Técnicas y prácticas de cultivo celular para evitar la contaminación por hongos y bacterias en el laboratorio de investigación de cultivos celulares

Resumen

Este protocolo presenta técnicas y prácticas esenciales de cultivo celular para ser utilizadas en el laboratorio de investigación de cultivos celulares para evitar la contaminación por hongos y bacterias. Dentro de la categoría de bacterias, se hará especial hincapié en la prevención de la contaminación por micoplasma.

Resumen

El cultivo celular es una habilidad delicada necesaria para cultivar células humanas, animales e insectos, u otros tejidos, en un ambiente controlado. El objetivo del protocolo es enfatizar las técnicas correctas utilizadas en un laboratorio de investigación para prevenir la contaminación por hongos y bacterias. Se hace especial hincapié en evitar la contaminación por micoplasma, una preocupación importante en la sala de cultivo celular debido a su pequeño tamaño y resistencia a la mayoría de los antibióticos utilizados para el cultivo celular. Estas mismas técnicas aseguran el crecimiento continuo y mantienen las células sanas. Tanto para los usuarios nuevos como para los experimentados de cultivos celulares, es importante adherirse constantemente a estas mejores prácticas para mitigar el riesgo de contaminación. Una vez al año, los laboratorios deben revisar las mejores prácticas de cultivo celular y hacer un seguimiento con una discusión o capacitación adicional si es necesario. Tomar medidas tempranas para prevenir la contaminación en primer lugar ahorrará tiempo y dinero, en comparación con la limpieza después de que ocurra la contaminación. Las mejores prácticas universales mantienen los cultivos celulares saludables, reduciendo así la necesidad de descongelar constantemente nuevas células, comprar costosos medios de cultivo celular y reducir la cantidad de descontaminación de la incubadora y el tiempo de inactividad.

Introducción

El cultivo celular tiene muchos usos en el laboratorio de investigación. Desde los orígenes del cultivo celular a principios del siglo 20, las líneas celulares han ayudado a avanzar en la ciencia. Las líneas celulares tienen varias ventajas; Varias líneas celulares pueden ayudar a los investigadores a estudiar la biología celular, producir baculovirus para estudios posteriores o producir grandes cantidades de una proteína de interés, por nombrar algunas¹. Algunos usos adicionales incluyen el estudio del crecimiento de tejidos, ayudar a avanzar en el desarrollo de vacunas, la investigación toxicológica, el estudio del papel de los genes en organ....

Protocolo

1. Preparativos

1. General
   1. Use una bata de laboratorio limpia designada para usarse solo en la sala de cultivo celular y no en otras partes del laboratorio.
      NOTA: La bata de laboratorio no necesita ser estéril.
   2. Use guantes nuevos que no hayan tocado ninguna otra superficie. Asegúrese de que los guantes queden bien. Los guantes de nitrilo sin polvo son los mejores.
      NOTA: Los guantes no necesitan ser estériles.
   3. Para prepararse para el trabajo, rocíe los guantes, las mangas de la bata de laboratorio y el interior del gabinete de seguridad biológica con 70% de EtOH. Limpie la superficie de trabajo y el panel de v....

Resultados

Si no se siguen las técnicas y prácticas adecuadas de cultivo celular descritas en este documento, puede ocurrir contaminación por hongos y bacterias en el laboratorio de cultivo celular de investigación. La figura 2 muestra matraces que contienen contaminación tanto en la suspensión como en los cultivos adherentes.

Cuando no se siguen técnicas asépticas, la contaminación por moho puede ocurrir 2-3 días después. Las bolas redondas y difusas que flotan en los medio.......

Discusión

Si bien la contaminación es una de las principales preocupaciones al realizar trabajos de cultivo celular, las prácticas y técnicas descritas en este manuscrito ayudarán a mitigar los riesgos. Los pasos críticos incluyen usar una bata de laboratorio limpia, que solo se usa en la sala de cultivo celular, usar guantes limpios y sin polvo que se rocían con 70% de EtOH a menudo y que se cambian al cambiar entre líneas celulares, alentar a cada individuo a no compartir botellas de medios, limpiar el gabinete a fondo antes y d.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
DPBS	Gibco	14-190-144
DMEM F-12 Media	ATCC	30-2006
Matraz con deflector de vidrio	Pyrex	09-552-40
Pipetas de vidrio	Fisher	13-678-6B
Ayuda para pipetas	Drummond	13-681-15A
Pipeta serológica	Corning	07-200-573
Matraz T75	Corning	07-202-004
Tripsina	Gibco	25-300-054
*Los artículos pueden variar porque este video trata sobre técnicas

generales de cultivo celular