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Artículo de método
* These authors contributed equally
Este protocolo demuestra un método novedoso para extraer exosomas de los tejidos tumorales liberándolos de forma natural y recolectándolos repetidamente para proporcionar una base experimental para estudiar la función de los exosomas en el desarrollo tumoral.
Como vesículas secretadas por las células, los exosomas encierran y transfieren varios ácidos nucleicos, proteínas y lípidos, y participan en la comunicación entre diferentes células. Los exosomas en el microambiente tumoral juegan un papel importante en las características biológicas de las células tumorales y pueden influir fuertemente en los estados de otras células. Por lo tanto, para estudiar más a fondo las funciones específicas de los exosomas en el desarrollo de tumores, es indudablemente necesario extraer y aislar exosomas de los tejidos tumorales. La extracción directa de exosomas del tejido tumoral reduce la necesidad de cultivo celular in vitro , y los exosomas del tejido tumoral pueden ser más similares a los del estado natural. Por lo tanto, mantener el estado natural de los exosomas en el tejido tumoral es la clave para el proceso de extracción. La digestión enzimática a menudo se combina con la ultracentrifugación para extraer exosomas de los tejidos tumorales. Aquí, proporcionamos un método novedoso para extraer exosomas del tejido tumoral. Utilizamos un medio sin suero para incubar pequeños trozos de tejido tumoral en una mesa vibratoria, recogimos y extrajeron repetidamente exosomas liberados naturalmente del tejido tumoral e identificamos la estructura, la concentración y las características del exosoma extraído, proporcionando un nuevo método para los investigadores que estudian la función de los exosomas en el desarrollo tumoral.
Los exosomas son un subtipo de vesículas extracelulares secretadas por las células, cuyo tamaño suele oscilar entre los 30 nm y los 200 nm 1,2. Participan en la comunicación intercelular y entregan varias moléculas de señalización, incluidos los ácidos nucleicos (por ejemplo, ácido desoxirribonucleico (ADN), ARN mensajero (ARNm), ácido microrribonucleico (miARN), ARN largo no codificante (lncRNA), ARN circular (circRNA)), proteínas y lípidos 1,3,4,5, a las células receptoras
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Todos los experimentos relacionados con exosomas de tejido tumoral se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices y regulaciones pertinentes. Este estudio fue aprobado y realizado por las directrices del Comité de Ética del Hospital de China Occidental de la Universidad de Sichuan (20220301101). Cuatro semanas después de la inoculación con células SGC-7901, un ratón desnudo (BALB/c, macho, 8 semanas de edad, 26 g) fue sacrificado por dislocación cervical.
1. Adquisición de tejido tumoral
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La TEM reveló que los exosomas derivados del tejido tumoral a través de este método tenían estructuras típicas en forma de copa (Figura 1A), y no había diferencias significativas entre la forma de los exosomas extraídos por este método y por la digestión enzimática (Figura 1B). Los resultados de la NTA revelaron que el diámetro medio del exosoma era de 172,8 nm, que estaba en el rango de 30-200 nm y era consistente con el tamaño de los exosomas; la concentración.......
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En este método, los exosomas derivados del tejido tumoral se extrajeron de los tejidos de cáncer gástrico ectópico de ratones desnudos, y los pasos clave fueron la liberación, exudación, separación y purificación de los exosomas. Se han diseñado y verificado varios métodos de separación de exosomas de acuerdo con las propiedades físicas y la composición de los exosomas 2,21,28,29, cada uno con ventajas y desventajas, pero el propósito es minimizar el i.......
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Los autores no tienen conflictos de intereses que declarar.
Este trabajo contó con el apoyo del Programa de Apoyo a la Ciencia y la Tecnología de la Provincia de Sichuan (2024NSFSC0592, 2023YFS0064).
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| α-MEM | HyClone | SH30265.01B | |
| Anticuerpo anti-CD63 | Bioss | bsm-43117M | |
| Anticuerpo anti-CD9 | Bioss | bs-2489R | |
| Tubo de centrífuga | Thermo | 339650 | |
| Agitador de temperatura constante | Thermo | MAXQ4450 | |
| Pipeta estéril desechable-10 | mL JET | ||
| EDTA | Biosharp | BS107 | |
| Pipeta eléctrica | Thermo | 9501 | |
| Centrífuga horizontal de temperatura controlada | Thermo | Sorvall ST1R plus | |
| Analizador de seguimiento de nanopartículas | Malvin | NanoSight Pro | |
| Tijera oftálmica | Jinzhong | Y3D010 | |
| PBS | HyClone | SH30256.01B | |
| Ácido fosfotúngstico | Sigma | 455970-10G | |
| Tijera quirúrgica | Jinzhong | J21010 | |
| Anticuerpo secundario | Bioss | Bs-0295G | Cabra Anti-Conejo IgG H& L/FITC |
| Microscopio electrónico de transmisión | Nikon | Plan Apo WF | |
| Tubo ultracentrífugo | Beckman | 355618 |
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