A pesar de los considerables esfuerzos para tratar las heridas crónicas, el éxito ha sido limitado. Los procesos celulares y moleculares que interrumpen la curación normal y contribuyen al inicio y desarrollo de heridas crónicas no se comprenden bien. Como resultado, el desarrollo de tratamientos efectivos para estas heridas ha demostrado ser un desafío. Esto se debe principalmente a la falta de modelos animales que imiten las heridas crónicas en humanos y porque la experimentación en humanos con heridas crónicas es limitada. Anteriormente, hemos publicado un modelo de ratón para estudiar heridas crónicas que comparten muchas características con las heridas crónicas diabéticas en humanos. Este modelo incluye la presencia de biofilms formados de forma natural a partir de bacterias que se encuentran en la microbiota cutánea y en el medio ambiente sin necesidad de introducir bacterias externas en las heridas. Por lo tanto, este modelo puede avanzar potencialmente en la comprensión fundamental de cómo las heridas se vuelven crónicas. Aquí, presentamos una actualización del protocolo original para desarrollar este modelo de ratón. Nos hemos concentrado en disminuir la mortalidad de ratones de ~30% a ~5%. También describimos cómo se ha utilizado este modelo para comprender el inicio y la progresión de la cronicidad de la herida mediante el uso de enfoques transcriptómicos de próxima generación, dilucidando la dinámica de la población bacteriana durante la infección y el desarrollo de biopelículas, y demostrando el valor de probar la eficacia de los tratamientos, incluidas las moléculas pequeñas. Hasta ahora, este es el único modelo de herida crónica que no se cura sin intervención.
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Artículo de método
Protocolo para crear heridas crónicas en ratones diabéticos: una actualización del protocolo publicado
En este artículo
Resumen
Introducción
Esta es una actualización de un artículo existente. Haga clic aquí para ver la versión original.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
ACTUALIZACIONES:
Esta es una actualización del protocolo presentado anteriormente1
Todos los experimentos se completaron de acuerdo con las regulaciones federales y la política y los procedimientos de la Universidad de California han sido aprobados por la Universidad de California, Riverside IACUC.
1. Animal
Agregue la siguiente nota al paso 1.1:
NOTA: Si los ratones diabéticos homocigotos se compran directamente a los proveedores, aloje a los ratone....
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Resultados
Figura 1: Genotipado para identificar heterocigotos para crear reproductores. Un gel de ejemplo muestra los resultados de 8 muestras de ratón desconocidas. Las muestras 2 y 5 son heterocigotos, ya que contienen 3 bandas (610 pb, 406 pb y 264 pb). Las muestras 1, 3, 4, 6, 7 y 8 son tipos salvajes ya que solo contienen 2 bandas (610 pb y 264 pb).
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Discusión
Hallazgos utilizando este modelo de heridas crónicas:
Este modelo se ha utilizado para realizar varios estudios en un intento de comprender los mecanismos celulares y moleculares del inicio y la progresión de heridas crónicas. Se ha demostrado que al inhibir las enzimas antioxidantes, se pueden crear heridas crónicas en los ratones db / db. Las heridas inicialmente contenían una comunidad polimicrobiana que, con el tiempo, se selecci.......
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Punzón para la oreja | de 1 mm Fisherbrand | 13812201 | diámetro del orificio de 2 mm |
| 3-Amino-1,2,4-triazol (ATZ) | TCI | A0432 | |
| 70% etanol | |||
| Acu Punch Punzones de biopsia de piel de 7 mm Acuderm | Inc. | P750 | |
| agarosa | |||
| B6. BKS(D)-Leprdb/J | El laboratorio Jackson | 00697 | Homocigotos y heterocigotos disponibles |
| Buprenex (buprenorfina HCl) | Henry Stein Animal Health | 059122 | 0.3 mg/ml, |
| Tinte de carga de gel de clase 3, púrpura (6X) | New England Biolabs | B7024S | |
| Guantes | |||
| Loción depilatoria con aloe calmante y lanolina | Nair | depilatoria química | |
| HTP-1500 | Adroit MedicalSystems | ||
| Almohadilla térmica | Conair | Adaptadores de manguera de almohadilla térmica húmeda y seca | |
| Adroit MedicalSystems | |||
| BD | 329461 | 0,35 mm (28 G) x 12,7 mm (1/2") | |
| Isoflurano | Henry Schein Animal Health | 029405 | NDC 11695-6776-2 |
| Vaporizador de isoflurano | JA Baulch & Asociados | ||
| Maxi-Therm de Kimwipes | |||
| Cincinnati Sub-Zero | Cat No. 247 | 22" x30" Almohadilla reutilizable de alta resistencia | |
| Ácido mercaptosuccínico (MSA) | Cono | ||
| oxígeno | debe ser compatible con el sistema de vaporización | ||
| Solución tampón de fosfato (PBS) | autoclave estéril | ||
| Tijeras quirúrgicas afiladas pequeños recipientes | |||
| Hidróxido de sodio | |||
| Pregunta 2X Master Mix | New England Biolabs | M0270L | |
| Tegaderm | 3M | Ref: 1624W | Apósito de película transparente (6 cm x 7 cm) |
| Espátula | |||
| Pinzas | |||
| tubos | |||
| Tri-HCl | |||
| Wahl Cortapelos | Wahl | Ion Litio Pro |
Referencias
- Kim, J. H., Martins-Green, M. Protocol to create chronic wounds in diabetic mice. J Vis Exp. (151), e57656(2019).
- He, J. -F., Tan, T., Zhu, H. A novel and quick PCR-based method to genotype mice with a leptin receptor mutation (db/db mice). Acta Pharmacol Sin.
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Reimpresiones y permisos
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