Detección de infección por Helicobacter pylori y resistencia a antibióticos mediante análisis cuantitativo de la reacción en cadena de la polimerasa en heces

Resumen

El protocolo emplea una toma de muestras de heces no invasiva combinada con una reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa para ofrecer un método de diagnóstico conveniente y rápido para la infección por Helicobacter pylori y su resistencia a la claritromicina y las quinolonas.

Resumen

Helicobacter pylori (H. pylori) es ampliamente prevalente en todo el mundo, con aproximadamente el 50% de la población mundial con antecedentes de infección por H. pylori. En China, la tasa de infección oscila entre el 40% y el 70%. H. pylori se asocia principalmente con enfermedades gastrointestinales como gastritis crónica, úlceras gástricas y úlceras duodenales. En la actualidad, el tratamiento clínico para la infección por H. pylori consiste en una terapia triple o cuádruple. Sin embargo, el uso extensivo de antibióticos ha llevado al desarrollo de resistencia a los antibióticos en H. pylori. Por lo tanto, la detección tanto de H. pylori como de su resistencia a los antibióticos es crucial para guiar el tratamiento clínico.

Los métodos de diagnóstico para H. pylori incluyen la prueba de aliento con urea (UBT), la prueba de antígenos, la prueba de anticuerpos serológicos, la endoscopia, la prueba rápida de ureasa (RUT) y el cultivo bacteriano. Si bien los tres primeros métodos no son invasivos, no permiten la recuperación bacteriana y, por lo tanto, no se pueden usar para pruebas de resistencia. Los tres últimos métodos son invasivos, costosos, requieren una gran experiencia técnica y pueden causar daño a los pacientes.

Por lo tanto, un método rápido y no invasivo para la detección simultánea de la infección por H. pylori y la resistencia a los antibióticos es de suma importancia clínica para la erradicación efectiva de H. pylori. Este artículo tiene como objetivo presentar un protocolo específico que combina la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) con la tecnología de sonda fluorescente TaqMan para detectar rápidamente la infección por H. pylori y la resistencia a los antibióticos. Este método proporciona una forma conveniente, rápida y no invasiva de diagnosticar la infección y la resistencia a H. pylori , a diferencia del cultivo bacteriano tradicional y otras técnicas. La qPCR se utiliza para identificar la infección y detectar mutaciones en los genes 23S rRNA y gyrA , que están relacionados con la resistencia a la claritromicina y las quinolonas, respectivamente. En comparación con las técnicas de cultivo convencionales, este enfoque ofrece un método no invasivo, rentable y eficiente en el tiempo para detectar la infección por Helicobacter pylori y determinar su resistencia a los antibióticos.

Introducción

Helicobacter pylori es una bacteria gramnegativa en forma de espiral que puede infectar de forma persistente el epitelio gástrico humano¹. En 1994, la Organización Mundial de la Salud clasificó a H. pylori como un carcinógeno del Grupo 1 para el cáncer gástrico, con ~ 3% de los individuos infectados que finalmente desarrollaron la enfermedad². Una revisión sistemática recientemente publicada ha indicado que en la última década se observó una tendencia general de aumento de la tasa de resistencia a antibióticos de H. pylori , que ha alcanzado niveles alarmantes ....

Protocolo

Este estudio se adhiere a las directrices éticas establecidas por el Comité de Ética del Hospital Popular Provincial de Guangdong, Universidad Médica del Sur, Guangzhou, China (Aprobación No: KY2024-445-01). La información detallada sobre los materiales utilizados en esta investigación (reactivos, productos químicos, equipos y software) se puede encontrar en la Tabla de Materiales.

1. Selección de participantes

1. Elija participantes en el rango de edad de 18 a 60 años.
2. Elija participantes que puedan someterse a un cribado de detección de infección por

Resultados

Aplicación de qPCR para la detección de infección por Helicobacter pylori y resistencia a antibióticos en muestras fecales
Diseñamos cebadores y sondas basados en mutaciones puntuales en los genes conservados de Helicobacter pylori, así como en el gen 23S rRNA y el gen gyrA . Estos cebadores y sondas se marcaron con diferentes tintes fluorescentes y luego se utilizaron para la detección de qPCR. Los resultad.......

Discusión

En los últimos años, los métodos de detección molecular se han aplicado ampliamente en el campo de la microbiología, alterando significativamente el manejo clínico de varias enfermedades infecciosas. Estos métodos operan a nivel genético, lo que permite no solo la confirmación de la presencia bacteriana, sino también la tipificación de genes y las pruebas de resistencia a los antibióticos. La PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real (qPCR) se ve cada vez más favorecida debido a s.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
BSC-1500IIA2-X	BIOBASE	SEDA	Gabinete de bioseguridad
Tubo desechable de recolección y almacenamiento de heces	Topo		Recolecte muestras fecales
E-Centrifuge	WEALTEC		Centrifugue el líquido residual de la pared del tubo Kit de
detección de mutaciones de resistencia a Helicobacter pylori, claritromicina y quinolona	Topo		Detección de infección por Helicobacter pylori y resistencia a los antibióticos; reactivo de H. pylori liofilizado (que contiene cebadores, sondas, polimerasa Taq, enzima UNG, dNTP, etc.), un control positivo para H. pylori (que contiene Helicobacter pylori y genes diana de la β-actina humana) y un control negativo para H. pylori (que contiene genes diana β-actina humana)
Mole 96M extractor automatizado de ácidos nucleicos	Mole		Para extracción
de ADNKit de extracción de ácidos nucleicos	Mole		Para extraer ácido nucleico; contiene tampón de lisis (sal de guanidina, tris hidroximetilaminometano, Tween-20, cloruro de sodio), Tampón de lavado 1 (cloruro de sodio), Tampón de lavado 2 (tris hidroximetilaminometano, Tween-20), Tampón de lavado 3 (perlas magnéticas, Tween-20), Tampón de lavado 4 (agua sin nucleasas) y tampón de elución (tris hidroximetilaminometano), junto con una gradilla magnética
SLAN Sistema de análisis de PCR médica totalmente automático	HONGSHI		Análisis
de datos SLAN-96S Máquina de PCR en tiempo real	HONGSHI		Amplificación de PCR cuantitativa fluorescente
Congeladores de temperatura ultrabaja (DW-YL450)	MELING	SEDA	20172220091-20 ° C para almacenar reactivos
Vortex-5	Kylin-bell		Para mezclar reactivos

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