En este trabajo se presenta un protocolo para evaluar la nocicepción en ratones infectados con Trypanosoma evansi, utilizando como herramienta el aparato electrónico de von Frey, midiendo umbrales mecánicos de la pata trasera y vísceras.
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Artículo de método
Von Frey electrónico asociado con la escala de muecas de ratón para evaluar la alodinia y el dolor en ratones infectados con Trypanosoma evansi
En este artículo
Resumen
Resumen
La patogénesis de las enfermedades infecciosas sigue siendo un campo complejo de estudiar. En los animales domésticos puede observarse el curso de varios signos clínicos, como alodinia y dolor. Sin embargo, el conocimiento de sus vías y el tratamiento correcto requieren experimentos controlados, muchos de ellos con animales de laboratorio. La medición de los cambios en los umbrales mecánicos de la pata trasera y las vísceras es una técnica útil para observar los cambios en la percepción del dolor en roedores. La respuesta de retirada se puede medir primero en las pruebas de referencia, lo que crea un mejor control de los grupos experimentales. Las pruebas posteriores se pueden realizar después de inducir la infección y agregar medicamentos al protocolo. El uso de un aparato electrónico de von Frey asociado con el uso de una escala facial para observar cambios similares al dolor permite una evaluación simple, precisa y consistente para evaluar la alodinia y el dolor en ratones. Por lo tanto, los experimentos que utilizan la metodología actual para la infección por Trypanosoma evansi representan un método útil para evaluar la alodinia y el dolor en animales infectados de laboratorio, que se puede aplicar al tratamiento convencional para animales de ganado.
Introducción
El Trypanosoma evansi es el agente etiológico de la enfermedad denominada "surra" o "mal-das-cadeiras" en América del Sur 1,2. Afecta comúnmente a equinos y ganado, pero también a la fauna silvestre, siendo transmitida por picaduras de moscas de murciélagos hematófagos, tabánidos y estomoscas 1,3. La surra es una enfermedad importante en los animales domésticos, que puede ser mortal en ausencia del tratamiento correcto, presentando signos clínicos inespecíficos como anemia, pérdida de apetito y peso, debilidad muscular y aborto, que pueden var....
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Protocolo
Todos los experimentos se realizaron con ratones suizos hembras adultas de 10 semanas de edad (35-55 g). Los animales se alojaron en jaulas de polisulfona (3-5 animales por jaula) en una sala con temperatura controlada (21 ± 1 °C), ciclo de 12 h de luz/12 h de oscuridad, y comida de laboratorio estándar y agua ad libitum. Se asignaron diez animales a cada grupo en cada prueba para demostrar los efectos consistentes de los tratamientos farmacológicos. El diseño experimental fue presentado y aprobado por el Comité de Ética de la Universidad Estadual de Santa Catarina (CEUA) (número de protocolo: 6019201123). Todos los experimentos con animales cumplieron con la....
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Resultados
Disminución del umbral mecánico debido a la infección por T. evansi evaluada por el aparato electrónico de von Frey tanto en la pata trasera derecha como en los tejidos viscerales
El experimento se llevó a cabo durante 5 días, de acuerdo con los datos previos relacionados con la muestra disponible de T. evansi 2. Los ratones infectados comenzaron a mostrar una diferencia significativa en el umbral mecánico en la pata trasera derecha el día 3 después de la infe.......
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Discusión
Un paso crítico en los experimentos con animales infectados es el control de los niveles de parasitemia. Diferentes cepas de T. evansi pueden comportarse de manera divergente en ratones, lo que lleva a infecciones agudas a crónicas 2,4,5,6. Además, los cambios en la dosis de infección pueden disminuir o prolongar el tiempo de supervivencia de los ratones. Por lo tanto, se recomienda ob.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen conflictos de intereses que declarar.
Agradecimientos
Los autores agradecen especialmente a la Universidad Estadual de Santa Catarina por el apoyo financiero, al Laboratorio de Farmacología por los animales y el espacio, y al Laboratorio de Bioquímica de Hemoparásitos y Vectores por la muestra de sangre criopreservada infectada con T. evansi utilizada en estos experimentos.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Aguja de 26 G 1/2" acoplada a la jeringa de insulina | TKL | 80288090100 | Se utiliza para infundir soluciones en animales de laboratorio |
| Accesorios para el analgésimo von Frey | INSIGHT | EFF 303 | Caja de contención con soporte para la evaluación del analgésico digital |
| D-(+)-Glucosa | SIGMA-ALDRICH | G7021 | Un monosacárido que es la principal fuente de energía en forma de ATP para los organismos vivos |
| Analgésímetro digital | INSIGHT | von Frey Wi-Fi | El von Frey Wi-Fi es un dispositivo portátil que se utiliza para evaluar la sensibilidad de los tejidos a los estímulos mecánicos |
| Gilson tipo 10 y micro; L punta de polipropileno | CRALPLAST | 18261 | Polipropileno para ser utilizado en aparatos electrónicos de von Frey, recomendado para la evaluación de alodinias en las patas traseras |
| Baño de agua de laboratorio | SIENDO INSTRUMENTO | BW-22P | Se utiliza para calentar sustancias líquidas y semisólidas contenidas en recipientes apropiados a una temperatura específica |
| Solución salina tamponada con fosfato | SIGMA-ALDRICH | 806552 | Un tampón de solución salina equilibrada utilizado para una variedad de aplicaciones de cultivo celular |
| Ratones suizos (Mus musculus) de ambos sexos | UFSC | Swiss Webster | utilizados para experimentos controlados |
| Trypanosoma evansi criopreservado Muestra | UDESC | utilizada para infectar a todos los ratones, cedida por el Laboratorio de Bioquímica de Hemoparásitos y Vectores | |
| Tipo universal 10 y micro; L punta de polipropileno | CRALPLAST | 18171 | Polipropileno para uso en aparatos electrónicos von Frey, recomendado para la evaluación de la alodinia visceral |
Referencias
- Desquesnes, M., et al. Trypanosoma evansi and surra: a review and perspectives on origin, history, distribution, taxonomy, morphology, hosts, and pathogenic effects. BioMed Research International. 2013, 194176(2013).
- Cipriani, D. S., et al.
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Reimpresiones y permisos
