Artículo de método

Un método eficiente y reproducible para producir plantas compuestas mediante la transformación de raíces peludas basadas en Agrobacterium rhizogenes

DOI:

10.3791/65688

⸱

30 de junio de 2023

 ,  ,  ,  ,  , 
1College of Agriculture, Liaocheng University, 2College of Life Science, Liaocheng University

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aquí, proporcionamos el protocolo detallado de un método de transformación de un solo paso mediado por Agrobacterium tumefaciens para producir plantas compuestas.

Resumen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La producción de plantas compuestas con raíces transgénicas y tallos y yemas no transgénicos utilizando la transformación de raíces pilosas mediada por Agrobacterium rhizogenes es una herramienta poderosa para estudiar la biología relacionada con las raíces. La transformación de la raíz pilosa se establece en una amplia gama de dicotiledóneas y en varias especies de monocotiledóneas y es casi independiente del genotipo. El método tradicional de inyección de hipocótilo con A. rhizogenes para obtener plantas compuestas es ineficiente, requiere mucho tiempo, es laborioso y con frecuencia causa la muerte de plantas de hipocótilo tiernas y diminutas. Previamente se estableció una transformación de raíz pilosa altamente eficiente de un solo paso mediada por A. rhizogenes , lo que elimina la necesidad de trasplante después de producir raíces pilosas. En este estudio, se extirpó un hipocótilo parcial y una raíz primaria, se recubrió el sitio de incisión del hipocótilo con A. rhizogenes y luego se plantaron hipocótilos en vermiculita estéril. Después de 12 días de cultivo, la incisión del hipocótilo se expandió y se indujeron nuevas raíces pilosas. Este artículo proporciona el protocolo detallado de un método de transformación de un solo paso mediado por A. rhizogenes, cuya eficacia se ha demostrado mediante la producción de plantas compuestas de soja silvestre, Solanum americanum y calabaza.

Introducción

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Agrobacterium rhizogenes es una bacteria gramnegativa del suelo de la familia Rhizobiaceae. A. rhizogenes puede infectar casi todas las dicotiledóneas, algunas monocotiledóneas y gimnospermas individuales a través de heridas, produciendo raíces pilosas en las plantas infectadas. La bacteria es portadora del plásmido Ri (inductor de raíces), y el ADN-T del plásmido Ri es portador del gen de síntesis de opina y de los genes de rol (genes del locus de la raíz). Después de que el ADN-T del plásmido Ri entra en una célula vegetal y se integra en un cromosoma huésped, la expresión de los genes del rol induce la producción

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Protocolo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Condiciones de crecimiento de las plantas y cultivo de A. rhizogenes

  1. Siembra de semillas
    NOTA: Se recolectaron semillas de soja silvestre en el condado de Yanggu, Liaocheng, China; Las semillas de S. americanum y la variedad local de calabaza Yinsu se compraron en un mercado.
    1. Recoja semillas de soja silvestre , S. americanum y la variedad local de calabaza, siémbralas en vermiculita a una profundidad de 1 cm y riéguelas bien. Planta 20 semillas en cajas de plástico de 8 cm x 11 cm x 9 cm. Cultivar las plantas en una cámara de crecimiento a 24 ± 2 °C con un ciclo de 16 h de luz/8 h de oscuridad a aprox....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Resultados

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Transformación de raíces pilosas mediada por A. rizogenes en un solo paso altamente eficiente
Las raíces pilosas se produjeron en el sitio de incisión del hipocótilo 12 días después de la inoculación con K599 diseñado. Las raíces pilosas transgénicas se determinaron a partir de la expresión del gen reportero contenido en el vector binario. Se observaron raíces transgénicas transformadas con el gen reportero DsRed2 de soja silvestre compuesta, S. americanum y calabaza bajo lu.......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Discusión

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

El método de raíz pilosa mediada por A. rizogenes en un solo paso es un método más simple y eficiente para producir plantas compuestas que el método de inyección de hipocótilo. El método ARM de un solo paso mejora significativamente la eficiencia de la transformación de las raíces pilosas, acorta el tiempo para producir raíces pilosas, aumenta el número de raíces pilosas y reduce la cantidad de trabajo involucrado. El protocolo de transformación mejorado es óptimo para estudios de simbiosis entre leguminosas y r.......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Divulgaciones

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Los autores no tienen conflictos de intereses que declarar.

Agradecimientos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este trabajo contó con el apoyo del Fondo de Investigación de la Universidad de Liaocheng (318012028) y la Fundación de Ciencias Naturales de la Provincia de Shandong (ZR2020MC034).

....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
kanamicinaSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.
LB medioSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.
caja de plásticoLiaoSu8 cm x 11 cm x 9 cm
calabazavariedad local Yinsu
estreptomicinaSangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.A610494 
Tanon-5200Multi máquinaTanon Co., Ltd., China5200Sistemaimagen de quimioluminiscencia
tomatevariedad local Zhongshu4
sojarecolectada en el condado de Yanggu, Liaocheng, China
A506636B540113 de múltiple silvestre

Referencias

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chilton, M. D., et al. Agrobacterium rhizogenes inserts T-DNA into the genome of the host plant root cells. Nature. 295, 432-434 (1982).
  2. Fan, Y., et al.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Reimpresiones y permisos

Solicitar permiso para reutilizar el texto o las figuras de este artículo de JoVE

Solicitar permiso

Etiquetas

Transformaci n en un solo pasoinyecci n del hipocotilora ces transg nicasfunci n g nica de la ra zingenier a metab lica de plantasexpresi n de genes reporterosmicroorganismos de la rizosfera

Artículos relacionados