508-008Lavado en etanol 100% y cortado en trozos de 1 cm. Diámetro interior 1,57 mm ±   0,23 mm; diámetro exterior 3,18 mm y plusmn; 0,23 mm; Pared 0,81 mm.
Aceite de sésamoSigmaS3547
Sofsilk Suturas de seda tamaño 3-0CovidienGS-832

Referencias

  1. Szamatowicz, M. Assisted reproductive technology in reproductive medicine - Possibilities and limitations. Ginekologia Polska. 87 (12), 820-823 (2016).
  2. Evans, J., et al. Fertile ground: Human endometrial programming....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Decidualizaci n artificialTransferencia de embrionesAdministraci n de hormonas ex genasInyecci n subcut neaGr nulos de progesteronaReceptividad endometrialCuerno uterino