Aquí, describimos la administración de fármacos guiada por micropipeta (MDA) como un método alternativo a la sonda nasogástrica oral que incentiva al animal de investigación a ingerir tratamientos fácilmente con un mínimo de estrés e incomodidad.
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Artículo de método
Uso de la administración de fármacos guiada por micropipetas como método alternativo a la sonda nasogástrica oral en modelos de roedores
En este artículo
Resumen
Resumen
La sonda nasogástrica oral (OG) con el uso de una cánula conectada a una jeringa es uno de los métodos más comunes utilizados para administrar una dosis precisa de compuestos al estómago de los animales de investigación. Desafortunadamente, este método presenta dificultades tanto para el operador como para el animal de investigación. Los estudios han demostrado que la OG puede provocar complicaciones, como esofagitis, perforación del esófago y administración inadvertida de fármacos traqueales. Además, la OG se asocia con un aumento de los niveles plasmáticos y fecales de corticosterona (debido al estrés), alteración de la presión arterial y aumento de la frecuencia cardíaca, lo que podría influir negativamente o sesgar los resultados del estudio. Un método alternativo desarrollado anteriormente, denominado administración de fármacos guiada por micropipetas (MDA), incentiva al animal a consumir tratamientos fácilmente de una manera mínimamente invasiva. En este trabajo, presentamos ejemplos del uso de la técnica MDA con tratamientos reconstituidos en diferentes vehículos y demostramos la administración efectiva de los variados tratamientos a múltiples cepas de ratones diferentes. Además, demostramos que el MDA es una técnica que disminuye el momento y la invasividad de la administración de fármacos y no afecta a la composición del microbioma intestinal evaluada mediante el análisis cuantitativo de las principales especies microbianas intestinales. En general, la MDA puede ofrecer una alternativa menos estresante y eficaz a la OG.
Introducción
La administración de fármacos a modelos de roedores se realiza comúnmente a través de sonda nasogástrica oral (OG), que consiste en administrar una preparación líquida directamente en el estómago utilizando una cánula conectada a una jeringa que contiene la solución. Esta técnica da como resultado una dosificación consistente y precisa del tratamiento para el animal, pero también conlleva múltiples desventajas. La OG ha sido examinada por no modelar adecuadamente las exposiciones dietéticas humanas 1,2. Además, la OG aumenta el riesgo de lesiones no intencionales en el sistema....
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Protocolo
Todos los estudios en animales se realizaron siguiendo las pautas institucionales y bajo los protocolos aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Johns Hopkins (IACUC, por sus siglas en inglés) M021M197 y M023M195. Las cepas de ratón utilizadas (ratones machos, de 7 semanas de edad) se describen en la Tabla de Materiales. El uso de ratones machos se debió a su uso en los estudios en curso sobre el cáncer de próstata. El método MDA ha demostrado previamente ser eficaz también en ratones hembra 7,17. Los ratones fueron ....
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Resultados
El MDA se puede utilizar en la administración oral de cepas bacterianas en modelos de ratón. Los ratones C57BL/6J fueron tratados con antibióticos (cefoxitina en el agua potable) durante 2 días para eliminar las comunidades microbianas comensales antes de comenzar la sesión de entrenamiento de MDA. La solución de leche condensada/agua azucarada se administró una vez al día consecutivamente durante 3 días antes de la administración del tratamiento. Los ratones fueron inmovilizados brevemente por un suave .......
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Discusión
La OG puede ser una fuente significativa de estrés en animales de investigación que puede crear una variable de confusión, como se evaluó previamente en múltiples estudios 7,9,11,12,13,14,15,23. Debido a la invasividad de l.......
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Agradecimientos
Nos gustaría agradecer el apoyo a la investigación del Premio del Programa de Investigación del Cáncer de Próstata del Departamento de Defensa W81XWH-20-1-0274 y el Premio Challenge de la Fundación del Cáncer de Próstata 16CHAL13. Nos gustaría agradecer y reconocer a la Dra. Michelle Rudek, el Dr. Noushin Rastkari, la Dra. Nicole Anders y Linping Xu del Recurso Compartido de Farmacología Analítica de Johns Hopkins por su asistencia con equol LC/MS/MS.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 200 y micro; Puntas de pipeta | L Mettler Toledo | 17005860 | |
| AB SCIEX Triple QTRAP 5500 detector de espectrometría de masas | Sciex | N/A | |
| Akkermansia muciniphila cepa muc ADN genómico | Type Culture Collection | BAA-835D-5 | |
| Acetato de amonio | Sigma– Aldrich | 5.43834 | |
| ratones C57BL/6J Cepa | Jackson Laboratories | 000664 | |
| C. scindens cepa 35704 | Colección de cultivos tipo americano | 35704 | |
| Cefoxitin | Sagent | NDC25021-109-10 | |
| Aceite de maíz | MedChemExpress | HY-Y1888 | |
| DMSO | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| etanol | Fisher Scientific | AC611050040 | |
| Ácido fórmico | Sigma– Aldrich | 5.33002 | |
| FVB/NJ | ratones Jackson Laboratories Cepa | # 001800 | |
| Glicerol | Sigma– Aldrich | G5516 | |
| Hexano | Fisher Scientific | 02-002-996 | |
| Agua de grado LC-MS | Fisher Scientific | 14-650-357 | |
| Metanol | Fisher Scientific | 02-003-340 | |
| Tubo separador de suero Microtainer | Becton Dickinson | 02-675-185 | |
| Agua de grado de biología molecular | Corning | 46-000-CI | |
| Ratones NSG | Jackson Laboratories | Strain # 005557 | |
| PBS | Corning | 21-031-CV | |
| Qubit DNA HS kit | Invitrogen | Q32851 | |
| Racemic equol-d4 | Santa Cruz Biotechnology | sc-219827 | |
| Agar Clostridial reforzado | Sistemas Anaerobios | AS-6061 | |
| Caldo Clostridial Reforzado | Sistemas Anaerobios | AS-606 | |
| S-equol | MedChemExpress | HY-100583 | |
| S-equol estándar de referencia para LC-MS | Cayman Chemical 10010173 | ||
| Single pipeta de canal | Rainin | 17008652 | |
| Streptococcus salivarius ADN genómico | Colección de cultivos | tipo americano BAA-1024D-5 | |
| Leche condensada azucarada | California Farms | B09TGQ7WV8 | |
| VSL#3 VSL | #3 | B07WX1LVHL | |
| β-glucuronidasa de Helix pomatia | Sigma– Aldrich | G7017 |
Referencias
- Vandenberg, L. N., Welshons, W. V., Vom Saal, F. S., Toutain, P. -L., Myers, J. P. Should oral gavage be abandoned in toxicity testing of endocrine disruptors. Environ Health. 13 (1), 46(2014).
- Craig, M. A., Elliott, J. F.
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Reimpresiones y permisos
