La evaluación de la motilidad de células madre neurales uso de un gel de agarosa al dispositivo basado en microfluídica

Resumen

Nos demuestran que la sobreexpresión de los receptores del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) mejora la motilidad de las células madre neurales (NSC) utilizando un nuevo gel de agarosa de microfluidos dispositivo basado. Esta tecnología puede ser fácilmente adaptable a otros sistemas de células de mamíferos, donde las fuentes de células son escasos, como las células madre neurales, y la vuelta el tiempo es crítico.

Resumen

Si bien la tecnología de microfluidos está llegando a un nuevo nivel de madurez para los ensayos de macromoléculas, ensayos basados ​​en células están todavía en una etapa infantil ^1. Esto se debe principalmente a la dificultad con la que se puede crear un microambiente celular compatible y estable con las técnicas convencionales de microfabricación y materiales. Estamos frente a este problema mediante la introducción de un material de microfabricación novela, un gel de agarosa, como material de base para el dispositivo de microfluidos. En gel de agarosa es muy maleable y permeable a los gases y los nutrientes necesarios para la supervivencia celular, y por lo tanto un material ideal para ensayos basados ​​en células. Hemos demostrado anteriormente que los dispositivos de gel de agarosa base han tenido éxito en el estudio de la migración celular de las bacterias y los neutrófilos ^2. En este informe, tres canales de microfluidos en paralelo se modelan en una membrana de gel de agarosa de alrededor de 1 mm de espesor. Flujos constantes con los medios de comunicación / buffer se mantienen en los dos canales laterales mediante una bomba peristáltica. Las células se mantienen en el canal central para la observación. Dado que los nutrientes y productos químicos en los canales laterales están en constante difusión de un lado para el canal central, el ambiente químico del canal central se controla fácilmente a través del flujo a lo largo de los canales laterales. El uso de este dispositivo, se demuestra que el movimiento de las células madre neurales se puede controlar ópticamente con facilidad en condiciones químicas diferentes, y los resultados experimentales demuestran que la sobreexpresión de los receptores del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) mejora la motilidad de las células madre neurales. Motilidad de las células madre neurales es un importante biomarcador para evaluar la agresividad de las células, por lo tanto el factor tumorigénico ^3. Descifrar el mecanismo subyacente de la motilidad del Consejo de Seguridad Nacional dará conocimiento de los trastornos del desarrollo neuronal y en la invasión del cerebro células madre del cáncer.

Protocolo

Procedimiento

Diapositivas recubrimiento con fibronectina

Antes de la reunión de los dispositivos de microfluidos, esterilizar a las diapositivas de cristal con la fibronectina. Escudo de las diapositivas en una biohood para mantener la esterilidad. Alinear un espaciador PDMS estéril a lo largo de los bordes de la diapositiva y marcar el lado que está hacia arriba, con un marcador permanente. Pipeta de 1 ml de 5 mg / ml de solución de fibronectina (Sigma) en el interior del espaciador de PDMS sobre la totalidad de la lámina de vidrio. Deje los portaobjetos en reposo durante una hora, luego se seca por completo con una pistola de N

Discusión

Fig. 1 muestra las trayectorias de tres cepas Consejo de Seguridad Nacional, las células de los padres, la wtEGFR y ΔEGFR el (control). Cada conjunto de trayectorias se obtuvieron de una película de 5 horas de duración. Para las células de los padres, la motilidad celular alcanzó su punto máximo cuando la concentración de EGF se ~ 10ng/ml, porque las células wtEGFR, el pico de motilidad celular pasó a 100ng/ml o superior, para que las células ΔEGFR, la motilidad celular es independiente de la concentración de FCE como se esperaba.

L.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Dulbecco’Medio Mínimo Esencial de Dulbecco (DMEM) (1X)	Reactivo	Invitrogen	11971-025
Medios independientes de CO2	Reactivo	Invitrogen	18045-088	Un medio no HEPES de propiedad exclusiva adecuado para el crecimiento celular de diversas líneas celulares epiteliales, de fibroblastos y linfoides en condiciones atmosféricas, que no contiene L-glutamina
Tripsina-EDTA	Reactivo	Invitrogen	25200-072
PBS	Reactivo	Invitrogen	14190-144	Solución salina tamponada con fosfato, sin calcio ni magnesio
Pen/Estrep	Reactivo	Invitrogen	15140-122	Contiene 10.000 unidades de penicilina (base) y 10.000 g de estreptomicina (base)/ml utilizando penicilina G (sal sódica) y sulfato de estreptomicina en solución salina al 0,85 %
SFB	Reactivo	Invitrogen	10437-028	Suero bovino fetal, calificado
Suero de caballo	Reactivo	Invitrogen	16050-130	Suero de caballo, suero analizado mediante EIA (negativo)
Fibronectina	Reactivo	Sigma-Aldrich	F0895	Fibronectina del plasma humano, también llamada globulina insoluble en frío
EGF	Reactivo	Sigma-Aldrich	E4127	Factor de crecimiento epidérmico de glándula submaxilar murina, liofilizado
Agarosa	Reactivo	Fisher Scientific	BP1356-500