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Artículo de método

Aplicación del sistema inteligente de detección de fagos y pruebas de sensibilidad antimicrobiana de alto rendimiento y lar índice de resistencia a los antimicrobianos

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DOI:

10.3791/64785

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21 de julio de 2023

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En este artículo

Resumen

Aquí presentamos el principio, la estructura y las instrucciones del sistema inteligente de detección de fagos / pruebas de sensibilidad antimicrobiana de alto rendimiento. Su aplicación se ilustra utilizando como ejemplo la Salmonella aislada de aves de corral en Shandong, China. Se calcula el índice Lar y se discute exhaustivamente su importancia en la evaluación de la resistencia a los antimicrobianos.

Resumen

Para mejorar la eficiencia de las pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos (AST) y el cribado de alto rendimiento de fagos para bacterias resistentes y para reducir el coste de detección, se desarrolló un sistema inteligente de cribado de AST/fagos de alto rendimiento, que incluye un inoculador de matriz de 96 puntos, un convertidor de adquisición de imágenes y el software correspondiente, de acuerdo con los criterios AST y los puntos de ruptura de resistencia (R) formulados por el Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI). La AST y las estadísticas de las distribuciones de la concentración inhibitoria mínima (CMI) (de R/8 a 8R) de 1.500 cepas de Salmonella aisladas de aves de corral en Shandong, China, frente a 10 agentes antimicrobianos se llevaron a cabo mediante el sistema inteligente de cribado de ast/fagos de alto rendimiento. El índice Lar, que significa "menos antibiosis, menos resistencia y residual hasta poca antibiosis", se obtuvo calculando la media ponderada de cada CMI y dividiéndola por R. Este enfoque mejora la precisión en comparación con el uso de la prevalencia de resistencia para caracterizar el grado de resistencia a los antimicrobianos (RAM) de cepas altamente resistentes. Para las cepas de Salmonella con alta resistencia a los antimicrobianos, los fagos líticos se seleccionaron eficientemente de la biblioteca de fagos mediante este sistema, y se calculó y analizó el espectro de lisis. Los resultados mostraron que el sistema inteligente de cribado de fagos y AST de alto rendimiento era operable, preciso, altamente eficiente, económico y fácil de mantener. En combinación con el sistema de monitoreo de la resistencia a los antimicrobianos veterinarios de Shandong, el sistema era adecuado para la investigación científica y la detección clínica relacionada con la resistencia a los antimicrobianos.

Introducción

Dado que los agentes antimicrobianos se han utilizado ampliamente para prevenir enfermedades infecciosas bacterianas, la resistencia a los antimicrobianos (RAM) se ha convertido en un problema de salud pública mundial1. La lucha contra la resistencia a los antimicrobianos es la misión principal actual de seguimiento de la resistencia a los antimicrobianos de patógenos epidemiológicos y la terapia sinérgica de agentes antimicrobianos sensibles y bacteriófagos líticos2.

Las pruebas de sensibilidad antimicrobiana (AST) in vitro son el pilar para monitorizar el tratamiento y detectar el n....

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Protocolo

Las cepas de Salmonella utilizadas en este estudio se recolectaron de aves de corral en Shandong, China, después de obtener la aprobación del Comité de Bioseguridad del Instituto de Ciencias Animales y Medicina Veterinaria de la Academia de Ciencias Agrícolas de Shandong, China.

1. Aplicación del sistema inteligente AST de alto rendimiento8

  1. Preparación del inóculo
    1. Incubar el organismo de control de calidad Escherichia coli y 93 cepas de Salmonella para someterlas a ensayo de AST en placas de agar Mueller-Hinton (MHA) durante 16-18 h a 37 °C

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Resultados

Siguiendo el protocolo del sistema inteligente AST de alto rendimiento, su aplicación se ilustró con la Salmonella de aves de corral en Shandong, China, como ejemplo.

En la Figura 3 se muestra el crecimiento de cepas de Salmonella en placas de agar con ampicilina (R de 32 μg/mL) a concentraciones de 2 a 256 μg/mL determinadas por el convertidor de adquisición de imágenes. El1er pozo horizontal A1 fue el testigo negativo y no mostró cre.......

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Discusión

El método de dilución en agar está bien establecido y se utiliza ampliamente. El principio del sistema AST de alto rendimiento era el del método de dilución en agar. Uno de los pasos críticos dentro del protocolo fue la transferencia precisa de alto rendimiento de 96 inóculos a la vez, que se realizó varias veces seguidas. Para completar este paso crítico, los pines del inoculador de matriz de 96 puntos eran uniformes y muy suaves. La deposición natural de cada pin fue de un volumen de aproximadamente 2 μL, que se agregó.......

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Divulgaciones

Yuqing Liu et al. han presentado patentes chinas para el inoculador de matriz de 96 puntos y el convertidor de adquisición de imágenes y sus aplicaciones (número de patente ZL 201610942866.3 y número de patente ZL 201910968255.X).

Agradecimientos

Este trabajo contó con el apoyo del Proyecto Nacional de Investigación y Desarrollo Clave (2019YFA0904003); Sistema Agrícola Industrial Moderno en la Provincia de Shandong (SDAIT-011-09); Proyecto de Optimización de la Plataforma de Cooperación Internacional (CXGC2023G15); Principales tareas de innovación del proyecto de innovación científica y tecnológica agrícola de la Academia de Ciencias Agrícolas de Shandong, China (CXGC2023G03).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
96 pozo  placa de cultivoBeijing lanjieke Technology Co., Ltd11510
Sistema de adquisición de imágenes AST de matriz de 96 puntosInstituto de Ciencia Animal y Medicina Veterinaria, Academia de Ciencias Agrícolas de Shandong Derechos de autor delsoftware interno Inoculador
de matriz de 96 puntos Instituto de Ciencia Animal y Medicina Veterinaria, Academia de Ciencias Agrícolas de ShandongN/AProducto patentado
AgarQingdao hi tech Industrial Park Haibo Biotechnology Co., LtdHB8274-1
Amikacin Shanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdA857053
AmoxicilinaShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdA822839
AmpicilinaShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdA830931
Balanza analíticaSartoriusBSA224S
Software de cálculo automatizado para el índice Lar de AMRInstituto de Ciencia Animal y Medicina Veterinaria, Academia de Ciencias Agrícolas de Shandong Derechos deautor del software interno Bacterias
Salmonella strainsInstituto de Ciencia Animal y Medicina Veterinaria, Academia de Ciencias Agrícolas de ShandongN/AOrigen animal
Resistencia bacteriana Sistema de gestión de certificación de índice Lar V1.0Instituto de Ciencia Animal y Medicina Veterinaria, Academia de Ciencias Agrícolas de ShandongDerechos de autor
CeftiofurShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdC873619
CiprofloxacinaShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdC824343
Ácido clavulánicoShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdC824181
Mesa de trabajo limpiaEquipo de purificación de Suzhou Co., LtdSW-CJ-2D
Sulfato de colistinaShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdC805491
Placade cultivo Instituto de Ciencia Animal y Medicina Veterinaria, Academia de Ciencias Agrícolas de ShandongN/AProducto patentado
DoxiciclinaShanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd
EnrofloxacinaShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdE809130
filtro 0.22 μ mMilliporeSLGP033RB
FlorfenicolShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdF809685
GentamicinaShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdG810322
Botella de vidrio 50 mLXuzhou Qianxing Glass Technology Co., LtdQX-7
Sistema de detección de resistencia de alto rendimiento V1.0Instituto de Ciencia Animal y Medicina Veterinaria, Academia de Ciencias Agrícolas de Shandong Derechos deautor
Convertidorde adquisición de imágenes Instituto de Ciencia Animal y Medicina Veterinaria, Academia de Ciencias Agrícolas de ShandongN/AProducto patentado
MeropenemShanghai McLean Biochemical Technology Co., LtdM861173
AgarMueller-HintonParque industrial de alta tecnología de Qingdao Haibo Biotechnology Co., LtdHB6232
Placa de Petri de 60 mm x 15 mmEquipo bioquímico de Qingdao Jindian Co., Ltd16021-1
Placa de Petri de 90 mm x 15 mmEquipo bioquímico de Qingdao Jindian Co., Ltd16001-1
Salmonella fagosInstituto de Ciencia Animal y Medicina Veterinaria, Academia de Ciencias Agrícolas de ShandongN/A Incubadora
ShakerShanghai Minquan Instrument Co., LtdMQD-S2R
TurbidímetroShanghai XingBai Biotechnology Co., LtdF-TC2015
Varms sistema de biblioteca de tipo base V1.0Instituto de Ciencia Animal y Medicina Veterinaria, Academia de Ciencias Agrícolas de Shandong Derechos de autor delsoftware interno
vertical de alta presión esterilizadorShanghai Shen'an fábrica de instrumentos médicosLDZX-75L
Sistema de gestión de pruebas de resistencia a patógenos veterinariosInstituto de Ciencia Animal y Medicina Veterinaria, Academia de Ciencias Agrícolas de Shandong Derechos deautor
fagos y monitoreo en la nube de resistencia veterinaria V1.0Instituto de Ciencia Animal y Medicina Veterinaria, Academia de Ciencias Agrícolas de Shandong Derechos deautor
del software internoD832390del software interno Vapor del software interno Plataforma de control de del software interno

Referencias

  1. Ramanan, L., et al. Antimicrobial resistance-the need for global solutions. The Lancet Infectious Diseases. 13 (12), 1057-1098 (2013).
  2. Xiaonan, Z., Qing, Z., Thomas, S. P., Yuqing, L., Martha, R. J. C.

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Reimpresiones y permisos

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