Method Article

Procedimiento de operación y precauciones de la terapia de acupuntura con incrustación de hilos en el Alzheimer

DOI:

10.3791/65895

⸱

May 10th, 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1College of Acupuncture and Orthopedics, Hubei University of Chinese Medicine, 2Hubei Shizhen Laboratory, 3Hubei International Science and Technology Cooperation Base of Preventive Treatment by Acupuncture and Moxibustion, 4Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este estudio presenta un protocolo para la terapia de acupuntura con incrustación de hilos en ratas similares a la enfermedad de Alzheimer.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La terapia de incrustación de hilos (TEAT) es un tratamiento que previene y controla enfermedades mediante la inserción de una sutura biodegradable en un punto de acupuntura, proporcionando una estimulación duradera. La tetina es un enfoque simple que evita las molestias de la acupuntura regular y proporciona efectos terapéuticos sostenidos. Este artículo analiza el impacto potencial de TEAT en las habilidades de aprendizaje y memoria de ratas con síntomas similares a la enfermedad de Alzheimer. Dado que la degeneración neuronal inducida químicamente y las deficiencias cognitivas en ratas no reflejan completamente los verdaderos cambios patológicos observados en la enfermedad de Alzheimer. En consecuencia, nuestro grupo de investigación ha designado estas manifestaciones como síntomas similares a la enfermedad de Alzheimer. Se ha establecido un protocolo para describir la selección de los puntos de acupuntura, el proceso de operación y las precauciones necesarias para la cabeza y la espalda baja. El experimento se llevó a cabo en tres grupos: un grupo de control, un grupo modelo y un grupo TEAT, cada uno con 6 ratas. Para inducir síntomas similares a los de la enfermedad de Alzheimer, se inyectó D-galactosa a las ratas por vía intraperitoneal durante 7 semanas (49 días). Las ratas del grupo TEAT recibieron un tratamiento de inclusión de catgut con punto de acupuntura. Después del período de intervención, se llevó a cabo un laberinto acuático de Morris (MWM) para evaluar el aprendizaje y la memoria de las ratas. Posteriormente, se sacrificaron las ratas y se examinó su tejido cerebral. Se realizó un examen histológico para comprender los efectos de la TEAT en la patología de ratas que presentaban síntomas de la enfermedad de Alzheimer. Este estudio sugiere que TEAT puede mejorar el aprendizaje y la memoria en ratas con síntomas similares a los de la enfermedad de Alzheimer, lo que indica un nuevo enfoque de tratamiento potencialmente prometedor para esta afección neurodegenerativa.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La acupuntura con hilos incrustados (TEA, por sus siglas en inglés) consiste en incrustar tripa de gato o suturas absorbibles en los puntos de acupuntura con una aguja especial. Esta técnica tiene un efecto prolongado hasta que las suturas se absorben y se degradan. Proporciona una estimulación continua y sostenida de los puntos de acupuntura durante una semana o más1, logrando un resultado comparable sin la necesidad de procedimientos repetitivos diarios2. Esto reduce el número de pacientes que buscan tratamiento médico, conservando así los recursos médicos hasta cierto punto. En los últimos años, TEAT se ha utilizado cada vez más en varios campos médicos en China, incluida la medicina interna, la medicina externa, la dermatología, los rasgos faciales, la ginecología y la pediatría3. Los estudios han demostrado que es eficaz para producir efectos a largo plazo y fiables para ciertas enfermedades crónicas y complejas, como la epilepsia4 y la parálisis del nervio facial5. Tiene las ventajas de un trauma mínimo y una operación simple6. Además, se ha reportado que los costos del tratamiento de la TEAT son más bajos que los de la electroacupuntura (EA)7. Por lo tanto, el TEAT es cada vez más valorado en la investigación clínica y científica.

La enfermedad de Alzheimer (EA) es una afección neurodegenerativa que progresa con el tiempo. Su proceso fisiopatológico comienza a acumularse aproximadamente 20 años antes de que aparezcan los síntomas clínicos, pero su mecanismo aún no se comprende completamente8. Dada la limitada disponibilidad de fármacos eficaces para la EA, la investigación se centra cada vez más en las fases prodrómica y preclínica de la enfermedad9. La prevención es una estrategia crucial para abordar el desarrollo y la progresión de la EA 9,10. En los últimos años, la medicina tradicional china (MTC) ha logrado avances significativos y se espera que ofrezca nuevas posibilidades para prevenir y tratar la EA11,12. Como subtipo de acupuntura, se prefiere la TEAT sobre otras terapias debido a su amplia gama de tratamientos, trauma mínimo, operación simple, baja frecuencia de tratamiento y eficacia duradera6. La literatura emergente sugiere que el TEAT puede beneficiar a las personas con obesidad13,14, diabetes15, insomnio16, osteoporosis posmenopáusica17 y depresión18, todos los cuales son factores de riesgo para la EA. También mejora la senescencia en ratas envejecidas mediante la regulación de la mitofagia2, mejora el aprendizaje espacial y el deterioro de la memoria, alivia el daño patológico del hipocampo e inhibe la respuesta inflamatoria en ratas con demencia vascular (VD)19. Parecía atractivo averiguar si el TEAT también podía actuar sobre los procesos patológicos durante la EA.

La investigación actual carece de uniformidad y estandarización en varios elementos críticos de la operación de TEAT, incluido el método de incrustación, la herramienta de incrustación, el hilo y el período de intervalo de incrustación. Esta falta de estandarización afecta la evaluación del efecto de la terapia y la exploración de los mecanismos relacionados, y restringe la promoción y la comunicación externas. Investigaciones previas 20,21 han demostrado que la administración intraperitoneal de D-galactosa (D-gal) puede inducir cambios patológicos similares a la enfermedad de Alzheimer en ratas, incluyendo degeneración neuronal y deficiencias cognitivas. Además, se ha demostrado que la electroacupuntura en el Baihui (GV20) y Shenshu (BL23) mejora eficazmente el deterioro cognitivo, mitiga la neuroinflamación y reduce el daño neuronal. Este estudio toma como ejemplo ratas modelo similares a la enfermedad de Alzheimer para presentar la selección de puntos de acupuntura y el proceso de operación y las precauciones de TEAT bajo este modelo. Se analizan los elementos operativos críticos de TEAT en la investigación experimental para proporcionar una referencia para estudios futuros.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Todos los experimentos se llevaron a cabo siguiendo la Guía de los Institutos Nacionales de Salud para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio y fueron aprobados por el Comité de Manejo y Uso de Animales de Laboratorio del Centro Provincial de Control y Prevención de Enfermedades de Hubei. Se utilizaron para la prueba 18 ratas Sprague-Dawley (SD) hembras de 3 meses de edad con un peso de 220-250 g. Todas las ratas se mantuvieron en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h a 23 ± 1 °C y 40%-50% de humedad, con libre acceso a comida y agua. Después de un período de aclimatación de una semana, durante el cual se permitió a las ratas habituarse a las condiciones del laboratorio, se iniciaron los experimentos.

1. Desarrollo del modelo

  1. El diseño experimental se muestra en la Figura 1. Divida aleatoriamente 18 ratas hembras Sprague-Dawley de 3 meses de edad que pesaban entre 220 y 250 g en grupos de control, modelo y TEAT. Cada grupo consta de 6 ratas.
  2. Inyectar diariamente D-galactosa (D-gal; 120 mg/kg/día) al grupo modelo y al grupo TEAT, mientras que el grupo control recibe inyecciones de solución salina (120 mg/kg/día), durante 7 semanas (49 días) en la zona ventral inferior22. La inyección debe administrarse diariamente entre las 8:00 y las 9:00 a.m.
  3. Pesar las ratas el 7º día de cada semana entre las 9:00 y las 10:00 a.m. El experimento duró 49 días. Entierra los hilos cada 14 días los días 14, 28 y 42. Fije la hora de cada incrustación de subprocesos entre las 9:00 y las 12:00 a.m.
  4. Continuar la administración intraperitoneal de D-galactosa durante 7 semanas para inducir manifestaciones patológicas relacionadas con la enfermedad de Alzheimer en ratas22.

2. Preparación para la tetina

  1. Esterilice los instrumentos quirúrgicos, como tijeras oftálmicas, bandejas y pinzas, y desinfecte. Limpie a fondo las superficies del entorno del quirófano y desinféctelas.
  2. Prepare la plataforma quirúrgica colocando una almohadilla térmica para animales pequeños sobre la superficie, seguida de una toalla estéril. A continuación, coloque suavemente el tablero de operaciones limpio y desinfectado en la parte superior, con el lado rugoso hacia arriba. A continuación, encienda la almohadilla térmica y ajuste la temperatura a 32 °C.
  3. Para el procedimiento, seleccione una aguja desechable de inserción de hilo n.º 6 con un diámetro de 0,6 mm y una sutura quirúrgica reabsorbible 5-0 (sutura de colágeno) con una longitud de 2 cm. Cortar la sutura quirúrgica reabsorbible 5-0 de 2 cm en trozos de 0,5 cm y 0,2 cm con unas tijeras oftálmicas. Remojar el hilo cortado en solución salina al 0,9% y reservar.
  4. Lávese las manos con agua y jabón durante 20 s y luego séquelas. Después, use guantes estériles.
  5. Anestesiar a las ratas con una inyección IP de hidrato de cloral (300 mg/kg) en la zona ventral inferior, asegurando que la anestesia se confirme cuando los animales no responden en un plano quirúrgico, basándose en la falta de respuesta de una prueba de pinzamiento de los dedos del pie, y manteniendo un estado fisiológico estable. Además, para prevenir la sequedad de la córnea y el daño potencial mientras las ratas están bajo anestesia, aplique una cantidad generosa de ungüento veterinario en los ojos, asegurándose de que permanezcan lubricados durante todo el procedimiento.
    NOTA: Se recomienda anestesiar a la rata, ya que es doloroso para ellas experimentar el piercing.

3. Operación de incrustación de roscas para Baihui (GV 20)

  1. Localice el punto de acupuntura Baihui (GV 20) en ratas en el punto medio derecho del hueso parietal (Figura 2A). Coloque las ratas para exponer completamente la cabeza, con las orejas tiradas hacia adelante para aproximarse al método utilizado en los humanos para conectar las líneas del ápice de la oreja. Identifique el punto Baihui (GV 20) palpando la cresta longitudinal central del cráneo y señalando la ubicación aproximadamente en su punto medio. Confirme este punto de acupuntura aún más al nivel donde las orejas harían contacto con la cabeza si se colocan planas, alineándose con la intersección de la sutura sagital y el hueso parietal. Usa un marcador para marcar Baihui (GV 20).
  2. Afeita el área de la cabeza alrededor del punto de acupuntura de la rata con una recortadora (por lo general, una recortadora de barba eléctrica para hombres).
  3. Antes de la cirugía, desinfecte los puntos de acupuntura y la piel circundante aplicando una solución de yodo al 0,5% con movimientos circulares, comenzando desde el centro y moviéndose hacia afuera. A continuación, realizar un triple proceso de desinfección: utilizar el yodóforo 3 veces, seguidas de una aplicación de alcohol para garantizar una correcta descontaminación y preparar el lugar para la técnica aséptica.
  4. Utilice fórceps para sujetar la sutura quirúrgica reabsorbible de 0,2 cm empapada en solución salina y colóquela en el extremo delantero del tubo de la aguja. Luego, conéctelo al núcleo de la aguja.
  5. Pellizque el área alrededor de Baihui (GV 20) con el pulgar y el índice de una mano, mientras sostiene la aguja con la otra.
  6. Inserte la aguja horizontal y rápidamente en un ángulo de 15° con respecto a la superficie de la piel, 0,1 cm por debajo del punto Baihui (GV 20), mientras pellizca la piel (Figura 3A).
  7. Después de que la punta de la aguja alcance 0,1 cm por encima del punto Baihui (GV 20), empuje el núcleo de la aguja mientras retrae el tubo de la aguja para implantar completamente la sutura quirúrgica absorbible de 0,2 cm en el tejido subcutáneo del punto de acupuntura (Figura 3B).
  8. Retire lentamente la aguja, asegurándose de que no quede ninguna sutura expuesta. Presione el orificio de la aguja con algodón seco estéril durante 10 segundos para evitar el sangrado. Si el hilo está fuera del cuerpo después de incrustar la línea en los puntos de acupuntura, extráigalo y vuelva a operar.

4. Operación de incrustación de roscas para Shenshu (BL 23)

  1. El punto de acupuntura Shenshu (BL 23) en ratas se localiza 5 mm lateral a la2ª vértebra lumbar (Figura 2B). En primer lugar, localice la6ª vértebra lumbar basándose en el tubérculo de la cadera de la rata. A continuación, localice la2ª vértebra lumbar contando hacia arriba cuatro cuerpos vertebrales. Shenshu (BL 23) será 5 mm lateral a él23.
    NOTA: La combinación de los puntos de acupuntura Baihui (GV 20) y Shenshu (BL 23) es un conjunto frecuentemente utilizado en la teoría de la Medicina Tradicional China (MTC) para la prevención y el tratamiento de trastornos cerebrales. Como lo confirmaron investigaciones previas20,21, este emparejamiento de puntos de acupuntura ha sido establecido por su eficacia.
  2. Usa un marcador para marcar Shenshu (BL 23). Afeita el área de la espalda y la cintura alrededor del punto de acupuntura de la rata con una recortadora (generalmente una recortadora de barba eléctrica).
  3. Antes de la cirugía, desinfecte los puntos de acupuntura y la piel circundante aplicando una solución de yodo al 0,5% con movimientos circulares, comenzando desde el centro y moviéndose hacia afuera. A continuación, realizar un triple proceso de desinfección: utilizar el yodóforo tres veces, seguidas de una aplicación de alcohol para garantizar una correcta descontaminación y preparación del lugar para la técnica aséptica.
  4. Utilice fórceps para sujetar la sutura quirúrgica reabsorbible de 0,5 cm empapada en solución salina y colóquela en el extremo delantero del tubo de la aguja. Luego, conéctelo al núcleo de la aguja.
  5. Estire la piel con los dedos índice y medio de la mano que presiona o con los dedos pulgar e índice. Sostenga la aguja con la mano punzante.
  6. Inserte rápidamente la aguja perpendicularmente en el punto 0,25 cm por debajo del Shenshu (BL 23). Véase la figura 4A.
  7. Después de que la punta de la aguja alcance 0,5 cm debajo de la piel, ajuste la punta de la aguja, haciendo que la dirección de inserción sea centrípeta, formando un ángulo de 45° con la superficie de la piel e inserte oblicuamente 0,5 cm (Figura 4B).
    NOTA: Es importante tener cuidado al pinchar el Shenshu (BL 23), que se encuentra cerca del riñón. La inserción profunda o el levantamiento y empuje repetidos de la aguja pueden causar daños. Por lo tanto, recomendamos una profundidad de inserción de alrededor de 0,3-0,6 cm.
  8. Empuje el núcleo de la aguja mientras retrae el tubo e implante completamente la sutura quirúrgica absorbible de 0,5 cm en el tejido muscular del punto de acupuntura (Figura 4C).
  9. Tire lentamente de la aguja, asegurándose de que no quede expuesta ninguna sutura. A continuación, presione el orificio de la aguja con algodón seco estéril durante 10 s para evitar el sangrado. Si el hilo está fuera del cuerpo después de incrustar la línea en los puntos de acupuntura, extráigalo y vuelva a operar.

5. Cuidados postoperatorios

  1. En el postoperatorio, coloque a la rata sobre una almohadilla térmica para animales pequeños a una temperatura de 32 °C para facilitar la recuperación de la anestesia. Asegúrese de que el animal esté completamente consciente y su condición sea satisfactoria antes de devolverlo a su recinto de alojamiento.
  2. Después de la cirugía, observe signos de respuestas inflamatorias estériles en el área afectada dentro de una semana. Estos signos pueden incluir enrojecimiento, hinchazón o una secreción similar al pus. Por lo general, estos síntomas no requieren ningún tratamiento. Sin embargo, si hay una cantidad excesiva de exudado, drene y desinfecte el área afectada. En tales casos, aplique ungüento de eritromicina hasta que la herida se recupere por completo.

6. Pruebas conductuales y examen histológico

  1. Después de la intervención, en la semana 8, realizar el experimento Morris Water Maze (MWM) 2,24 para evaluar sus capacidades de aprendizaje y memoria. Realice las pruebas de aprendizaje durante 5 días, con cuatro pruebas por día. A continuación, administre una prueba de sonda después de 24 horas desde el último día de adquisición.
  2. Realizar comparaciones estadísticas utilizando software de análisis estadístico. Analizar los datos conductuales de la capacidad de aprendizaje mediante análisis de varianza unidireccional (ANOVA) y test de Tukey post-hoc. Evaluar la importancia de los datos de latencia de escape mediante el análisis de varianza de medidas repetidas bidireccionales (ANOVA) seguido de la prueba de Bonferroni post-hoc. Un valor de p <0,05 se considera significativo en todas las pruebas.
  3. Después de la evaluación del comportamiento, anestesiar a las ratas como se indicó anteriormente y eutanasiar con inyecciones intraperitoneales de 150 mg/kg de peso corporal de pentobarbital sódico.
  4. Fijar el cerebro de la rata a través de la perfusión utilizando paraformaldehído al 4% perfundido a través del sistema vascular25.
    1. Inserción y fijación de la aguja de sonda nasogástrica
      1. Prepare una aguja de 12G y asegúrese de que esté recta y sea adecuada para pasar a través del ventrículo de la rata. Localiza el ventrículo de la rata, que suele ser el ventrículo izquierdo, e inserta la aguja a través de él hasta la aorta ascendente. Este paso requiere precisión y una buena comprensión de la anatomía de la rata.
      2. Una vez que la aguja esté en su lugar, use un hemostático para sujetar la aguja de sonda nasogástrica cerca del punto donde ingresa a la aorta. Esto ayudará a asegurar la aguja y evitará que se mueva.
      3. Asegúrese de que la pinza esté lo suficientemente apretada como para sujetar la aguja de forma segura, pero no tanto como para dañar la aorta o impedir el flujo sanguíneo. La aguja sonda nasogástrica debe permanecer en la aorta ascendente durante todo el procedimiento para mantener una perfusión adecuada.
    2. Perfusión con solución salina normal
      1. Prepare una jeringa de 50 cc sin aguja para la perfusión. Conecta el otro extremo de la aguja de sonda nasogástrica, que está fuera del cuerpo de la rata, a la jeringa llena de solución salina normal.
      2. Haga una pequeña incisión para cortar el apéndice auricular derecho y permitir que la sangre fluya fuera del corazón. Este paso asegura que la sangre sea desplazada por la solución salina durante la perfusión.
      3. Comience a inyectar la solución salina normal en la aorta ascendente a un ritmo constante y constante. Esto eliminará la sangre y preparará los tejidos para la fijación.
      4. Controle el líquido que sale de la orejuela auricular derecha y esté preparado para cambiar la jeringa según sea necesario para mantener una perfusión continua con solución salina fresca.
        colocado, prepárese para perfundir con el fijador.
      5. Reemplace la jeringa que contiene solución salina por una que contenga 4% de paraformaldehído, un fijador de uso común en histología. Proceda con la perfusión utilizando el paraformaldehído para fijar los tejidos en su lugar para su posterior procesamiento y análisis.
        NOTA: A lo largo de este procedimiento, es crucial mantener técnicas asépticas para prevenir infecciones y manipular la rata con cuidado para minimizar las lesiones. Además, todo el personal involucrado debe estar capacitado en la técnica para garantizar la consistencia y la efectividad.
  5. Retirar el cerebro de rata y colocarlo en un frasco de muestra que contenga un 4% de paraformaldehído durante 24-48 h a 4 °C25,26. Realice la deshidratación de etanol y el tratamiento con xileno paso a paso, seguido de secciones coronales continuas convencionales (4-5 μm) para la medición. Evaluar la morfología y la pérdida de neuronas del hipocampo en cada grupo mediante tinción con hematoxilina y eosina (H&E) (200x).
    NOTA: No se realizó un examen de necropsia para evaluar lesiones gastrointestinales (GI) en los roedores debido a la ausencia de signos clínicos indicativos de alteraciones gastrointestinales durante todo el período experimental. Los animales no mostraron reacciones adversas manifiestas que sugirieran la presencia de tales patologías.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este artículo presenta el método de operación específico de TEAT en ratas similares a la enfermedad de Alzheimer. Se analizan los elementos operativos críticos de TEAT en la investigación experimental para proporcionar una referencia para estudios futuros.

La tetina mejora el aprendizaje en ratas similares a la enfermedad de Alzheimer
Como se ilustra en el diagrama de flujo (Figura 5), durante el período de entrenamiento adaptativo, se observó que las ratas de cada grupo observaban el entorno circundante mientras nadaban. El análisis de la velocidad de natación (Figura 6) no mostró diferencias significativas entre los grupos, lo que indica niveles basales consistentes de velocidad de movimiento y percepción visual. Las diferencias observadas en los resultados experimentales no se debieron a variaciones en la capacidad de movimiento o la percepción visual.

Las ratas se sometieron a 5 días de entrenamiento de búsqueda en plataformas. En la Figura 7A, se puede observar que las trayectorias de movimiento de cada grupo de ratas difieren en las etapas tempranas y tardías del entrenamiento. El día 2, la mayoría de los grupos de ratas que se escaparon nadaron al azar. Sin embargo, el día 5, las ratas del grupo de control nadaron en dirección, mientras que las ratas del grupo modelo nadaron aleatoriamente a lo largo de la pared de la piscina. El movimiento de las ratas del grupo TEAT se hizo más denso en el cuadrante objetivo. El experimento midió la latencia de escape, y una latencia más corta indica habilidades más fuertes. La Figura 7B muestra que el grupo modelo exhibió capacidades reducidas de aprendizaje y memoria en comparación con el grupo de control. Sin embargo, el grupo TEAT mostró una mejora significativa en el deterioro de la memoria de referencia espacial en ratas con patología similar a la EA.

La tetina mejora la memoria espacial en ratas similares a la enfermedad de Alzheimer
En el ensayo de sonda, el lugar donde el animal pasa el tiempo indica un sesgo espacial27. Las ratas utilizan cuatro métodos principales para buscar plataformas: basado en bordes, basado en aleatoriedad, basado en tendencias y basado en lineal28. Los resultados indican que cada grupo de ratas empleó diferentes estrategias de búsqueda (Figura 8A). El grupo de control utilizó principalmente estrategias de búsqueda lineal y direccional, lo que sugiere una fuerte memoria y capacidad para recordar la ubicación de la plataforma. Por el contrario, las ratas del grupo modelo exhibieron una estrategia de búsqueda principal similar a un borde, lo que indica una disminución significativa en su capacidad de memoria. No aprendieron a encontrar la plataforma ni a recordar su ubicación. Las ratas del grupo TEAT mostraron una estrategia de búsqueda basada en tendencias. La densidad de trayectoria fue mayor en el cuadrante donde se ubicaba la plataforma original, así como en los cuadrantes adyacentes. Esto indica una mejora de la memoria en comparación con el grupo de modelos.

Las figuras 8B y 8C muestran los resultados de la duración de la estancia en el cuadrante de la plataforma original y el número de veces que las ratas cruzaron la plataforma. Las ratas del grupo modelo mostraron una reducción significativa en su tiempo de permanencia en el cuadrante de la plataforma original y en el número de veces que cruzaron la plataforma en comparación con el grupo control (p <0.01). En comparación con el grupo modelo, las ratas del grupo TEAT mostraron un aumento significativo en su tiempo de permanencia en el cuadrante de la plataforma original y en el número de veces que cruzaron la plataforma (p <0.01). Estos resultados sugieren que el TEAT puede mejorar el aprendizaje espacial y el deterioro de la memoria en ratas con patología similar a la EA.

La tetina mejora el envejecimiento del hipocampo en ratas (Figura 9). En comparación con el grupo de control, las ratas del grupo modelo mostraron cambios patológicos graves, incluida una reducción significativa en el número de células piramidales y su disposición irregular. Además, se observó condensación nuclear, degeneración neuronal y otras anomalías. Sin embargo, después del tratamiento con TEAT, el número de células piramidales del hipocampo en las ratas aumentó y estaban más organizadas. Aunque algunos núcleos exhibían condensación, la morfología general de la célula parecía más normal. Las células estaban más densamente distribuidas y ordenadas, la tinción citoplasmática era más consistente y el edema que rodeaba a las células se redujo significativamente. En particular, se observaron células piramidales normales.

figure-results-1
Figura 1: Diagrama de flujo del experimento. Después de 1 semana de adaptación (semana 0), el estudio distribuyó 18 ratas en tres grupos: Control, Modelo y TETA. Durante las semanas 1 a 7, el grupo control recibió inyecciones de solución salina, mientras que a los grupos modelo y TEAT se les administró D-galactosa. El grupo TEAT también se sometió a una terapia de acupuntura con hilos incrustados en las semanas 2, 4 y 6. Todas las ratas fueron sometidas a la prueba del laberinto de agua de Morris en la semana 8, seguida de la eutanasia. Abreviaturas: Adaptar = adaptación, Con = Grupo de control, Mod = Grupo modelo, TETINA = Grupo de terapia de acupuntura con incrustación de hilos, D-gal = D-galactosa, MWM = la prueba del laberinto acuático de Morris. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

figure-results-2
Figura 2: La ubicación del punto de acupuntura. (A) El punto de acupuntura Baihui (GV 20) en ratas. Se encuentra en el punto medio derecho del hueso parietal. (B) El punto de acupuntura Shenshu (BL 23) en ratas. Se localiza 5 mm lateral a la segunda vértebra lumbar. Abreviaturas: GV = Vaso Gobernador, un concepto de la Medicina Tradicional China (MTC) que se refiere al meridiano principal que corre a lo largo de la línea media de la cara posterior del cuerpo, BL = Vejiga, representa el Meridiano de la Vejiga, que en la MTC corresponde al meridiano Foot-Taiyang, uno de los seis meridianos yang, que corre a lo largo de la parte posterior del cuerpo y las piernas. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

figure-results-3
Figura 3: Operación detallada de incrustación de subprocesos de Baihui (GV 20). (A) La aguja se inserta horizontalmente en un ángulo de 15° con respecto a la superficie de la piel, 0,1 cm por debajo del punto de acupuntura Baihui (GV 20), con la piel pellizcada para facilitar el procedimiento. (B) Una vez que la punta de la aguja alcanza una posición de 0,1 cm por encima del punto de acupuntura Baihui (GV 20), el núcleo de la aguja se empuja mientras se retrae el tubo de la aguja para implantar completamente la sutura quirúrgica absorbible de 0,2 cm en el tejido subcutáneo en el punto de acupuntura. Abreviaturas: GV = Recipiente Gobernador, un concepto de la Medicina Tradicional China (MTC) que se refiere al meridiano principal que corre a lo largo de la línea media de la cara posterior del cuerpo. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

figure-results-4
Figura 4: Operación detallada de incrustación de subprocesos de Shenshu (BL 23). (A) La aguja se inserta rápidamente perpendicularmente en el punto de acupuntura a una profundidad de 0,25 cm por debajo del Shenshu (BL 23). (B) Una vez que la punta de la aguja ha alcanzado una profundidad de 0,5 cm por debajo de la superficie de la piel, la aguja se redirige hacia el centro del punto de acupuntura, creando un ángulo de 45° con la piel, y luego se inserta oblicuamente a una profundidad de 0,5 cm. (C) Mientras se avanza el eje de la aguja, el tubo se retrae, asegurando la implantación completa de un segmento de 0,5 cm de sutura quirúrgica absorbible en el tejido muscular en el Shenshu (BL 23) Punto de acupuntura. Abreviaturas: BL = Vejiga, significa el meridiano de la vejiga, que en la MTC corresponde al meridiano Foot-Taiyang, uno de los seis meridianos yang, que corre a lo largo de la parte posterior del cuerpo y las piernas. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

figure-results-5
Figura 5: Diagrama de flujo de la prueba WMW. El entrenamiento de adaptación previo al experimento se denomina Día 0, durante el cual se observan las capacidades motoras de las ratas y se analiza estadísticamente la velocidad de nado. A esto le sigue una fase de navegación de lugares de cinco días (Días 1 a 5), donde se compara y analiza la latencia para escapar (latencia de escape) entre los diferentes grupos. El día 6, se lleva a cabo una prueba de sondeo espacial para evaluar el tiempo que se pasa en el cuadrante objetivo (tiempo de permanencia del cuadrante objetivo) y el número de cruces de plataforma. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

figure-results-6
Figura 6: Comparación de la velocidad de natación (m/s) entre grupos. Esta figura delinea las velocidades medias de natación (en metros por segundo) de las ratas en varios grupos experimentales, cada uno compuesto por seis animales (n = 6). Las barras de error muestran la desviación estándar. No se obtuvieron diferencias entre los grupos, como lo indica ns (p > 0,05). El análisis estadístico se realizó con el programa SPSS, con todos los datos ajustados a una distribución normal. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

figure-results-7
Figura 7: Los resultados de la navegación de lugares de WMW. (A) Este panel presenta los diagramas representativos de la trayectoria del movimiento, que ilustran las trayectorias de navegación de las ratas dentro de cada grupo experimental durante las pruebas de navegación en el lugar. (B) La latencia de escape, medida en segundos (s), se compara entre los grupos, y cada grupo consta de seis ratas (n = 6). El análisis estadístico se realizó utilizando ANOVA de medidas repetidas de dos vías para evaluar los efectos dentro de los sujetos en el transcurso de los ensayos de navegación y las diferencias entre sujetos entre los grupos. Los datos cumplen con los supuestos de distribución normal y se representan como la media del grupo ± la desviación estándar. Las diferencias significativas se indican con asteriscos (*p < 0,05, **p < 0,01) en comparación con el grupo de control y con hashtags (#p < 0,05, ##p < 0,01) en comparación con el grupo modelo. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

figure-results-8
Figura 8: Los resultados del rastro de la sonda de WMW. (A) El panel muestra diagramas representativos de trayectoria de movimiento que capturan los comportamientos de exploración espacial de las ratas en la prueba de sonda dentro de cada grupo experimental. (B) Este gráfico compara el tiempo de permanencia (en segundos, s) dentro del cuadrante objetivo entre los grupos, lo que refleja la retención de memoria de las ratas de la ubicación de la plataforma. (C) El gráfico ilustra la frecuencia (frecuencia) con la que las ratas cruzaron el área de la plataforma, lo que indica su rendimiento de memoria espacial. Cada grupo estaba compuesto por seis ratas (n = 6), y los datos se analizaron estadísticamente utilizando ANOVA de un factor para evaluar las diferencias entre los grupos. Los datos se adhieren a una distribución normal y se presentan como la media ± la desviación estándar. Las diferencias significativas se indican con asteriscos (**p < 0,01) en comparación con el grupo de control y con hashtags (#p < 0,05, ##p < 0,01) en comparación con el grupo modelo. **p < 0,01 frente al grupo de control, #p < 0,05 frente al grupo de modelos, ##p < 0,01 frente al grupo de modelos. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

figure-results-9
Figura 9: Evaluación de la tinción de hematoxilina y eosina de la región CA1 del hipocampo en grupos de ratas con un aumento de 200x. (A) El grupo de control exhibe una estructura neuronal típica con células piramidales bien conservadas. (B) El grupo modelo muestra alteraciones patológicas pronunciadas, caracterizadas por una marcada disminución en la densidad de células piramidales, neuronas degeneradas teñidas oscuramente y disposición desordenada. (C) El grupo TEAT muestra una arquitectura hipocampal mejorada, con un mayor número de células piramidales que son más ordenadas y poseen una morfología más normativa. A pesar de la condensación nuclear ocasional, las células están más densamente empaquetadas, exhiben una tinción citoplasmática uniforme y muestran una reducción significativa en el edema pericelular. Se observa notablemente la presencia de células piramidales normativas. Barra de escala = 50 μm. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tiempo de intervención
La etiología de la EA es compleja y su patogenia sigue siendo incierta. En la actualidad, no existe un tratamiento eficaz para la enfermedad y su curso es irreversible. Por lo tanto, la comunidad académica ha llegado a un consenso sobre la importancia de centrarse en la prevención y el tratamiento de la EA. Las estrategias de prevención y tratamiento de la EA hacen hincapié en la intervención temprana, siguiendo el concepto de la MTC de tratar las afecciones antes de que ocurran, haciendo hincapié en el tratamiento antes de su aparición, transmisión y recurrencia. La investigación acumulada en humanos29,30 y roedores31,32 ha demostrado que la acupuntura temprana y la intervención de moxibustión pueden lograr resultados significativos sin efectos secundarios aparentes, lo que la convierte en un método potencial prometedor para prevenir y tratar la EA. Por lo tanto, este estudio administró tratamiento durante el proceso de modelado. La TEAT se implementó al inicio de la inyección intraperitoneal de D-gal.

Selección del punto de acupuntura
La EA es una enfermedad neurodegenerativa grave que afecta principalmente a las regiones del cerebro responsables de la memoria, el lenguaje, el razonamiento y el comportamiento social. El cerebro (Nao) se considera el mar de médula (Sui) en la medicina tradicional china. La médula (Sui) está hecha de esencia (Jing), una sustancia única en la medicina tradicional china que se cree que es la fuerza constitucional, la vitalidad y la resistencia esenciales del cuerpo. La esencia (Jing) se almacena principalmente en los riñones (Shen). Si la esencia del riñón (Shen Jing) es débil, el cerebro (Nao) puede carecer de nutrición y puede producirse un deterioro cognitivo. Por lo tanto, la medicina tradicional china sugiere que tonificar los riñones y beneficiar la esencia (Jing) puede ayudar a mejorar la función cerebral. El cerebro puede verse directamente influenciado por ciertos meridianos, como el vaso gobernador (GV) y el meridiano de la vejiga del pie Taiyang (BL), a medida que ingresan al cerebro. La combinación del vaso regulador (GV) y el meridiano vesical del pie Taiyang (BL) utilizada para la prevención y el tratamiento de la EA es muy utilizada33,34. Baihui (GV 20) es un punto de acupuntura ubicado en el vértice de la cabeza y es parte del vaso Gobernador. De acuerdo con la literatura, en los estudios que utilizan la acupuntura y la moxibustión para la prevención y el tratamiento de la EA, el Baihui (GV 20) tiene la mayor frecuencia de ocurrencia y se considera un punto crítico en la fórmula35. El Shenshu (BL 23) es un punto de acupuntura en el meridiano de la vejiga del pie Taiyang. Se localiza 1,5 cun lateral al borde inferior de la apófisis espinosa de la segunda vértebra lumbar. A medida que el riñón regresa al punto Shu, puede fortalecer todos los aspectos de los riñones, incluidos el yin renal, el yang, la esencia (Jing) y el qi. La acupuntura y la moxibustión en Baihui (GV 20) y Shenshu (BL 23) pueden mejorar la función cognitiva y aliviar los síntomas de la EA de varias maneras36,37.

Tiempo de intervalo
Las normas de funcionamiento del TEAT38 dictan que el intervalo de tratamiento y el curso del tratamiento deben determinarse en función de la condición de la enfermedad y el sitio de operación seleccionado, con un intervalo de 1 semana a 1 mes. El curso del tratamiento puede variar de 1 a 5 veces. Esta sugerencia también se puede seguir en la investigación con animales de experimentación. Con base en la literatura revisada39, el tratamiento se administra generalmente una vez a la semana o cada 2 semanas, y en la mayoría de los casos se incluyen de 4 a 8 tratamientos consecutivos. El experimento duró 49 días, durante los cuales los hilos se enterraronlos días 14, 28 y 42.

Herramienta y métodos
En la actualidad, se utilizan varias herramientas de incrustación de hilos en la investigación experimental con animales. Entre ellas se encuentran las agujas desechables de inserción de hilo n.º 740 o n.º 941, las agujas reinventadas y la aguja de punción lumbar n.º 1242. Las agujas reinventadas utilizan jeringas n.º 5-7 como tubo y una aguja filiforme adecuada para el núcleo de la aguja. La punta de la aguja ha sido previamente alisada. Por ejemplo, en un estudio con ratas SD que pesan 250 ± 20 g (edad del mes no especificada en el texto), elija la jeringa No.7 y la aguja filiforme de 0,30 x 0,40 mm43,44. Sin embargo, las agujas reinventadas deben desinfectarse estrictamente, por lo que no se pueden usar ampliamente. Si la punta de la aguja es demasiado grande o afilada, puede dañar los vasos sanguíneos y los nervios, lo que aumenta la probabilidadde hematomas. Las agujas de punción lumbar, que tienen un diámetro grande y puntas afiladas, son más propensas a dañar los vasos sanguíneos y los nervios. La aguja de inclusión desechable es la más utilizada en la práctica clínica39. Es más cómodo de usar y más seguro de operar en comparación con las agujas reinventadas y las agujas de punción lumbar, lo que lo hace ideal para la tetina. Además, el objetivo del experimento es mejorar la salud humana. Por lo tanto, los estudios en animales deben reflejar la situación clínica. Por lo tanto, es aconsejable utilizar agujas desechables para incrustar hilos como herramientas para incrustar hilos.

El catgut fue el principal material de hilo utilizado en el TEAT, pero debido al rechazo de los tejidos y a los ingredientes de origen animal, ha sido sustituido por suturas quirúrgicas biosintéticas absorbibles. Las suturas están disponibles en varios tamaños y deben coincidir con la aguja, como la n.º 7 para suturas 4-0 o 3-0. En la investigación con animales, se utilizan principalmente 3-041, 4-046 y 5-047 . La mayoría de las suturas miden entre 1 y 2 cm de largo. Sin embargo, los roedores tienen cuerpos mucho más pequeños que los humanos, por lo que no hay un tamaño apropiado para su tamaño corporal. Por lo tanto, los investigadores deben cortar las suturas en segmentos de 0,2-0,5 cm para que sean adecuadas para los roedores. Por lo tanto, se recomienda que las suturas se enjuaguen con agua destilada limpia y estéril o solución salina después del corte y antes del remojo para su uso posterior o aplicación inmediata para reducir el riesgo de infección46.

Algunos estudios han propuesto requisitos detallados para el método de incrustación, como la inserción rápida de agujas en el punto de acupuntura desde aproximadamente 0,5 cm por debajo del punto de acupuntura hacia el punto de acupuntura48. Esto es importante porque los roedores son pequeños. Además de tener abundante tejido muscular en sus extremidades inferiores, su tejido subcutáneo y capas musculares en la cabeza, la espalda y el abdomen son relativamente débiles. Por lo tanto, es necesario enfatizar aquí la cuestión de los puntos de inserción y el ángulo de inserción de la TEAT en la investigación con animales. Al realizar el TEAT en las extremidades inferiores de los roedores, es factible la punción directa en los puntos de acupuntura. En cuanto al cuerpo, se recomienda insertar la aguja por debajo de los puntos de acupuntura (la distancia se puede ajustar de manera flexible según la longitud del cuerpo del hilo) utilizando una aguja oblicua (<45°) o una punción plana (<15°) para evitar daños en los órganos internos.

Potencial del TEAT para la prevención y el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer
Recientemente, están surgiendo investigaciones sobre el TEAT, aunque sus efectos y mecanismos siguen siendo esquivos. Como se mencionó anteriormente, el TEAT puede mejorar los factores de riesgo relacionados con la EA, como la obesidad 13,14, la diabetes15, el insomnio16, la osteoporosis posmenopáusica17 y la depresión18. Tiene un efecto beneficioso sobre el deterioro del aprendizaje y la memoria en ratas VD19. TEAT regula el metabolismo de los lípidos a través de la vía PPAR para mejorar la lesión tisular en ratas fatigadas inducidas por el ejercicio49 y ejerce efectos antiinflamatorios y analgésicos en ratones inducidos por el estrés por frío intermitente a través de la vía TRPV150. En el presente estudio, demostramos que el tratamiento de incrustación de hilos en ratas similares a la EA podría aliviar las deficiencias del aprendizaje y la memoria al mejorar la pérdida de memoria espacial y reducir las células degeneradas en las regiones CA1 del hipocampo. Sin embargo, debido a la falta de uniformidad y estandarización de la investigación actual en varios elementos críticos del funcionamiento de TEAT, incluido el método de incrustación, la herramienta de incrustación, el hilo y el período de intervalo de incrustación, este artículo analiza principalmente los elementos operativos críticos de TEAT en la investigación experimental. Esta investigación fue solo una exploración preliminar del efecto de la TEAT en la EA, que requirió mucho más complemento y mejora para aclarar la molécula exacta y la interacción entre ellos. Sin embargo, ofreció una nueva prueba para el inevitable proceso de EA, que de alguna manera puede aliviar la pesada carga sobre el sistema de salud pública.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Los autores declaran que no tienen nada que revelar.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este trabajo fue apoyado con fondos de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (NSFC) Nos. 82374564 (a YJD) y Nos. 82074566 (a YJD) y de la Base de Herencia Sun Guojie para la Acupuntura-Moxibustión de la MTC de la Federación Mundial de Sociedades de Acupuntura-Moxibustión en Wuhan, China (Federación Mundial de Sociedades de Acupuntura-Moxibustión [2019] No. 26) (a YJD) y el proyecto de construcción del Estudio de Herencia de la MTC Famosa Nacional de la Administración Nacional de Medicina Tradicional China, China (Administración Nacional de Medicina Tradicional China [2022] n.º 5) (a YJD).

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
0,9% solución salina, 4% paraformaldehído, hematoxilina, eosina Y (soluble en agua), etanol absoluto, 0,01M PBS en polvo, xileno, ácido clorhídrico, parafina incrustada, goma neutrasinopharm (www.sinopharm.com)
5-0 sutura quirúrgica absorbiblebodamedical (www.bodamedical.com)
70% alcohol, yodóforo, bolaSe utiliza para la desinfección.
hidrato de cloralSigmaC8383
cubreobjetos, portaobjetos de vidrioGuangzhou Wuqiang Experimental Equipment Co., Ltd
DeshidratadorWuhan Junjie JT-12J Deshidratador
ESTERA TÉRMICA DE TERMOSTATO DE LUJOZhenhua InstrumentsPara mantener la temperatura corporal de las ratas.
Recortadora
Se utiliza para afeitar ratas.
Báscula electrónica para animales pequeños (ZK-DST)Henan Zhike Information Technology Co., Ltd
ungüento de eritromicinafrontpharm
platoSe utiliza para colocar suturas absorbibles cortadas.
Olla de esterilización por vapor de alta presión (YM100Z)equipos médicos Sanshen de ShanghaiPara la esterilización de instrumentos quirúrgicos.
Máquina de hielo (CMB40)Shanghai Sheyan Instrument Co., Ltd.
Microscopio (BX-53)Leche
Se utiliza para la prueba MWM.
Sistema de seguimiento de video Morris Water Maze & Software de análisis de datos (versión: Watermaze 2.0)Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd
No.6 aguja de incrustación de hilobodamedical (www.bodamedical.com)
tijeras oftálmicas, bandejas, pinzas Microtomo
patología  (RM 2016)LEICA, Alemania
pentobarbitalAlemaniaP11011
marcadorSe utiliza para marcar el punto de acupuntura.
Cuchillos para cortar (R35)Plumas,
Se utiliza para lavarse las manos.
estériles
de algodón de tejidos biológicos computarizado de barba eléctrica para hombre D-galactose sigma G0750 de vidrio Fábrica de en polvo OLYMPUS de permanente jabón japonés guantes

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Huang, W., et al. Acupoint catgut embedding for obesity: A protocol systematic review. Medicine (Baltimore). 99 (51), e23728(2020).
  2. Zhou, M., et al. Acupoint catgut embedding improves senescence in a rat model of ageing by regulating mitophagy via the pink1 pathway. J Cell Mol Med. 25 (8), 3816-3828 (2021).
  3. Zhang, X., et al. Acupoint catgut-embedding therapy: Superiorities and principles of application. Zhongguo Zhen Jiu. 32 (10), 947-951 (2012).
  4. Lin, J., Deng, Q. Observation on therapeutic effect of 160 cases of epilepsy treated with acupoint catgut embedding therapy. Zhongguo Zhen Jiu. 36 (11), 14-15 (2001).
  5. Li, L. Acupuncture combined with catgut embedding therapy for treatment of 158 cases of facial paralysis. Zhongguo Zhen Jiu. 25 (3), 23-24 (2005).
  6. Wang, J., Wu, Z., Huo, J., Yuan, Y. Questionnaire investigation on cost-effectiveness analysis of acupuncture for migraine. Zhongguo Zhen Jiu. 35 (4), 377-383 (2015).
  7. Huang, L., Pan, W. Comparation of effect and cost-benefit analysis between acupoint catgut-embedding and electroacupuncture on simple obesity. Zhongguo Zhen Jiu. 31 (10), 883-886 (2011).
  8. Jack, C. R., et al. Tracking pathophysiological processes in alzheimer's disease: An updated hypothetical model of dynamic biomarkers. Lancet Neurol. 12 (2), 207-216 (2013).
  9. Sperling, R. A., et al. Toward defining the preclinical stages of alzheimer's disease: Recommendations from the national institute on aging-alzheimer's association workgroups on diagnostic guidelines for alzheimer's disease. Alzheimer's Dementia. 7 (3), 280-292 (2011).
  10. Guzman-Martinez, L., et al. New frontiers in the prevention, diagnosis, and treatment of alzheimer's disease. J Alzheimers Dis. 82, S51-S63 (2021).
  11. Yang, W. T., et al. Chinese herbal medicine for alzheimer's disease: Clinical evidence and possible mechanism of neurogenesis. Biochem Pharmacol. 141, 143-155 (2017).
  12. Zhao, J. L., Yang, J., Ding, L., Wang, F., Lin, L. A review of the pathogenesis and chinese medicine intervention of alzheimer's disease. J Integr Neurosci. 22 (1), 2(2022).
  13. Chen, I. J., Yeh, Y. H., Hsu, C. H. Therapeutic effect of acupoint catgut embedding in abdominally obese women: A randomized, double-blind, placebo-controlled study. J Womens Health (Larchmt). 27 (6), 782-790 (2018).
  14. Zhang, X., et al. Effect of catgut embedding at acupoints versus non-acupoints in abdominal obesity: A randomized clinical trial. J Tradit Chin Med. 43 (4), 780-786 (2023).
  15. Xia, T., Yang, Y., Li, W., Tang, Z., Guo, Y. Acupoint catgut embedding for diabetic gastroparesis: A protocol of systematic review. Medicine (Baltimore). 98 (43), e17718(2019).
  16. Xu, F., et al. Acupoint catgut embedding alleviates insomnia in different chinese medicine syndrome types: A randomized controlled trial. Chin J Integr Med. 25 (7), 543-549 (2019).
  17. Shi, N., et al. Effects of acupoint catgut embedding on the postmenopausal osteoporosis patients and related mechanism. Am J Transl Res. 13 (3), 1789-1798 (2021).
  18. Li, Y., Zhou, J., Wei, Z., He, X., Kejimu, S. The efficacy and safety of acupoint catgut embedding therapy for depression: A protocol for systematic review and meta-analysis. Front Psychiatry. 14, 1331780(2023).
  19. Zhu, S., et al. Acupoint catgut embedding improves learning and memory impairment in vascular dementia rats. Ann Transl Med. 11 (2), 108(2023).
  20. Yu, C. C., et al. Preventive electroacupuncture ameliorates d-galactose-induced alzheimer's disease-like pathology and memory deficits probably via inhibition of gsk3β/mtor signaling pathway. Evid Based Complement Alternat Med. 2020, 1428752(2020).
  21. He, C., et al. Preventive electroacupuncture ameliorates d-galactose-induced alzheimer's disease-like inflammation and memory deficits, probably via modulating the microbiota-gut-brain axis. Iran J Basic Med Sci. 24 (3), 341-348 (2021).
  22. Hong, X. P., et al. Puerarin ameliorates d-galactose induced enhanced hippocampal neurogenesis and tau hyperphosphorylation in rat brain. J Alzheimers Dis. 51 (2), 605-617 (2016).
  23. Gao, S., Li, R., Tian, H. H. Research progress of Shenshu (BL 23). Zhongguo Zhen Jiu. 37 (8), 845-850 (2017).
  24. Su J, S. K., Wyss, J. m Sripanidkulchai B. Curcuma comosa improves learning and memory function on ovariectomized rats in a long-term morris water maze test. J Ethnopharmacol. 130 (1), 70-75 (2010).
  25. Gage Gj, K. D., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. J Vis Exp. (65), e3564(2012).
  26. Jacobowitz, D. M. Removal of discrete fresh regions of the rat brain. Brain Res. 80 (1), 111-115 (1974).
  27. Vorhees, C. V., Williams, M. T. Assessing spatial learning and memory in rodents. Ilar j. 55 (2), 310-332 (2014).
  28. Zhou, J., et al. Methodology of morris water maze for detecting animal learning and memory levels. Chinese Journal of gerontology. 37 (24), 4(2017).
  29. Wang, Y., et al. Effectiveness and safety of acupuncture for the treatment of Alzheimer's disease: A systematic review and meta-analysis. Front Aging Neurosci. 12, 98(2020).
  30. Jia, Y. J., et al. Acupuncture for patients with mild to moderate alzheimer's disease: A randomized controlled trial. BMC Complement Altern Med. 17 (1), 556(2017).
  31. Yu, C. C., et al. Experimental evidence of the benefits of acupuncture for alzheimer's disease: An updated review. Front Neurosci. 14, 549772(2020).
  32. Zheng, X., et al. Electroacupuncture ameliorates beta-amyloid pathology and cognitive impairment in alzheimer disease via a novel mechanism involving activation of tfeb (transcription factor eb). Autophagy. 17 (11), 3833-3847 (2021).
  33. Hu, J., Zhao, J., Lu, M., Li, Z. Treatment of alzheimer's disease by using "tongdu qishen" acupuncture therapy. World Science and Technology-Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica. 22 (8), 2634-2640 (2020).
  34. Liang, X., et al. Visualization analysis of literature on acupuncture-moxibustion treatment of alzheimer's disease based on citespace. World Science and Technology-Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica. 24 (10), 3998-4006 (2022).
  35. Xia, Y. W., et al. Acupoint selection rules in treating alzheimer's disease with acupuncture and moxibustion in china and abroad based on data mining. Journal of Yunnan University of Chinese Medicine. 44 (02), 46-52 (2021).
  36. Zhang, H., Zhu, M., Zhang, W. Effects of serum acetyl choline and amyloid-beta protein by using acupuncture baihui ( gv20) and yongguan ( ki1) acupoint to treat patients with alzheimer disease. World Chinese Medicine. 13 (11), 2855-2857 (2018).
  37. Wang, Y. Y., et al. effect of electroacupuncture of different acupoint groups on learning-memory ability and expression of il-1β and tnf-α in hippocampus and prefrontal cortex in rats with alzheimer's disease. Zhen Ci Yan Jiu. 45 (8), 617-622 (2020).
  38. Guan, L., Zuo, F., Song, Q., Shi, X. study on standardization of thread-embedding technique: Elucidation on the establishment of the national standard standardized manipulation of acupuncture and moxibustion, part x, thread-embedding. Zhongguo Zhen Jiu. 29 (5), 401-405 (2009).
  39. Cheng, L., et al. bibliometric analysis on key elements of clinical application of acupoint catgut embedding therapy in recent ten years. Zhen Ci Yan Jiu. 47 (9), 830-836 (2022).
  40. Dan, Y. Experimental study on the effects of acupoint thread burial and acupoint injection on insulin resistance and islet morphology in diabetic rats. Hubei University of Traditional Chinese Medicine. , (2015).
  41. Huang, Y. To investigate the regulation of th1/th2 balance in rats with allergic rhinitis by acting on dc at yingxiang acupoint thread burial. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. , (2020).
  42. Zhang, X. Y., Shen, L., Fan, H., Liao, Y., Liang, L. Influence of catgut implantation at acupoints on splenic lymphocyte nuclear factor (nf-κb p65) and correlated signaling molecules (β2ar) in rats with experimental colitis. World J Acupuncture-Moxibustion. 20 (4), 48-53 (2010).
  43. Yu, Q. H. Experimental study on the effect of acupoint thread insertion combined with moxibustion on il-6/jak/stat3 signaling pathway in rats with ulcerative colitis. Guizhou Medical University. , (2020).
  44. Wang, Y. J., et al. Effect of moxibustion combined with acupoint catgut embedding on il-6/jak/stat3 signaling pathway in colonic mucosa of ulcerative colitis rats. Zhen Ci Yan Jiu. 47 (6), 525-530 (2022).
  45. Ke, C., et al. Application development of acupoint embedding line body and needle. China J Tradl Chinese Med Pharm. 35 (11), 5644-5647 (2020).
  46. Yue, Y. R., et al. Regulatory effect of acupoint thread-embedding therapy at the shu points of the five organs on the hypothalamic-pituitary-adrenocortical axis in senescent rats under stress. Hunan J Tradl Chinese Med. 34 (05), 180-182 (2018).
  47. Bao, J. Experimental study on the intervention of acupoint thread insertion in the expression of bcl-2 and bax in cochlear spiral ganglion cells in presbycus mice. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. , (2019).
  48. Liu, M. Effect of acupoint thread insertion on nasal mucosa th1/th2, treg/th17 in rats with allergic rhinitis. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. , (2013).
  49. Song, Y., et al. Acupoint catgut embedding improves lipid metabolism in exercise-induced fatigue rats via the ppar signaling pathway. Animals (Basel). 13 (4), 558(2023).
  50. Lai, P. C., Yen, C. M., Hsiao, I. H., Chen, Y. H., Lin, Y. W. Acupoint catgut embedding diminishes fibromyalgia pain through trpv1 in the mouse brain. J Integr Neurosci. 22 (4), 97(2023).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Thread Embedding TherapyAcupuncture TherapyAlzheimer DiseaseLearning And MemoryMorris Water MazeAcupoint SelectionBiodegradable SutureAnimal ModelSpatial MemoryHistological Examination

Related Articles