El lavado nasal con solución salina se puede utilizar para tomar muestras del microambiente inmunitario nasal canino. Debido a que el abordaje es relativamente no invasivo y no altera los tejidos nasales, se puede realizar en serie. Las células y proteínas recogidas de la técnica de lavado nasal pueden ser procesadas para diversos análisis de laboratorio.
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Artículo de método
Lavado salino para la toma de muestras del microambiente inmunitario nasal canino
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Resumen
Resumen
La evaluación del microambiente inmunitario local de la cavidad nasal canina puede ser importante para investigar la salud normal de los tejidos y las enfermedades, en particular las asociadas con la inflamación local. Hemos optimizado una técnica para evaluar el microambiente inmune nasal local de perros a través de lavados nasales en serie. Brevemente, con los perros bajo anestesia y colocados en decúbito esternal, se inyecta solución salina estéril precalentada en la fosa nasal afectada mediante un catéter de goma blanda flexible. El reflujo de fluido se recoge en tubos cónicos y este proceso se repite. Los fluidos que contienen células y proteínas desalojadas se agrupan, y las muestras de lavado nasal agrupadas se filtran a través de un filtro de células para eliminar los desechos grandes y la mucosidad. Las muestras se centrifugan y los gránulos de la célula se aíslan para su análisis. Una vez que se han procesado las muestras, los análisis que pueden seguir al lavado nasal incluyen citometría de flujo, análisis transcriptómico de células a través de secuencias de ARN a granel o de una sola célula, y/o cuantificación de citocinas presentes en el líquido de lavado.
Introducción
Los perros desarrollan habitualmente afecciones nasales inflamatorias a lo largo de su vida. La causa subyacente de la rinitis aguda o crónica en los perros puede variar desde infecciosa (viral: p. ej., influenza, parainfluenza, herpesvirus; bacteriana [p. ej., Bordetella, micoplasmas], fúngica [p. ej., aspergilosis, criptococosis]; parasitaria [p. ej., ácaros nasales]) hasta neoplásica (p. ej., neoplasias malignas sinonasales, más comúnmente carcinoma o histotipos de sarcoma) a material extraño (p. ej., cuerpo extraño, migración intranasal de dientes desplazados) a enfermedad periodontal, así como la rinitis inflamatoria idiopática ....
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Protocolo
Este procedimiento de lavado nasal ha sido aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Estatal de Colorado y la Junta de Revisión Clínica (IACUC # 2425). En la Figura 1 se presenta un esquema del método de lavado nasal.
1. Preparación para el lavado nasal
- El día antes del procedimiento de lavado nasal, llene cinco jeringas de 20 ml con solución salina fisiológica estéril (solución de cloruro de sodio al 0,9%) y cierre con una tapa. Coloque las jeringas en una incubadora a 37 oC para que puedan calen....
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Resultados
Con este método de lavado nasal, la muestra recolectada aparecerá ligeramente turbia, posiblemente con pedazos visibles de desechos celulares y moco cuando se gira el tubo. Se consideraría que una muestra está contaminada con sangre periférica si el procedimiento de lavado induce inadvertidamente una hemorragia y la muestra está teñida de rojo. Si bien parte de la solución salina infundida se perderá durante el procedimiento, se consideraría un lavado negativo si la solución salina infundida no fluye de regreso fuera de .......
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Discusión
Hay varios pasos críticos en el protocolo de lavado nasal. Con respecto al perro que se somete al procedimiento de lavado nasal, el perro debe estar dentro de un plano de anestesia lo suficientemente profundo para que no reaccione a la colocación del catéter o a la administración del lavado. Si son reactivos bajo anestesia, esto puede comprometer la calidad y la cantidad de la recolección de muestras de lavado, así como aumentar potencialmente los riesgos de lesión aguda del tejido nasal.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen conflictos de intereses que declarar.
Agradecimientos
La técnica de lavado nasal canino descrita en este documento se ha optimizado a través de proyectos respaldados por K01 OD03109, CCTSI Colorado Pilot Grant Award, CSU CVMBS College Research Council Shared Resources Program y CO HNC SPORE CA261605: Career Enhancement Program. La Figura 1 se creó con BioRender.com.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 1,5 ml Tubos | Eppendorf | 05-402 | |
| 1000 µ L Pipeta | VWR | 89079-974 | |
| 1x PBS | Corning | 21-040-CV | |
| Jeringas de 20 mL | VWR | BD302830 | |
| 50 mL Tubos cónicos | VWR | 89039-656 | |
| 70 µ Filtro de células m | Fisherbrand | 22-363-548 | |
| 8FR Catéter de goma rojo estéril | Med Vet International | 50-252-2428 | |
| ACK Tampón de lisis | Gibco | A1049201 | |
| Centrífuga | Beckman Coulter | 366816 | |
| Fisiología Salina (0.9%) | Vetivex | 17033-492-01 | |
| Vortex | VWR | 10153-838 |
Referencias
- Cohn, L. A. Canine nasal disease: An update. Vet Clin: Small Anim Pract. 50 (2), 359-374 (2020).
- Mortier, J., Blackwood, L. Treatment of nasal tumours in dogs: A review. J Small Anim Pract. 61 (7), 404-415 (2020).
- Plickert, H., Tichy, A., Hirt, R.
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Reimpresiones y permisos
