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Artículo de método

Un modelo de estrés social integrado múltiple para trastornos psiquiátricos en ratones hembra C57BL/6J

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DOI:

10.3791/67117

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15 de julio de 2025

 ,  ,  ,  , 
1Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesiology, Xuzhou Medical University, 2Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesia and Analgesia Application Technology, Xuzhou Medical University, 3NMPA Key Laboratory for Research and Evaluation of Narcotic and Psychotropic Drugs, Xuzhou Medical University

En este artículo

Resumen

Mediante la integración de cuatro estresores sociales diarios, el presente estudio describe un modelo de estrés social integrado múltiple (MISS) para trastornos psiquiátricos en ratones hembra C57BL/6J. Después de diez días de exposición repetida a MISS, los ratones desarrollaron fenotipos depresivos y similares a la ansiedad, proporcionando así un modelo animal natural basado en la etiología para estudiar los trastornos psiquiátricos en sujetos femeninos.

Resumen

A pesar de que las hembras representan la mayoría de los individuos que sufren trastornos psiquiátricos, los estudios preclínicos se han centrado casi exclusivamente en sujetos masculinos, en parte debido a la falta de paradigmas ideales de animales femeninos. El desarrollo de modelos eficaces para el estudio de los trastornos psiquiátricos en animales hembra sigue siendo un reto científico de larga data en las ciencias de la vida. Recientemente se estableció un "modelo de estrés social integrado múltiple (MISS)" en ratones hembra C57BL/6J mediante la simulación e integración de factores de riesgo social que contribuyen al desarrollo de trastornos psiquiátricos. Para establecer este paradigma MISS, los ratones hembra C57BL/6J fueron sometidos aleatoriamente cada día, durante diez días consecutivos, a una secuencia de factores estresantes: fracaso de la competencia social en la prueba del tubo, estrés de derrota social vicaria modificado, estrés de hacinamiento ineludible y posterior aislamiento social. En comparación con los ratones ingenuos, los ratones expuestos a MISS exhibieron fenotipos depresivos y ansiosos, medidos por las pruebas de preferencia de sacarosa, suspensión de cola, campo abierto y laberinto elevado plus. Este paradigma ofrece una herramienta valiosa para investigar los mecanismos neurobiológicos que subyacen a la depresión y la ansiedad en las mujeres, particularmente aquellas con etiología ambigua y sintomatología compleja.

Introducción

Cientos de millones de personas viven con trastornos psiquiátricos, siendo la ansiedad y los trastornos depresivos los más comunes. Según la Organización Mundial de la Salud, más de 280 millones y 301 millones de personas en todo el mundo vivían con depresión y ansiedad, respectivamente, en 20191. Debido a la pandemia de COVID-19, el número de personas afectadas por trastornos de ansiedad y depresión aumentó significativamente, en un 26% y un 28%, respectivamente, en solo un año. Entre los afectados, la prevalencia de trastornos psiquiátricos a lo largo de la vida en las mujeres es casi dos veces mayor que en los hombres2, y las mujeres presentan síntomas más graves, mayor deterioro funcional, fenotipos depresivos atípicos, recaídas más frecuentes y menor respuesta a los medicamentos 3,4,5.

Aunque las diferencias sexuales en muchos aspectos de los trastornos psiquiátricos están bien documentadas 6,7,8, la mayoría de las investigaciones preclínicas se han centrado predominantemente en sujetos masculinos, principalmente debido a la falta de modelos animales femeninos apropiados 9,10. Como resultado, la patogenia de estos trastornos en las mujeres sigue siendo poco conocida. Esto enfatiza la necesidad urgente de desarrollar modelos animales que incluyan sujetos femeninos, lo que facilitaría la investigación de los mecanismos neurobiológicos subyacentes a los trastornos psiquiátricos en las mujeres.

Se ha desarrollado un número cada vez mayor de modelos de estrés social para ratones hembra basados en el paradigma del estrés de derrota social repetida (RSDS) 11,12,13,14. Por ejemplo, dos modelos de RSDS recientemente establecidos en ratones hembra involucraron la mejora artificial de la agresión masculina a través de la aplicación de orina masculina a ratones hembra y la activación quimiogenética de la subdivisión ventrolateral del hipotálamo ventromedial en agresores masculinos 11,12,13. Sin embargo, se ha argumentado que estos comportamientos agresivos inducidos no ocurren naturalmente y pueden no representar factores estresantes relevantes para los ratones hembra10. Además, el embarazo resultante del comportamiento de montaje complica los estudios mecanicistas posteriores.

Otro modelo modificado basado en RSDS es el paradigma del estrés de derrota social vicaria, en el que los ratones hembra presencian visualmente la derrota social entre machos12. También se han desarrollado protocolos de derrota social hembra-hembra en varias cepas de roedores 14,15,16. A pesar de algunas preocupaciones, los estresores sociales utilizados en estos dos últimos modelos parecen ser más relevantes etiológicamente para los trastornos psiquiátricos humanos14. Un modelo ideal de depresión requiere validez de constructo (etiológica), lo que significa que los métodos de inducción de estrés utilizados en el modelo deben reflejar fielmente las causas reales del trastorno.

Se cree que la etiología de los trastornos psiquiátricos es multifactorial, involucrando factores biológicos, genéticos, ambientales y psicosociales. La manipulación de estos factores de riesgo en animales de laboratorio es esencial para el desarrollo de modelos relevantes para la investigación mecanicista y el cribado de fármacos. Tanto los modelos animales sociales como los no sociales que simulan uno o más factores estresantes pueden replicar los síntomas centrales y las alteraciones neurobiológicas asociadas con los trastornos psiquiátricos humanos. Por ejemplo, el modelo de estrés crónico leve (CMS, por sus siglas en inglés) induce fenotipos conductuales neuropatológicos y depresivos estables y efectivos mediante combinaciones alternas aleatorias de múltiples factores estresantes físicos (p. ej., ropa de cama mojada, suspensión de la cola, pinzamiento de la cola, ayuno)17,18,19,20,21,22,23. Estos hallazgos sugieren que el modelado repetido de múltiples factores de riesgo es una estrategia viable para construir paradigmas para estudiar los trastornos psiquiátricos. El modelo de estrés de derrota social crónica (CSDS, por sus siglas en inglés) es uno de los paradigmas más utilizados para la depresión que simula estresores sociales 24,25,26. Aunque este modelo se limita a imitar un único tipo de estresor, su relevancia etiológica ha llevado a avances significativos en la investigación traslacional. Por ejemplo, los estudios basados en CSDS han identificado los canales de potasio (K+) en las neuronas dopaminérgicas en el área tegmental ventral como objetivos clave que median la resistencia a la depresión, y han destacado los abridores de canales KCNQ-tipo K+, como la retigabina (ezogabina), como candidatos antidepresivos prometedores tanto en ratones depresivos como en pacientes con depresión 27,28,29,30,31. Como resultado, varios estudios seminales han intentado modificar el paradigma de la CSDS para modelar la depresión femenina mediante la inducción de la agresión dirigida a la mujer11,12. La evidencia anterior apoya la noción de que la integración de múltiples factores de estrés social con la exposición repetida representa una dirección importante para el desarrollo de modelos psiquiátricos en animales hembra.

En ratones hembra C57BL/6J, se desarrolló recientemente un paradigma de estrés social integrado múltiple (MISS) de 10 días para modelar los trastornos psiquiátricos, demostrando validezas etiológicas, faciales, de constructo y predictivas confiables32. Para establecer el modelo MISS, las hembras de ratón C57BL/6J fueron sometidas aleatoriamente cada día durante 10 días consecutivos a cuatro factores estresantes secuenciales: fracaso en la competencia social (prueba de tubo), estrés de derrota social vicaria modificado, estrés de hacinamiento ineludible y aislamiento social posterior32. Este estudio proporciona un protocolo detallado para modelar el paradigma MISS.

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Protocolo

Todos los procedimientos experimentales fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Médica de Xuzhou (Aprobación No. 202207S127) y se llevaron a cabo de acuerdo con las pautas de los Institutos Nacionales de Salud para el cuidado y uso de animales de laboratorio. Los ratones hembra C57BL/6J (de 7 a 8 semanas de edad para los ratones sujetos; de 10 a 14 semanas de edad para los candidatos ganadores), los ratones macho C57BL/6J (de 7 a 8 semanas de edad para el cribado agresivo de CD1) y los ratones reproductores retirados CD1 utilizados en estos experimentos se obtuvieron de una fuente comercial. Todos los ratones fueron alojados bajo un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas con comida y agua suministrados ad libitum33. Se tomaron medidas conductuales de referencia, aunque no necesariamente para cada cohorte, antes del inicio del paradigma MISS, para garantizar que los resultados conductuales posteriores fueran atribuibles a la exposición al estrés en lugar de a la variabilidad individual. En la Figura 1 se presenta una descripción general del protocolo completo, y en la Figura 2 se muestran las configuraciones experimentales completas. Los detalles de los reactivos y equipos utilizados en este estudio se proporcionan en la Tabla de Materiales.

1. Habituación

  1. Habituación al medio ambiente
    1. Designe una habitación separada exclusivamente para el protocolo MISS, manteniendo una temperatura constante (23 °C ± 2 °C), humedad (50%-60%) e intensidad de luz (15-20 lux) en un ciclo de luz-oscuridad de 12 h.
      NOTA: A menos que se especifique lo contrario, aloje ratones en esta habitación durante todo el período de modelado.
    2. Prepare jaulas estándar para ratones (L × W × H: 37 cm × 16 cm × 12 cm) con tapas de alambre de acero y lecho de mazorca de maíz.
    3. Utilice ratones hembra C57BL/6J de 7-8 semanas de edad como ratones sujeto. Asigne aleatoriamente los ratones a los grupos ingenuos y MISS, y alójelos a cinco ratones por jaula.
      NOTA: Seleccione ratones hembra con edad y peso corporal comparables para el experimento.
    4. Utilice ratones hembra C57BL/6J de 10 a 14 semanas como candidatos para la selección de ganadores30. Aloja a estos ratones en grupos de cuatro por jaula para establecer rangos sociales estables.
    5. Utilice ratones machos CD1 reproductores retirados como candidatos agresores. Aloja a los ratones CD1 individualmente para establecer territorialidad y evitar peleas. Utilice ratones machos C57BL/6J criados en cohortes (5 ratones por jaula, de 7 a 8 semanas de edad) como intrusos para la detección agresiva de CD1.
    6. Permita que todos los ratones se habitúen y se recuperen del estrés del transporte durante 7 días después de la compra (Figura 1A1).
    7. Aloje a todos los ratones con comida y agua disponibles ad libitum.
  2. Habituación a los tubos y a la manipulación
    1. Coloque un tubo acrílico corto (Figura 2A; 10 cm de largo, 26 mm de diámetro interno) en cada jaula de ratones hembra y candidatos ganadores. Permita que los ratones se aclimaten a los tubos y aprendan a pasar a través de ellos durante 3 días.
      NOTA: El diámetro del tubo debe ser suficiente para permitir que un ratón adulto pase sin problemas sin darse la vuelta.
    2. Manipule ratones hembra y candidatos ganadores durante 1-2 minutos/día durante 3 días para reducir el estrés relacionado con experimentadores desconocidos (Figura 1A2).
    3. Al final del período de habituación, marque la cola de cada ratón con un marcador rojo o negro a base de aceite.
      NOTA: Revise las marcas con regularidad y vuelva a aplicarlas si es necesario.

2. Entrenamiento para la competencia de tubos, la selección de ganadores y la detección de agresores CD1

  1. Entrenamiento para la competición de tubos
    NOTA: Para obtener detalles sobre este procedimiento, consulte los informes anteriores32,34.
    1. Prepare ratones femeninos, candidatas ganadoras, tubos de acrílico transparente (Figura 2B; 30 cm de largo, 26 mm de diámetro interno), palitos de plástico, etanol al 75% y toallas de papel. Limpie la mesa, los tubos y los palitos de plástico con etanol al 75% para eliminar las señales de olor.
    2. Agarre suavemente la cola de cada ratón sujeto femenino o candidato ganador y coloque el ratón sobre la mesa. Permita que explore libremente durante aproximadamente 1 minuto para la aclimatación ambiental.
    3. Sostenga el mouse por la cola y colóquelo en un extremo del tubo.
      NOTA: Asegúrese de que la cabeza del ratón mire hacia el extremo del tubo, con sus patas delanteras tocando la mesa, para minimizar el estrés y facilitar la entrada.
    4. Suelta la cola una vez que el ratón entre en el tubo y deja que pase voluntariamente.
      NOTA: Use un palo de plástico para tocar suavemente la cola si el mouse se detiene o intenta retroceder.
    5. Coloque el ratón en el extremo opuesto del tubo y repita el paso 2.1.4. Cuente los pasos 2.1.3 - 2.1.5 como un ciclo.
    6. Repita los pasos 2.1.3 y 2.1.5 durante dos ciclos (Figura 1B1).
    7. Regresa el ratón a su jaula de origen. Limpie el tubo con etanol al 75% para eliminar olores, orina y heces.
      NOTA: Asegúrese de que el tubo esté limpio, seco y libre de olor a alcohol residual antes de usarlo con el próximo mouse.
    8. Repita los pasos 2.1.2-2.1.7 para todos los ratones hembra durante 3 días consecutivos, asegurándose de que cada ratón se acostumbre a pasar por el tubo.
  2. Selección de ganadores
    NOTA: Para obtener detalles sobre este procedimiento, consulte los informes anteriores32,34.
    1. Prepare las candidatas a ganadoras, tubos (30 cm de largo, 26 mm de diámetro interno), palitos de plástico, etanol al 75%, toallas de papel y un temporizador. Limpie y seque el equipo para minimizar las señales de olor.
    2. Antes de la detección, vuelva a entrenar a cada ratón para que pase a través del tubo durante un ciclo. Dibuja una línea central visible en el tubo.
    3. Sostén a ambos ratones por la cola y colócalos en extremos opuestos del tubo. Permita que entren y se encuentren en el punto medio, luego suéltelos simultáneamente e inicie el temporizador.
      NOTA: Utilice ratones de la misma jaula para cada competencia.
    4. Identifique al "ganador" como el ratón que empuja al otro fuera del tubo; Océdele 1 punto. El "perdedor" recibe 0 puntos.
      NOTA: Use un palo de plástico para evitar que el ganador se retire. Si ambos ratones se congelan y no se retiran dentro de 1 minuto, toque suavemente la cola de cada ratón con palitos de plástico para iniciar la acción.
    5. Invierta las posiciones iniciales de los ratones y repita los pasos 2.2.3-2.2.4, anotando el resultado nuevamente (Figura 1B2).
    6. Regrese ambos ratones a su jaula doméstica y limpie el tubo a fondo con etanol al 75%.
    7. Utilice un formato de todos contra todos para hacer coincidir cada ratón con todos los demás compañeros de jaula, repitiendo los pasos 2.2.3-2.2.5 para cada pareja.
      NOTA: Este enfoque garantiza una clasificación completa y justa.
    8. Clasifique a los ratones en función de las puntuaciones totales. Seleccione el ratón con la puntuación más alta en cada jaula como el "ganador" para los experimentos posteriores.
  3. Cribado de agresores CD1
    NOTA: Para obtener más información sobre este procedimiento, consulte el informe anterior35.
    1. Prepare ratones reproductores CD1 retirados, ratones machos C57BL/6J (intrusos) y un temporizador.
    2. Coloque un ratón macho C57BL/6J directamente en la jaula de un macho CD1 (agresor residente) durante 3 minutos.
      NOTA: El intruso no puede escapar durante la sesión.
    3. Registre la latencia hasta el primer ataque, el número de ataques y la duración de los comportamientos agresivos dentro del período de 3 minutos como indicadores de agresividad.
    4. Repita los pasos 2.3.2-2.3.3 una vez al día durante 3 días consecutivos utilizando diferentes ratones intrusos cada día (Figura 1B3).
    5. Seleccione ratones CD1 como agresores para experimentos posteriores en función de dos criterios: (1) deben haber atacado en al menos dos de las tres sesiones, y (2) su latencia de ataque debe ser inferior a 1 minuto en cada sesión.

3. Modelado

NOTA: Este paso implica la exposición aleatoria al fracaso de la competencia social en la prueba del tubo, el estrés de derrota social vicaria modificado y el estrés de hacinamiento ineludible, seguido de aislamiento social, durante 10 días consecutivos.

  1. Fracaso de la competencia social
    NOTA: Para obtener más detalles, consulte los informes anteriores32,34.
    1. Prepare ratones hembra, ratones "ganadores" seleccionados, tubos (30 cm de largo, 26 mm de diámetro interno), palitos de plástico, etanol al 75%, toallas de papel y un temporizador.
    2. Vuelva a alojar a los ratones hembra individualmente (1 ratón por jaula) y aloje a los ratones ingenuos en grupos (5 ratones por jaula).
      NOTA: Mueva los ratones ingenuos a jaulas grupales novedosas al comienzo del modelado. No es necesario cambiar a una nueva jaula durante el período de modelado.
    3. Limpie la mesa, los tubos y los palitos de plástico con etanol al 75% para eliminar las señales de olor.
    4. Retira con cuidado a los ratones de sus jaulas domésticas. Coloque un ratón MISS y un ratón "ganador" en los extremos opuestos del tubo para que caminen hacia adelante y se encuentren en el punto medio. El ratón MISS será empujado fuera del tubo por el "ganador".
      NOTA: El tamaño más grande, el peso corporal más alto y el rango social dominante del "ganador" aseguran que el ratón MISS experimental casi siempre pierda la competencia de tubo. Si los ratones permanecen inmóviles durante más de 30 segundos, toque suavemente la cola del ganador con un palo de plástico para animarlos a empujar.
    5. Cambie las posiciones de los dos ratones y repita el paso 3.1.4. Cuente los pasos 3.1.4 y 3.1.5 como un ciclo.
    6. Regrese los ratones MISS y "ganadores" a sus jaulas de origen. Limpie la mesa, el tubo y el palo de plástico para eliminar los olores.
    7. Introduzca un nuevo ratón ganador y repita los pasos 3.1.4-3.1.5 con el mismo ratón MISS. Por lo tanto, cada ratón MISS se somete a dos ciclos consecutivos de competencia fallida de tubos (Figura 1C1, Figura 2E).
    8. Repita los pasos 3.1.4-3.1.7 para todos los ratones MISS durante 10 días consecutivos.
  2. Estrés de derrota social vicaria modificado
    1. Prepare ratones reproductores CD1 agresivos retirados (alojados individualmente), ratones machos C57BL/6J, ratones hembra MISS y cubiertas acrílicas perforadas (Figura 2C; L × W × H: 8 cm × 8 cm × 5,5 cm) con orificios (5 × 5 en el panel superior, 3 × 5 en las paredes laterales; cada orificio de 0,5 cm de diámetro).
    2. Coloque una hembra de ratón MISS dentro de la jaula de un agresor CD1, confinada debajo de una cubierta acrílica perforada, para permitir la observación indirecta de las interacciones agresivas.
      NOTA: Supervise el posible vuelco de la cubierta acrílica por parte del mouse CD1 o MISS. Reducir el lecho de mazorcas de maíz en las jaulas CD1 ayuda a prevenir el vuelco.
    3. Introduzca un ratón intruso C57BL/6J macho en la jaula para que sea atacado físicamente por el ratón CD1 durante 10 min. La hembra de ratón MISS observa la interacción a través de la cubierta perforada (Figura 1C2, Figura 2F).
      NOTA: Si el ratón intruso está gravemente herido, finalice inmediatamente la sesión y trate al animal. El uso de pequeñas bolitas de mazorca de maíz mejora la experiencia inmersiva del ratón MISS al amplificar el desplazamiento de la ropa de cama durante las peleas.
    4. Después de 10 minutos, retire el intruso macho y permita que la hembra del ratón MISS tenga 5 minutos adicionales de exposición sensorial al ratón CD1.
    5. Repita los pasos 3.2.3-3.2.4 dos veces más con diferentes intrusos masculinos.
    6. Regresa el ratón MISS a su jaula de origen. Vigile y trate cualquier lesión en los intrusos masculinos.
    7. Limpie las cubiertas acrílicas perforadas y barra la ropa de cama derramada.
    8. Repita los pasos 3.2.2-3.2.5 utilizando un nuevo reproductor retirado CD1 durante 10 días consecutivos.
  3. Estrés ineludible por hacinamiento
    1. Prepare ratones hembra MISS, una funda blanca opaca (Figura 2D; L × W × H: 14 cm × 10 cm × 20 cm), jaulas de ratón estándar con lecho de mazorcas de maíz, etanol al 75%, toallas de papel y un temporizador.
    2. Coloque la funda opaca dentro de una jaula estándar con ropa de cama.
    3. Introduzca de 12 a 15 ratones hembra (ya sea todos ratones MISS o mezclados con otras hembras) en la manga durante 30 minutos al día (Figura 1C3, Figura 2G).
      NOTA: Ajuste el número de ratones de acuerdo con su tamaño para garantizar el hacinamiento sin pisotear. Evite que se escape cubriendo la funda con una tapa perforada transparente si es necesario.
    4. Regrese los ratones a sus jaulas domésticas y limpie la funda con etanol al 75%.
    5. Repita el paso 3.3.3 durante 10 días consecutivos.
  4. Aislamiento social
    1. Prepare ratones hembra MISS y jaulas de ratones estándar con lecho de mazorcas de maíz.
    2. Ratones MISS domésticos individualmente cuando no están experimentando un fracaso en la competencia social, estrés de derrota indirecta o estrés de hacinamiento, durante el resto del período de modelado de 10 días (Figura 1C4, Figura 2H).
      NOTA: Los ratones ingenuos son transferidos suavemente por la cola a una jaula temporal, luego devueltos a su jaula de origen sin ninguna exposición al estrés. Proporcione comida y agua ad libitum, como con los ratones MISS.

4. Pruebas de comportamiento

NOTA: Los experimentos conductuales se llevan a cabo dentro de una semana después del modelo para evaluar comportamientos depresivos y similares a la ansiedad en ratones. Antes de cada prueba, los ratones hembra se trasladan a la sala de pruebas de comportamiento (iluminación de 15-20 lux) durante 1 h de habituación. Después de cada prueba, los ratones son devueltos a su alojamiento original.

  1. Prueba de preferencia de sacarosa
    NOTA: Para obtener más detalles, consulte los informes anteriores 36,37,38.
    1. Prepare ratones hembra, botellas de 50 ml con tubos de bolígrafo, jaulas de ratón estándar con tapas de alambre de acero, sacarosa, una balanza electrónica, un cilindro graduado, una varilla de agitación, papel de pesaje, agua, un cuaderno y un bolígrafo.
    2. Aloje a todos los ratones hembra (ratones ingenuos y MISS) individualmente.
    3. Llene las botellas con agua potable (~2/3 del volumen).
      NOTA: Asegúrese de que no haya fugas en las botellas antes de comenzar el experimento.
    4. Proporcione a cada ratón dos botellas llenas de agua colocadas una al lado de la otra durante 2 días de habituación.
    5. Prepare agua de sacarosa al 1% (1 g de sacarosa por 99 mL de agua).
    6. Al comienzo de la prueba, reemplace el agua en una botella con una solución de sacarosa al 1%. Registre los pesos iniciales de ambas botellas.
    7. Después de 12 h, vuelva a registrar el peso de las botellas y cambie las posiciones de las botellas para evitar sesgos posicionales.
    8. Después de 24 h, registre los pesos finales y calcule la preferencia de sacarosa como:Preferencia de sacarosa (%) = (Ingesta de sacarosa / Ingesta total de líquidos) × 100
    9. Al final de la prueba, regrese a los ratones a sus jaulas domésticas con botellas de agua normales.
    10. Limpie a fondo todas las botellas y tubos de bolígrafo con agua.
  2. Prueba de suspensión trasera
    NOTA: Esta prueba32 puede realizarse en la misma cohorte o en una cohorte separada de ratones, dependiendo del diseño experimental. En este estudio, se realizó 3 días después de la prueba de preferencia por sacarosa.
    1. Prepare ratones hembra, una caja de prueba de suspensión de cola (55 cm de alto × 60 cm de ancho × 12 cm de profundidad), cinta adhesiva, un cronómetro, alcohol al 75% y toallas de papel.
    2. Configurar el sistema de seguimiento de video39. Defina una zona activa e inicie la grabación.
    3. Limpie la caja de prueba con etanol al 75%.
    4. Pega suavemente el ratón a ~2 cm del extremo de la cola y cuélgalo boca abajo, asegurándote de que su cabeza esté a ~25 cm del fondo de la caja.
      NOTA: Minimice el balanceo y evite el estrés innecesario.
    5. Registre el comportamiento utilizando el software de seguimiento35 6 min. Utilice el tiempo de inmovilidad de los últimos 4 minutos para el análisis.
      NOTA: La inmovilidad se define como la ausencia de movimiento con el cuerpo colgando pasivamente. Excluir datos si el ratón se cae o trepa.
    6. Separe con cuidado la cinta y devuelva el ratón a su jaula de origen.
  3. Prueba de campo abierto
    NOTA: Para obtener más detalles, consulte los informes anteriores40,41.
    1. Prepare ratones hembra, una caja de prueba de campo abierto (40 cm × 40 cm × 40 cm), etanol al 75% y toallas de papel.
    2. Configure el sistema de seguimiento de video. Divida virtualmente la arena en 4 × 4 subáreas; Defina las 4 unidades centrales como la zona central y el resto como la zona periférica.
    3. Limpie la caja de prueba con etanol al 75%.
    4. Coloque el ratón sujeto suavemente en el centro de la caja, con la cabeza mirando en la misma dirección. Déjalo explorar durante 5 minutos.
      NOTA: Utilice una paleta para la transferencia para reducir el estrés de manipulación.
    5. Registre la distancia total recorrida y el tiempo de permanencia en la zona central utilizando el sistema de seguimiento de video.
    6. Al final de la prueba, regrese el ratón a su jaula de origen y limpie el aparato.
  4. Prueba de laberinto elevado plus
    NOTA: Para obtener más información, consulte el informe anterior32.
    1. Prepare ratones hembra, un laberinto elevado plus, etanol al 75% y toallas de papel.
      NOTA: El laberinto consta de dos pasarelas perpendiculares (50 cm sobre el suelo), cada una con dos brazos (30 cm de largo × 5 cm de ancho). Un conjunto tiene paredes de 15 cm de altura (brazos cerrados), mientras que el otro conjunto es abierto. El área central es de 5 cm × 5 cm.
    2. Configure el sistema de seguimiento de video y defina los brazos abiertos, los brazos cerrados y el área central.
    3. Limpia el laberinto con etanol al 75%.
    4. Coloque suavemente el ratón en el centro del laberinto, frente a un brazo abierto. Permita la exploración libre durante 5 minutos.
      NOTA: Utilice una paleta para minimizar el estrés durante la colocación.
    5. Registre el tiempo que pasa en cada brazo utilizando el sistema de seguimiento.
      NOTA: Si un ratón se cae del laberinto, excluya sus datos.
    6. Regresa el ratón a su jaula de origen y limpia el laberinto a fondo.

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Resultados

Para investigar si la exposición a MISS induce cambios de comportamiento similares a los depresivos, se evaluaron ratones hembra C57BL/6J (n = 16 por grupo; tamaño de la muestra determinado mediante análisis de potencia, ver Archivo Suplementario 1 y Archivo Suplementario 2) sometidos al paradigma MISS utilizando las pruebas de preferencia por sacarosa y suspensión de cola, que evalúan los síntomas centrales de depresión-anhedonia y desesperación conductual, respectivamente (

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Discusión

Un número cada vez mayor de estudios se han centrado en el desarrollo de modelos específicos para mujeres para los trastornos psiquiátricos utilizando los paradigmas del estrés de derrota social crónica (CSDS) 11,13,14. Por ejemplo, en dos modelos de CSDS femeninos recientemente establecidos, la agresión masculina hacia ratones hembra fue inducida artificialmente mediante el recubrimiento de rat...

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Divulgaciones

Los autores declaran no tener intereses contrapuestos.

Agradecimientos

El presente estudio fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (31970937 y 82271255), el Programa de Equipo Innovador y Emprendedor de la Provincia de Jiangsu, el Proyecto de Desarrollo Social del Programa Clave de Investigación y Desarrollo de la Provincia de Jiangsu (BE2023690) y el Programa de Investigación de Posgrado e Innovación Práctica de la Provincia de Jiangsu (KYCX22_2932, KYCX23_2952).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
75% de alcoholAladdinA171299-500 mLSe utiliza para esterilizar y limpiar equipos e instrumentos de laboratorio
Botella con pico de bola Botelladehecha a medida(50 ml) con tapón de goma con pico de bola para la prueba de preferencia de sacarosa
Ratones hembra C57BL/6J  Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd219C57BL / 6J ratones hembra de 7 a 8 semanas se utilizan como ratones sujetos, y ratones de 10 a 14 semanas se utilizan como candidatos ganadores
Ratones machos C57BL / 6Jratones hembra C57BL / 6J de 7 a 8 semanas se utilizan como ratones sujeto, y los ratones de 10 a 14 semanas se utilizan como candidatos ganadores219ratones machos C57BL / 6J a la edad de 8 a 16 semanas como intrusos para la detección agresiva de CD1.
Laberinto elevado plusHecho a medida:el laberinto elevado plus consta de perpendiculares, que se cruzan con pistas elevadas (50 cm sobre el suelo). Cada pista tiene dos brazos opuestos (30 cm de largo y 5 cm de ancho). Una de las pistas tiene paredes altas (15 cm de altura, brazos cerrados) y la otra no tiene paredes altas (brazos abiertos). El área de intersección se llama área central (5 cm &veces; 5 cm)
Ratones reproductores retirados machos CD-1  Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd201Macho CD-1 ratones reproductores retirados de 4-6 meses de edad como candidatos agresores
Caja de prueba de campo abiertoabierta de acrílico blanco hecho a medida(L × W &tiempos; H: 40 cm &tiempos; 40 cm &tiempos; 40 cm) para la prueba de campo abierto
Cubierta perforadatransparente a medida(L × W &tiempos; H: 8 cm &tiempos; 8 cm &tiempos; 5,5 cm) para proteger a las hembras del contacto físico directo con ratones CD1 (con 5 &tiempos; 5 agujeros en el techo superior y 3 &tiempos; 5 agujeros en las paredes laterales, cada agujero tiene un diámetro de 0,5 cm)
FundaHecho amedida-Fundade plástico no transparente (L &veces; W &tiempos; H: 14 cm &tiempos; 10 cm &tiempos; 20 cm) para mantener ratones en exposición de hacinamiento
Jaula para ratones estándar con tapa de alambre de aceroSuzhou Fengshi Laboratory Equipment Co., Ltd.FS-SAGIVC-X30Jaula de ratón estándar (L × W &tiempos; H: 37 cm &tiempos; 16 cm &tiempos; 12 cm) con tapa de alambre de acero 
SucroseSigmaV900116Se utiliza para preparar una solución de sacarosa al 1% en la prueba de preferencia de sacarosa
Caja de suspensión traseraCaja de acrílico blanco hecha a medida(H × W &tiempos; D: 55 cm &tiempos; 60cm &tiempos; 12 cm) para la prueba de suspensión trasera  
Tubos acrílicos transparentesHechos amedida-Tubosacrílicos transparentes con un diámetro interior de 26 mm: 30 mm de largo para la competición de tubos, 10 mm de largo para la adaptación del tubo.
Sistema de seguimiento de video (SMART V3.0)Panlab76-0695Se utiliza para rastrear, registrar y analizar las trayectorias de actividad y la duración de los movimientos de los ratones
agua potable Los Caja Cubierta perforada

Referencias

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