La microdiálisis intradérmica es una técnica mínimamente invasiva que se utiliza para investigar la función microvascular en la salud y la enfermedad. Tanto los protocolos dosis-respuesta como los de calentamiento local se pueden utilizar para esta técnica para explorar los mecanismos de vasodilatación y vasoconstricción en la circulación cutánea.
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Artículo de método
Microdiálisis intradérmica: un enfoque para investigar nuevos mecanismos de disfunción microvascular en humanos
* These authors contributed equally
En este artículo
Resumen
Resumen
La vasculatura cutánea es un tejido accesible que se puede utilizar para evaluar la función microvascular en humanos. La microdiálisis intradérmica es una técnica mínimamente invasiva que se utiliza para investigar los mecanismos del músculo liso vascular y la función endotelial en la circulación cutánea. Esta técnica permite la disección farmacológica de la fisiopatología de la disfunción endotelial microvascular indexada por la disminución de la vasodilatación mediada por óxido nítrico, un indicador del riesgo de desarrollo de enfermedades cardiovasculares. En esta técnica, se coloca una sonda de microdiálisis en la capa dérmica de la piel y se coloca una unidad de calentamiento local con una sonda de flujometría láser Doppler sobre la sonda para medir el flujo de glóbulos rojos. La temperatura local de la piel se restringe o estimula con la aplicación directa de calor, y los agentes farmacológicos se perfunden a través de la sonda para estimular o inhibir las vías de señalización intracelular con el fin de inducir vasodilatación o vasoconstricción o para interrogar mecanismos de interés (cofactores, antioxidantes, etc.). Se cuantifica la conductancia vascular cutánea y se pueden delinear los mecanismos de disfunción endotelial en estados patológicos.
Introducción
Las enfermedades cardiovasculares (ECV) son la principal causa de muerte enlos Estados Unidos. La hipertensión arterial (HTA) es un factor de riesgo independiente para el accidente cerebrovascular, la enfermedad coronaria y la insuficiencia cardíaca y se estima que afecta a más del ~ 50% de la población de los Estados Unidos2. La HTA puede desarrollarse como una ECV independiente (HTA primaria) o como resultado de otra afección, como la enfermedad renal poliquística y/o los trastornos endocrinos (HTA secundaria). La amplitud de las etiologías de la HTA complica las investigaciones sobre los mecanismos subyacentes y el da....
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Protocolo
Todos los procedimientos son aprobados por la Junta de Revisión Institucional de la Universidad Estatal de Pensilvania antes del reclutamiento de los participantes.
1. Configuración del equipo
- Encienda la unidad de calefacción local y el caudalímetro láser Doppler.
NOTA: Ambos deben calibrarse antes de la recopilación de datos de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El caudalímetro láser Doppler debe conectarse a un hardware de adquisición de datos con muestreo a 100 Hz (100 muestras/min) y registro continuo en un software de adquisición de datos. Si bien se puede utilizar otro hardware y software de adquisición de dat....
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Resultados
Protocolo dosis-respuesta acetilcolina
La Figura 1A muestra un esquema que detalla el protocolo dosis-respuesta de ACh. La Figura 1B ilustra los trazados representativos de los valores de flujo de glóbulos rojos (unidades de perfusión, PU; promedios de 30 s) del protocolo estandarizado de dosis-respuesta de ACh para un sujeto a lo largo del tiempo. La Figura 1C ilustra un archivo de datos.......
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Discusión
La técnica de microdiálisis intradérmica es una herramienta versátil en la investigación vascular humana. Los investigadores pueden modificar el protocolo para diversificar aún más sus aplicaciones. Por ejemplo, describimos un protocolo dosis-respuesta de ACh, pero otras investigaciones sobre los mecanismos de vasoconstricción o tono vasomotor, en lugar de la vasodilatación sola, han utilizado enfoques dosis-respuesta de norepinefrina o nitroprusiato sódico 26,27,28,29,30,31.
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Divulgaciones
Los autores no tienen conflictos de intereses ni nada que revelar.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Jeringas de 1 mL | Jeringas BD | 302100 | |
| Acetilcolina | 1424511 de la Farmacopea de los Estados Unidos | Los datos piloto recopilados en nuestro laboratorio indican que el secado de la acetilcolina aumenta la variabilidad de la respuesta CVC; No secar, almacenar en desecador | |
| Hisopos con alcohol | Mckesson | 191089 | |
| Baby Bee Syringe Drive | Bioanalytical Systems, Incorporated | MD-1001 | En este estudio se utilizó el soporte opcional de 3 jeringas (número de catalgo MD-1002) |
| Sondas de microdiálisis lineal CMA 30 | Aparato de Harvard | CMA8010460 | |
| Monitor puntual Connex | Monitor de presión arterial automatizado | WelchAllyn | 74CT-B |
| Controlador de bomba de jeringa de colmena Sistemas | bioanalíticos, incorporados | MD-1020 | Controla hasta 4 unidades de jeringa Baby Bee |
| LabChart 8 | AD Instruments | **El hardware y el software de PowerLab deben ser versiones compatibles | |
| Solución de Ringer Lactato | Avantor (VWR) | 76313-478 | |
| Medidor de flujo sanguíneo con doppler láser | Moor Instruments | MoorVMS-LDF | |
| Kit de calibración de sonda Doppler láser | Moor Instruments | CAL | |
| Laser Doppler VP12 | Moor Instruments | VP12 | |
| Sondas de microdiálisis lineal Bioanalytical | Systems, Inc. | MD-2000 | |
| NG-nitro-l-arginina metil éster | Sigma Aldrich | 483125-M | L-NAME |
| Povidona yodada / betadine | Dynarex | 1202 | |
| PowerLab C Dispositivo de adquisición de datos | AD Instruments | PLC01 | ** |
| Interfaz de instrumento PowerLab C AD | Instruments | PLCI1 | ** |
| Discos adhesivos de sonda | Moor Instruments | conecta la unidad de calefacción local a la piel | |
| Controlador de calentador de piel Moor | Instruments | moorVMS-HEAT 1.3 | |
| Pequeña sonda de calefacción | Moor Instruments | VHP2 | |
| Paños estériles | Halyard | 89731 | |
| Gasa estéril | Dukal Corporation | 2085 | |
| Guantes quirúrgicos estériles | Esteem Número | 8856N | seguido de las iniciales de la talla de guante, luego la letra "B" (por ejemplo, 8856NMB para mediano) |
| Tijeras quirúrgicas | Cole-Parmer | UX-06287-26 |
Referencias
- Xu, J. Q., Murphy, S. L., Kochanek, K. D., Arias, E. Mortality in the United States, 2021. NCHS Data Brief. 456, (2022).
- Tsao, C. W., et al. Heart disease and stroke statistics-2023 update: A report from the American heart association. Circulation. 147....
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Reimpresiones y permisos
