Aquí, se desarrolló y validó una plataforma digital de análisis de imágenes inmunohistoquímicas para analizar cuantitativamente las células inmunitarias endometriales de pacientes con abortos espontáneos recurrentes en la ventana de implantación.
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Artículo de método
Plataforma para la detección cuantitativa de células inmunes endometriales basada en inmunohistoquímica y análisis de imágenes digitales
En este artículo
Resumen
Resumen
Para evaluar el microambiente inmune endometrial de pacientes con aborto espontáneo recurrente (RM), se desarrolló y validó una plataforma de análisis de imágenes inmunohistoquímicas digitales para analizar cuantitativamente las células inmunes endometriales durante la fase lútea media. Todas las muestras de endometrio se recogieron durante la fase lútea media del ciclo menstrual. Los tejidos endometriales incluidos en parafina se seccionaron en portaobjetos de 4 μm de espesor y se llevó a cabo una tinción inmunohistoquímica (IHQ) para detectar células inmunitarias endometriales, incluidas las células uNK CD56+, las Tregs Foxp3+, los macrófagos CD163+ M2, las CD CD1a+ y las células T CD8+. Las diapositivas panorámicas se escanearon con un escáner digital de diapositivas y se utilizó un sistema comercial de análisis de imágenes para el análisis cuantitativo. El porcentaje de células inmunitarias endometriales se calculó dividiendo el número de células inmunitarias en el total de células endometriales. Utilizando el sistema comercial de análisis de imágenes, la evaluación cuantitativa de las células inmunitarias endometriales, que son difíciles o imposibles de analizar con el análisis de imágenes convencional, podría analizarse de forma fácil y precisa. Esta metodología se puede aplicar para caracterizar cuantitativamente el microambiente del endometrio, incluida la interacción entre las células inmunitarias, y su heterogeneidad para diferentes pacientes con insuficiencia reproductiva. La plataforma para la evaluación cuantitativa de las células inmunitarias endometriales puede tener una importancia clínica importante para el diagnóstico y el tratamiento de las pacientes con RM.
Introducción
El aborto espontáneo recurrente (RM) es la pérdida de dos o más embarazos consecutivos y es una enfermedad compleja que ha llamado la atención de los médicos en los últimos años. La tasa de incidencia de RM en mujeres en edad fértil es del 1%-5% 1. Los resultados de estudios previos muestran que los factores inmunes están estrechamente asociados con la patogénesis de RM 2,3,4,5. El mantenimiento de la homeostasis inmunitaria en la interfaz materno-fetal es necesario para la implantación y el desarrollo embrionario. La....
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Protocolo
El contenido y el protocolo de la investigación han sido revisados éticamente y aprobados por el comité de ética de investigación del Hospital de Urología Shenzhen Zhongshan. Todas las mujeres (de 20 a 40 años) que participaron en el estudio dieron su consentimiento informado para la recolección y el uso de la muestra.
1. Adquisición de tejido patológico
- Prepare las herramientas para la recolección de pañuelos, a saber, la regla de medición, la pinza, el casete de inclusión, el papel de incrustación y la canasta de pañuelos.
- Observe si la cantidad de tejido endometrial (más grande que un frijol mungo), r....
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Resultados
Con el fin de evaluar cuantitativamente las células inmunitarias endometriales y reducir la inestabilidad causada por errores operativos provocados por el hombre, establecimos una plataforma de análisis cuantitativo digital para las células inmunitarias endometriales mediante el uso de la detección inmunohistoquímica automática y el sistema de evaluación cuantitativa digital. Se estableció la plataforma de análisis de imágenes inmunohistoquímicas para analizar cuantitativamente las células inmunes endometriales de pacien.......
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Discusión
Este protocolo estableció una plataforma digital de análisis de imágenes inmunohistoquímicas para analizar cuantitativamente las células inmunitarias endometriales de pacientes con RM. En este caso, se detectaron seis marcadores inmunitarios endometriales para evaluar el microambiente inmunitario endometrial en pacientes con RM.
Un endometrio receptivo durante la fase lútea media es clave para el éxito de la implantación y el embarazo27,28
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores agradecen a todas las mujeres que dieron su consentimiento y donaron muestras para este estudio.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Cubrezapatillas automatizadas | Sakuraus | DRS-Prisma-P-JCS& Film-JC2 | |
| CD163 | GrowGn Biotechnology | NCL-L-CD163 | |
| CD1a | Gene Tech | GM357129 | |
| CD56 | Gene Tech | GT200529 | |
| CD8 | Novocastra | NCL-L-CD8-4B11 | |
| Deshidratador | Thermo Fisher | Excelsior ES | |
| Laboratorios de patología digital e | índica | HALO | |
| Foxp3 | YILIFANG biológico | 14-477-82 | |
| Tinción IHC | Leica | BOND III | |
| Plataforma de análisis de imágenes | Indica labs | HALO | |
| Slide Scanner | Olympus life science | VS200 |
Referencias
- Practice Committee of the American Society for Reproductive. Evaluation and treatment of recurrent pregnancy loss: a committee opinion. Fertility and Sterility. 98 (5), 1103-1111 (2012).
- Dimitriadis, E., Menkhorst, E., Saito, S., Kutteh, W. H., Brosens, J. J. Recurrent pregnancy loss.
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Reimpresiones y permisos
