Procedimiento de operación y precauciones de la terapia con aguja de fuego de Lingnan en ratas modelo de osteoporosis

La medicina china cree que factores como el clima y el medio ambiente pueden afectar el físico de una persona, lo que a su vez afecta la aparición y el desarrollo de enfermedades. La región de Lingnan de China, que incluye principalmente Guangdong, Guangxi y la isla de Hainan, se encuentra en la región de clima monzónico tropical. Como resultado, las personas que viven en esta región durante mucho tiempo son propensas a una forma de deficiencia de bazo. En algunos casos, se disemina al riñón y al hígado, lo que lleva a la prevalencia de osteoporosis¹. El bazo y el estómago transportan y absorben el agua y los granos, que son la fuente de qi y bioquímica de la sangre, mientras que el hígado ayuda a mantener las médulas. Por lo tanto, la nutrición ósea se basa en el suministro del bazo, el estómago y el hígado. En la medicina china, el riñón es capaz de generar médula y fortalecer los huesos, y su vitalidad afecta directamente la fuerza y la función de los huesos. Por lo tanto, la insuficiencia renal está directamente relacionada con la osteoporosis. Según la medicina tradicional china, la deficiencia hepática (Gan)-riñón (Shen) y la falta de esencia (Jing) son las causas subyacentes. En algunos casos, la desnutrición puede ocurrir debido a una deficiencia del bazo (Pi) y del estómago (Wei) o a un desequilibrio de ambos. Es decir, la deficiencia del hígado (Gan), los riñones (Shen), el bazo (Pi) y el estómago (Wei) son las causas principales, mientras que el qi externo (Xie qi) bloquea los meridianos y daña los huesos y los músculos. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), la OP es una condición médica caracterizada por una baja masa ósea y deterioro de los tejidos², lo que constituye una grave preocupación para las personas mayores. La selección de las intervenciones adecuadas es crucial para la prevención y el tratamiento de la osteoporosis.

Los acupunturistas modernos han desarrollado una característica única de la terapia con punción de fuego al combinar el clima de Lingnan y las características físicas de^{la gente} Lingnan. La terapia con agujas de fuego es un tipo de método de tratamiento en el que se queman agujas especiales de color rojo y se perforan rápidamente en partes específicas o puntos de acupuntura del cuerpo humano para tratar diversas dolencias. Este método es ampliamente utilizado en enfermedades de la piel, enfermedades musculoesqueléticas y articulares, enfermedades neurológicas y otras enfermedades sistémicas y muestra buena eficacia⁴. El tratamiento de la osteoporosis con agujas de fuego se ha utilizado en las clínicas durante mucho tiempo y tiene un mejor efecto curativo que la simple acupuntura o la administración oral de la medicina tradicional china ^5,6,7. La terapia con agujas de fuego de Lingnan integra acupuntura, agujas de tres filos y moxibustión cicatricial. Puede mejorar el qi y la circulación sanguínea en los meridianos mientras calienta el riñón. Este tratamiento puede tratar tanto la estasis sanguínea como la deficiencia renal (Shen), que contribuyen a la patogénesis de la OP en la medicina tradicional china. Además, tiene las ventajas de ser de bajo costo, tener efectos rápidos, un período de tratamiento corto y ser seguro. Sin embargo, hay una falta de investigación sobre su mecanismo. Este artículo presenta un procedimiento específico de la aguja de fuego de Lingnan en ratas modelo con osteoporosis y proporciona una base metodológica para llevar a cabo la investigación básica relacionada.

Todos los experimentos se llevaron a cabo siguiendo la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio de los Institutos Nacionales de Salud y fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Medicina Tradicional China de Hubei. Para la prueba se utilizaron ratas hembras adultas de Sprague-Dawley (SD), con un peso de 220 ± 20 g. Todas las ratas se mantuvieron en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h a 23 ± 1 °C y 40%-50% de humedad, con libre acceso a comida y agua.

1. Preparación preoperatoria

1. Diseño de grupos
   1. Después de genotipificar 30 ratas hembras de 3 meses de edad, divídelas aleatoriamente en tres grupos (n = 10 en cada grupo): el grupo normal, el grupo modelo y el grupo de la aguja de fuego. Trate a las ratas en el grupo de agujas de fuego con intervención de agujas de fuego 1 vez al día durante 6 sesiones, con 1 día de descanso entre sesiones.
      NOTA: El grupo normal y el grupo modelo suspendieron la rata atada con un abrigo seguro de acuerdo con la misma frecuencia y la misma duración que el grupo de aguja de fuego, pero sin el tratamiento de aguja de fuego.
2. Preparación de un modelo de osteoporosis en ratas
   1. Para las ratas en el grupo modelo y en el grupo de aguja de fuego, se extirparon quirúrgicamente los ovarios para establecer un modelo de osteoporosis como se describe en ^8,9,10.
      1. Para la ovariectomía, administrar anestesia mediante inyección intraperitoneal de pentobarbital sódico al 2% (0,2 mL/100 g) antes de la operación, y considerar la anestesia exitosa cuando los animales no responden en un plano quirúrgico de anestesia basado en la falta de respuesta de una prueba de pinzamiento del dedo del pie. Use ungüento veterinario en los ojos para prevenir la sequedad mientras está bajo anestesia. Inyectar buprenorfina (0,05 mg/kg) por vía subcutánea como analgésico antes de la cirugía. Mantener las condiciones asépticas durante la operación.
         NOTA: Si la cirugía no se ha completado y la rata muestra signos de reanimación, la inyección intraperitoneal de solución sódica de pentobarbital al 2% puede suplementarse temporal y adecuadamente, y cada dosis suplementaria no excederá el 20% de la cantidad total inyectada.
      2. Después de la cirugía, coloque las ratas en una almohadilla térmica para animales pequeños y ajuste la temperatura a 32 °C. No deje a las ratas desatendidas hasta que recuperen la conciencia y puedan gatear libremente. No los devuelva a la compañía de otros animales hasta que se hayan recuperado por completo.
      3. Cuando las ratas hayan revivido, verifique que las suturas estén íntegras y vuelva a colocarlas en la jaula. Inyectar a todas las ratas por vía intramuscular penicilina sódica (50.000 U al día, durante 3 días) e inyectar por vía intraperitoneal 0,1 mL de solución de diclofenaco sódico al 0,05% (al día, durante 3 días) para prevenir la infección y acelerar la cicatrización ^9,10.
   2. Observe el ciclo estral de acuerdo con el frotis de células exfoliadas vaginales de ratas hembras como se describe en¹¹. Si el ciclo es desordenado, el modelo se establece con éxito¹¹.
      NOTA: Las ratas tardan aproximadamente de 8 a 12 semanas en desarrollar osteoporosis después de la ovariectomía.
3. Selección de herramientas de aguja
   1. Compre agujas de fuego de los fabricantes de dispositivos médicos. Asegúrese de que las herramientas de aguja estén hechas de aleación de tungsteno y manganeso, que sea resistente a la temperatura, no sea maleable, no sea fácil de deformar y se caliente uniformemente. La aguja de fuego tiene la forma de una aguja de filamento. Asegúrese de que la aguja sea gruesa, que la punta esté afilada y recta, y que el mango esté envuelto con alambre de cobre, que es aislante del calor y no quema las manos.
   2. Elija una aguja de fuego de una sola cabeza con un tamaño de 0,40 mm x 13 mm porque las ratas son pequeñas. Compruebe si la aguja de fuego tiene púas y grietas.
      NOTA: En la práctica clínica, la mayoría de las agujas de fuego utilizadas son las desarrolladas por He Puren, maestro médico nacional¹². Con base en esto, Lin Guohua creó la Aguja de Fuego de Cabeza Larga Lingnan y la Aguja de Fuego de Tres Cabezas Lingnan¹³. Elija diferentes tamaños de agujas de fuego según la necesidad del experimento.
4. Selección y posicionamiento de los puntos de acupuntura
   1. De acuerdo con los datos y la literatura relevantes, seleccione puntos de acupuntura para el tratamiento de la osteoporosis posmenopáusica.
      NOTA: Los puntos de acupuntura más utilizados son, en orden de frecuencia, Shenshu (BL 23), Zusanli (ST 36), Pishu (BL 20), Xuanzhong (GB 39) y Dazhu (BL 11)^14,15. En la investigación básica sobre la intervención de la acupuntura para la osteoporosis en ratas modelo deovulatorias, los puntos de acupuntura más utilizados son Shenshu (BL 23), Sanyinjiao (SP 6), Guanyuan (CV 4) y Zusanli (ST 36)16,17,18.
   2. Determine los puntos de acupuntura seleccionados para este experimento. Teniendo en cuenta los puntos de acupuntura seleccionados en estudios previos 14,15,16,17,18 y la patogenia de la osteoporosis, se seleccionaron cuatro puntos de acupuntura, a saber, Shenshu (BL 23), Pishu (BL 20), Zusanli (ST 36) y Sanyinjiao (SP 6), para este estudio. Estos corresponden al meridiano de la vejiga, el meridiano de Du, el meridiano del bazo y el meridiano del riñón.
      NOTA: Está prohibido el uso de agujas de fuego en partes con grandes vasos y troncos nerviosos.
   3. Afeita el sitio de acupuntura con una maquinilla eléctrica para mascotas antes de colocarla para exponer el punto de acupuntura.
   4. La ubicación de los puntos de acupuntura se refiere a los nombres y la ubicación de los puntos de acupuntura comúnmente utilizados en¹⁹. Localice los puntos de acupuntura de la siguiente manera: el Shenshu (BL 23) se encuentra en los dos lados inferiores de la segunda vértebra lumbar, a 6 mm de la línea dorsal media; el Pishu (BL 20) se encuentra entre las costillas en los dos lados inferiores de la^12ª vértebra torácica, a 6 mm de la línea dorsal media; el Zusanli (ST 36) se localiza en la cara posterior y lateral de la rodilla, a unos 3 mm por debajo de la pequeña cabeza del peroné; y Sanyinjiao (SP 6) se encuentra a unos 10 mm en línea recta desde la punta del tobillo interno de la extremidad trasera.
   5. Márcalos con un rotulador a base de aceite después de ubicar los puntos.
5. Método de sujeción de ratas
   NOTA: Con el fin de reducir el estrés durante la inmovilización y el tratamiento de las ratas, se eligieron como método de inmovilización las ratas suspendidas atadas con una capa^{de seguridad 20,21}. El método de suspensión de pelaje de rata tiene las siguientes ventajas: En primer lugar, aprovecha al máximo el hábito de la rata de preferir un ambiente oscuro y reduce la reacción de estrés de la rata durante la fijación. En segundo lugar, las ratas suspendidas son más silenciosas y cooperativas durante todo el proceso de tratamiento con agujas ignífugas debido a la falta de puntos de fuerza en sus extremidades y dedos de los pies. En tercer lugar, los puntos de acupuntura en la espalda y las extremidades de las ratas estaban lo suficientemente expuestos como para facilitar el tratamiento. Un solo tratamiento requiere sujetar a la rata durante 5-10 minutos. Cuando están seguras en el pelaje, las ratas no luchan en la sujeción y están tranquilas.
   1. Prepara el abrigo de rata. Cose la tela limpia y conviértela en un abrigo de rata en forma de tubo de 50 cm x 13 cm. Corta agujeros para cada una de las cuatro extremidades y la parte posterior del abrigo de rata y cose lazos en las cuatro esquinas.
   2. Póngase guantes, coloque la rata en una mesa que no sea resbaladiza, sostenga la cola de la rata con la mano izquierda y tire suavemente hacia atrás. Abre el puerto del abrigo de rata con la mano derecha. Usando el hábito de la rata de oscuridad y excavación, colóquelo en la boca del pelaje de la rata, la rata se enterraría en él por sí sola.
   3. Cuando la rata se entierre en el centro del pelaje de la rata, usa la mano izquierda para sostener ambos lados de los omóplatos de la rata y saca las dos extremidades delanteras de la rata con la mano derecha.
   4. Aprieta las cuerdas de la parte delantera del abrigo, cruza las cuerdas y envuélvelas alrededor del lomo de la rata. Ajusta la elasticidad de las cuerdas y ata el nudo en el lomo de la rata. Finalmente, fije el extremo posterior del cuerpo de la rata de manera similar para que sus extremidades traseras bilaterales se encuentren fuera del pelaje de la rata.
   5. Para la suspensión tipo columpio, tome dos ganchos en S y engánchelos en el nudo en la parte posterior del abrigo de rata y enganche los ganchos en el marco de hierro. En este punto, la rata está suspendida de la tira de tela, en un estado ligeramente oscilante (Figura 1).
      NOTA: La altura de la tira de tela desde el suelo es de unos 70 cm, para que el experimentador sentado en un taburete pueda operar cómodamente y sin esfuerzo. Coloque un acolchado grueso en la superficie plana debajo de la rata como precaución si el animal se resbala.

2. Tratamiento de acupuntura

1. Desinfección
   1. Esterilice el área local con una solución desinfectante de yodóforo al 5% 3 veces antes de acupuntar. Agregue un aderezo con alcohol después de cada exfoliante de yodofor.
2. Agujas ardientes
   NOTA: Se deben tomar precauciones de seguridad para evitar quemaduras y lesiones.
   1. Tome las pinzas hemostáticas para recoger la bola de algodón, empapada con alcohol al 95%, con la mano izquierda y enciéndala con un encendedor.
   2. Sostenga el mango de la aguja con el pulgar, el índice y el dedo medio de la mano derecha en una posición ligeramente curvada, como si sostuviera un bolígrafo.
   3. Coloque la punta de la aguja y el cuerpo de la aguja sobre las bolas de algodón con alcohol y caliéntelo; Primero caliente el cuerpo de la aguja y luego caliente la punta de la aguja. Queme la aguja hasta que esté de color blanco brillante o rojo, dependiendo del propósito del tratamiento (Figura 2).
      NOTA: El cuerpo de la aguja debe estar completamente quemado de color blanco brillante o rojo, de lo contrario, afectará la eficacia de la acupuntura o causará infección postoperatoria y otros problemas.
3. Acupuntura
   NOTA: De acuerdo con la velocidad, la profundidad, el rango, el tiempo de retención de la aguja y el propósito del tratamiento, Lingnan Fire-Needle se puede dividir en varias técnicas operativas, como acupuntura puntual, acupuntura dispersa, acupuntura densa, acupuntura rápida y acupuntura lenta²². La clave para operar con Lingnan Fire-Needle es roja, precisa y rápida.
   1. Espere hasta que la aguja se queme de color rojo, aleje la aguja de la llama y manténgala por encima del punto de acupuntura.
   2. Apunte la punta de la aguja verticalmente al punto de acupuntura, perfore y tire rápidamente. Asegúrese de que todo el proceso se complete en 1 s.
   3. La profundidad de penetración de los puntos de acupuntura es de aproximadamente 1-2 mm, solo perfore la punta de la aguja al rojo vivo.
      NOTA: La profundidad de la acupuntura debe determinarse de acuerdo con la condición, la constitución, la edad, el grosor muscular del punto de acupuntura, la profundidad de los vasos sanguíneos y la distribución de los nervios.
   4. Perfora cada punto de acupuntura 3x-5x. Repita esto para todos los puntos de acupuntura (Figura 3).
      NOTA: Al realizar la operación, esté completamente concentrado y ágil. En el mismo procedimiento en una rata, se debe usar la misma aguja de fuego, y la aguja se vuelve a esterilizar mediante llama entre cada dos punciones; La aguja no debe colocarse hacia abajo ni quedar estéril.

3. Manejo post-acupuntura

1. Levante la aguja de fuego para separarla de la piel y sostenga una bola de algodón seca estéril para presionar el orificio de la aguja y evitar el sangrado. Después de la terapia con agujas de fuego, las ratas mostraron una movilidad sin problemas y sin complicaciones detectables.
   NOTA: Si se produce sangrado después de la punción de fuego, no es necesario detener el sangrado, simplemente limpie con una bola de algodón seca después de que se detenga naturalmente.

4. Recopilación y análisis de datos

1. Después de 6 ciclos de intervención con punción ignífuga, eutanasiar a las ratas mediante una inyección intraperitoneal alta de pentobarbital sódico (150-200 mg/kg). Recoger muestras de fémur y realizar microtomografías computarizadas²³.
2. Analice los datos estadísticamente, utilizando software de análisis. Mostrar las mediciones como media y analizar utilizando ANOVA de un factor, considerándose estadísticamente significativo p <0,05.

Los datos de la Tabla 1 muestran que, en comparación con el grupo normal, el grosor del hueso trabecular (Tb.Th), el número de hueso trabecular (Tb.N) y la fracción de volumen óseo del parámetro estático del hueso trabecular (BV/TV) en el grupo modelo se redujeron significativamente (p <0,05), y la separación del hueso trabecular (Tb.Sp) se elevó (p <0,05); lo que indica que la estructura ósea del hueso trabecular en las áreas enriquecidas con hueso trabecular de la epífisis femoral de la rata se alteró significativamente después de la deosteoporosis, lo que indica un daño evidente.

En comparación con el grupo modelo, el grosor trabecular, el número trabecular y la fracción del volumen óseo del fémur del parámetro estático trabecular en el grupo de acupuntura con fuego aumentaron significativamente (p <0,05) y la separación trabecular disminuyó (p <0,05). Esto sugiere que la terapia con aguja de fuego puede mejorar el daño a la estructura ósea esponjosa del fémur en ratas modelo con osteoporosis inducidas por la extirpación de hueso.

La Figura 4 muestra las imágenes tridimensionales de la estructura de la matriz esponjosa de hueso de rata en cada grupo. La Figura 4A es el grupo normal, la Figura 4B es el grupo modelo y la Figura 4C es el grupo de la aguja de fuego. Como se puede observar en la figura, en comparación con el grupo normal, en el grupo modelo se perdió un gran número de trabéculas en el centro e incluso en la periferia de la matriz esponjosa del fémur, y en la parte inferior apareció un gran número de cavidades. La continuidad general de la estructura ósea estaba dañada, con la aparición de parte de las trabéculas óseas libres. En comparación con el grupo modelo, hubo un gran aumento en el grosor de las trabéculas en el centro y la periferia del hueso esponjoso del fémur en el grupo de aguja de fuego, y mejoró la continuidad de la estructura ósea general. Esto sugiere que las agujas de fuego pueden proteger la estructura trabecular del hueso esponjoso del fémur en el modelo de rata de osteoporosis inducida por ovariectomía.

Figura 1: Método de fijación de ratas: columpio de ratas atadas con pelaje. Después de vestir a la rata con un abrigo de rata, la rata se asegura y se suspende en el aire enganchando el abrigo de rata con dos ganchos en S. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 2: Aguja de fuego Lingnan. (A) Herramientas de aguja. Elija una aguja de fuego fino con un tamaño de 0,40 mm x 13 mm. (B) Agujas ardientes. Coloque la punta de la aguja y el cuerpo de la aguja sobre las bolas de algodón empapadas en alcohol y caliéntelas. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 3: Procedimiento de acupuntura con aguja de fuego en cuatro puntos de acupuntura. (A) Pishu (BL 20): Ubicado entre las costillas en los dos lados inferiores de la12ª vértebra torácica, a 6 mm de la línea dorsal media (B) Shenshu (BL 23): Ubicado en los dos lados inferiores de la segunda vértebra lumbar, a 6 mm de la línea dorsal media (C) Zusanli (ST 36): Se localiza en la cara posterior y lateral de la rodilla, unos 3 mm por debajo de la pequeña cabeza del peroné. (D) Sanyinjiao (SP 6): Ubicado a unos 10 mm en línea recta desde la punta del tobillo interno de la extremidad trasera. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 4: Comparación de la estructura tridimensional del hueso esponjoso del fémur distal de ratas en varios grupos. (A) El grupo normal. B) El grupo modelo. (C) El grupo de la aguja de fuego. Barras de escala: 500 μm. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Tabla 1: Efecto de la aguja del fuego sobre los índices microestructurales de la osteoporosis femoral. Los datos muestran una media ± DE, n= 10. Para la comparación realizada con el grupo normal, *p<0,05; Para la comparación realizada con el grupo de modelos, Δp<0.05.

Los autores declaran que no tienen nada que revelar.