Técnicas para la toma rápida de muestras de seis órganos cruciales en Xenopus adulto

Resumen

Este artículo presenta una guía para tomar muestras de seis órganos significativos y diversos en Xenopus adultos a los que se puede acceder rápida y fácilmente: el ventrículo cardíaco, el lóbulo hepático, el páncreas, los cuerpos grasos, los riñones emparejados y la piel.

Resumen

Xenopus ha sido un poderoso organismo modelo para comprender el desarrollo y las enfermedades de los vertebrados durante más de cien años. Si bien las técnicas experimentales de análisis y disección del embrión han sido bien documentadas, las descripciones de las estructuras y órganos de Xenopus adultos, junto con las técnicas para trabajar con adultos, no se han actualizado para tener en cuenta los requisitos de enfoques modernos como la proteómica cuantitativa y la transcriptómica de una sola célula. Las perspectivas centradas en el tipo de célula y en los genes requieren observaciones contrastantes en las etapas embrionarias con las de los tejidos adultos. Los órganos de la larva experimentan cambios significativos en su estructura general, morfología y ubicación anatómica a lo largo de la transición de larva a adulto, sobre todo durante la remodelación masiva de la metamorfosis. Establecer estándares sólidos para la identificación y disección de órganos es crucial para garantizar que los conjuntos de datos resultantes de los estudios realizados en diferentes laboratorios puedan ser coherentes. El presente protocolo identifica seis de los órganos en el Xenopus adulto, demostrando métodos para la disección y la toma de muestras del ventrículo cardíaco, el hígado, el cuerpo graso, el páncreas, el riñón emparejado y la piel del Xenopus adulto. Dependiendo de los métodos de preservación, los órganos disecados se pueden utilizar para proteómica cuantitativa, transcriptómica de células individuales/núcleos, hibridación in situ , inmunohistoquímica, histología, etcétera. Este protocolo tiene como objetivo estandarizar el muestreo de tejidos y facilitar las investigaciones multilaboratorio de los sistemas de órganos adultos.

Introducción

Aunque la "disección digital" de Xenopus adulto^{está disponible 1}, el muestreo replicable de órganos y tejidos de Xenopus adulto sigue siendo un desafío sin las instrucciones detalladas disponibles para otros modelos adultos (por ejemplo, ratones ^2,3,4). Este artículo tiene como objetivo proporcionar una guía clara para el muestreo preciso y replicable de órganos de Xenopus adulto similar a lo que está disponible actualmente para sus larvas⁵. Se hace hincapié en la facilidad de finalización para mantene....

Protocolo

Todos los experimentos se realizaron de acuerdo con las normas y reglamentos del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IS 00001365_3) de la Escuela de Medicina de Harvard. Se muestran los resultados representativos tanto para un macho albino maduro perfundido como para un macho albino maduro no perfundido, Xenopus laevis.

1. Preparación experimental

NOTA: Si se sigue el protocolo^de perfusión 8 antes de la toma de muestras, vaya al paso 2.2.

1. Asegurarse de que la institución de investigación ha aprobado la técnica de eutanasia descrita en est....

Resultados

Al utilizar la Figura 1 a la Figura 20 y seguir todos los pasos de este protocolo, el ventrículo cardíaco, el lóbulo izquierdo del hígado, el páncreas, los cuerpos grasos izquierdos, los riñones emparejados y un colgajo de piel se extirparon limpiamente dentro de una hora después de la eutanasia. Dentro de este tiempo, las muestras se enjuagan y recortan para que aparezcan, como se muestra en la Figura 21.

Discusión

Como este protocolo tiene como objetivo maximizar la frescura, algunas muestras pueden incluir tejidos no deseados. Por ejemplo, el conducto hepatopancreático y parte del mesenterio se muestrean con el páncreas, y parte del tejido peritoneal, las glándulas suprarrenales y los uréteres siempre se muestrearán con los riñones emparejados.  Si la frescura no es una preocupación, se puede lograr un muestreo más preciso utilizando técnicas modificadas.

La apariencia y ubicación de los órganos son co.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
5 lupas con luz LED y soporte	amazon.com	B08QJ6J8P1	no debe producir calor
Pipetas de transferencia desechables	VWR	414004-036
Pinza de disección de punta fina	Fisher Scinetific	08-875
Tijeras de disección afiladas piont, rectas 6.5"	VWR	76457-374
Bandeja de disección	láminas de espuma de poliestireno	Fisher Scinetific	14-370-284
Contenedor de eutanasia	US Plastic	Artículo  2860	envases opacos alternativos aceptables
Tapa del contenedor de eutanasia Plástico	de EE. UU.	Artículo  3047
Tijeras de iridictomía 6"	VWR	470018-938	tijeras de iris son una alternativa aceptable
MS-222: Sincaína (antes tricaína)	Pentair AES	TRS1
PBS 1x	Corning	21-040-CV
Bicarbonato de sodio, en polvo, USP	Fisher Scientific	18-606-333
VWR dentado		82027-442
Pasadores en T para la disección	Fisher Scinitificic	S99385

luz Las son una alternativa aceptable Las Pinzas para muestras ,