Este artículo presenta un protocolo para ejecutar el concepto de unidad de accidente cerebrovascular (mSU) altamente traslacional y probado de forma independiente en ratones de gran carrera. También proporciona un protocolo estandarizado para la ejecución de la escala focal experimental de ictus en ratones, que evalúa los déficits focales de ictus detectados incluso a largo plazo.
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Artículo de método
El protocolo de la Unidad de Accidente Cerebrovascular del Ratón con puntuación neurológica estandarizada para estudios traslacionales de accidente cerebrovascular del ratón
En este artículo
Resumen
Resumen
El modelo de filamento de oclusión de la arteria media (fMCAo) es quizás el modelo de accidente cerebrovascular de ratón más traslacional, ya que permite una isquemia controlada con reperfusión/recanalización intravascular. Sin embargo, no está alineado con los avances clínicos actuales para la atención del ictus (p. ej., las unidades de ictus), suele emplear puntuaciones neurológicas subjetivas o vagas entre los laboratorios y presenta una alta mortalidad en la fase aguda. Aquí, abordamos estas limitaciones con protocolos guiados por video validados. Presentamos el protocolo de la Unidad de Accidente Cerebrovascular del ratón (mSU) con videos instructivos y un algoritmo de decisión (Puntuación de estratificación del riesgo), cerrando la brecha entre el modelado clínico y el modelado del accidente cerebrovascular del ratón. Para aumentar la precisión y la sensibilidad de la puntuación neurológica del ictus, presentamos por primera vez un formato estandarizado en vídeo de la Escala Experimental del Ictus focal (fESS) y demostramos su valor hasta 6 meses después del ictus. Además, se presentan los protocolos para la prueba de peldaños de escalera en ratones, así como la conocida prueba de cilindro, para una evaluación cuantitativa e imparcial de la función motora de las extremidades. Los resultados ponen de manifiesto la eficacia traslacional de la mSU. La ESS focal (fESS) sobresale sobre otras escalas conocidas en la detección de déficits focales de accidente cerebrovascular, la captura de la recuperación y el mantenimiento de la sensibilidad hasta 6 meses después del accidente cerebrovascular. Las pruebas de peldaños y cilindros cuantifican y controlan objetivamente los déficits motores de las extremidades delanteras y traseras a largo plazo. En resumen, la integración de mSU, fESS y pruebas de función motora proporciona un marco sólido para las investigaciones de accidentes cerebrovasculares clínicamente relevantes. Nuestros protocolos mejoran el valor traslacional en la investigación de golpes de ratón.
Introducción
El accidente cerebrovascular isquémico grande es una de las principales causas de morbilidad y discapacidad en todo el mundo1. Aun así, la investigación sobre el ictus de ratón se enfrenta a un bloqueo traslacional en casi todos los tratamientos probados preclínicamente hasta el momento2. Las múltiples razones de este problema y los esfuerzos para superarlo han sido revisados en detalle en publicaciones anteriores2. Estos desafíos surgen de la limitada integración de los avances clínicos en modelos animales relevantes2 y de las debilidades ....
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Protocolo
Los experimentos reportados en este artículo se llevaron a cabo siguiendo las directrices nacionales y europeas para el uso de animales de experimentación y fueron aprobados por los comités gubernamentales griegos (Atenas, Licencia No "843895_06-09-2022").
1. La "unidad de trazo del ratón" (mSU)
- Evaluar diariamente el estado clínico del animal ("visitas") y calcular su puntuación RSS
- Imprimir el Archivo Suplementario 1, preferiblemente antes de la cirugía del animal, para el registro de datos y el seguimiento.
- Evalúe clíni....
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Resultados
La mSU, como se ha descrito anteriormente, comienza después de la operación fMCAo. Nuestros resultados representativos en las dos cohortes independientes de ratones con fMCAo accidente cerebrovascular y simulacro (Figura 4a) confirman el valor previamente demostrado de mSU, particularmente durante el período crítico entre los días 3 y 1013. En nuestras cohortes, la mortalidad se produjo en 3/15 animales de la cohorte 1 (ictus, 6 meses de seguimiento), 2/10 de la cohor.......
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Discusión
El presente protocolo es una guía completa del protocolo de soporte de mSU, diseñado para reducir la mortalidad artefactual entre los días 3 y 10 en ratones sometidos a grandes accidentes cerebrovasculares territoriales mediante el modelo fMCAo13. Además, el presente protocolo incluye una guía de video estandarizada para el componente focal de la escala ESS (fESS) para reducir la subjetividad extendida y el sesgo de la puntuación focal neurológica en ratones despu.......
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Divulgaciones
No hay divulgaciones que informar.
Agradecimientos
Nos gustaría agradecer a Nikolaos Plakopitis y Ioannis Tatsidis por su valioso apoyo quirúrgico durante partes del estudio.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tools para mSU | |||
| 5% de dextrosa | VIOSER S.A | na (no aplicable) | Cualquier |
| Termómetro digital sin contacto | AVRON | YTC20095 | Cualquier Termómetro digital GEGENERICON |
| KERN & Sohn Gmbh | FCB6K1 | Cualquier genérico | |
| Pellets de comida | Mucedola srl | na | Cualquier genérico, utilice la comida normal de su establo |
| de animales Placa calefactora | Photax | na | Photax lavavajillas 2 |
| Antiséptico líquido | Schü LKE & Mayr GmbH | na | Octenisept® |
| Batidora de | na | Para pulverización de pellets. Cualquier genérico | |
| Solución salina normal | DEMO S.A. | na | Inyección de cloruro de sodio 0,9% |
| Pinsetter y bastoncillos de | na | Cualquier genérico | |
| Azúcar | na | Cualquier | |
| Jeringas (1 ml) con aguja | na | Cualquier genérico. Para la administración de alimentos (sin aguja) y para la administración de líquidos subcutáneos (con aguja) | |
| Herramientas para ESS | |||
| 45 grados y superficie angulada | Hecho | de plexiglás u otro material, con superficie de goma, para pruebas de escalada | |
| hisopo de algodón | Cualquier genérico | na | bastoncillos de algodón de oreja comercial, haga que su punta de algodón sea larga y delgada |
| de madera afilado con filo | Cualquier genérico | na | , por ejemplo, palillos de dientes |
| Haz largo | Dimensiones | : 1 x 1 x1cm, aproximadamente 100cm de largo, madera. Coloque entre dos bordes de la mesa para la prueba de caminar por la viga | |
| Guante grueso | Cualquier genérica | na | para evitar traumatismos de los animales al caer de la viga |
Referencias
- Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. Stroke. Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).
- Lourbopoulos, A., et al. Translational block in stroke: A constructive and "out-of-the-box" reappraisal. Front Neurosci. 15, 652403(2021).
- Cai, R., et al.
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Reimpresiones y permisos
