Este protocolo proporciona información técnica para la reconstrucción de vasos mediante la técnica del manguito en el trasplante hepático ortotópico de ratón.
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Artículo de método
Reconstrucción vascular con la técnica del manguito en el trasplante hepático ortotópico de ratón
En este artículo
Resumen
Resumen
El trasplante ortotópico de hígado en ratón es una metodología eficaz para investigar los mecanismos subyacentes de la isquemia hepática y la lesión por reperfusión. Sin embargo, los desafíos técnicos plantean una barrera para utilizar este valioso modelo experimental y transmitir estas habilidades a la próxima generación. El aspecto más desafiante de este procedimiento es la reconstrucción vascular, que incluye la vena porta (VP), la vena cava inferior infrahepática (IHIVC) y la vena cava inferior suprahepática. El uso de manguitos de plástico, en lugar de suturas, permite una reconstrucción más suave de la PV y la IHIVC. Los vasos se reconstruyen conectando un manguito hecho con un catéter intravenoso a la punta del vaso del injerto e interponiendo el manguito en el vaso receptor. Los dos aspectos más cruciales son visualizar correctamente el lumen interno del vaso y evitar el uso de fuerza excesiva. Nuestro objetivo es proporcionar una visión técnica de las reconstrucciones vasculares mediante la técnica del manguito en la cirugía del receptor. Se espera que estos consejos técnicos para la técnica del manguito ayuden a los microcirujanos a facilitar la reconstrucción vascular y avanzar en sus investigaciones.
Introducción
El trasplante ortotópico de hígado en ratón (MOLT) es un método experimental eficaz descrito por primera vez en 19911. Este modelo experimental, que utiliza ratones modificados genéticamente y varios reactivos de investigación, ha desempeñado un papel fundamental en la investigación de la isquemia fría y caliente y las lesiones por reperfusión. Sin embargo, la alta complejidad técnica del modelo ha dificultado el desarrollo de medicamentos básicos para el trasplante hepático2. La MOLT implica tres pasos principales: (1) recuperación del hígado del ratón donante, (2) cirugía de la mesa posterior y (3) implantación del híg....
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Protocolo
El protocolo experimental fue aprobado por el Comité de Experimentación Animal de la Universidad de Kioto. En el estudio se utilizaron ratones C57BL/6, con más de 10 semanas de edad y un peso de entre 25 g y 30 g, obtenidos de una fuente comercial (véase la Tabla de Materiales). Todos los animales fueron anestesiados con isoflurano al 2,5% (siguiendo protocolos aprobados institucionalmente), mantenidos en condiciones específicas libres de patógenos, y todos los procedimientos experimentales se llevaron a cabo de acuerdo con las Regulaciones de Experimentación Animal de la Universidad de Kyoto. Los instrumentos apropiados utilizados para el estudio se ....
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Resultados
La reconstrucción con VP es exitosa cuando, al desenganchar la vena porta, no hay tortuosidad y el hígado se perfunde uniformemente. El tiempo anhepático debe ser inferior a 20 min, ya que los tiempos anhepáticos superiores a 25 min aumentan el riesgo de mortalidad del ratón. La reconstrucción con IHIVC se considera exitosa si no hay regurgitación sanguínea del injerto.
El almacenamiento del injerto a temperaturas frías durante 1 h utilizando una solución de preservación de órganos da como res.......
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Discusión
El aprendizaje de la reconstrucción vascular es el aspecto más desafiante para lograr un MOLT exitoso. La calidad del manguito influye significativamente en la dificultad de la reconstrucción, dado el pequeño tamaño de los ratones5. Este artículo proporciona un protocolo detallado para la preparación, fijación y reconstrucción del manguito.
Si bien no hay diferencias importantes con respecto a los informes anteriores con respecto a la preparación.......
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Divulgaciones
Ningún autor tiene conflictos de interés que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue respaldado por la investigación básica JST 2022 (The Japanese Society for Transplantation).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| catéter intravenoso de 16 G | TERUMO | SR-FF2032 | manguito IHIVC |
| catéter intravenoso de 20 G | TÉRUME TORUME | SR-FF1651 | PV |
| 8-0 trenza de seda | Natsume Seisakusho | CR9-80B2 | 8-0 seda |
| Belzer UW Solución de almacenamiento en frío | Astellas | Líquido de conservación de órganos | |
| Pinza Bulldog | B BRAUN | FB329R Pinza | Bulldog |
| C57BL/6 ratones | Oriental Bio Service | ||
| Solución para inhalación de isoflurano | Viatris | Anesthesic | |
| Micro Puntas romas 0,1 mm x 0,06 mm | F.S.T | 11253-20 | Micropinzas rectas |
| Micro Serrefine Aplicador de pinza con bloqueo | F.S.T | 18056-14 | Aplicador de clip para vasos |
| Micro Serrefines | F.S.T | 18055-4 | Clip para recipiente |
| No.11 Cuchillas de repuesto | Maquinilla de afeitar de seguridad FEATHER | 11 | hojas |
| Tijera oftálmica, mango redondo | B BRAUN | FD103R | Microtijera |
| Contenedor de plástico de forma rectangular | Daiso | de 10 cm de largo, 15 cm de ancho y 6 cm de alto | |
| Puntas SuperGrip | F.S.T | 00649-11 | Micropinzas curvas |
| SZX7 | Olympus | SZX7 | Microscopio |
| Vise | Niigataseiki 00505351 | Una herramienta mecánica para asegurar pinzas de guisante en la mesa |
Referencias
- Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
- Yokota, S., et al. Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance. Na....
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Reimpresiones y permisos
