Method Article

Monitorización de la progresión de los nódulos pulmonares mediante tomografía microcomputarizada y muestras de sangre en un modelo de ratón

DOI:

10.3791/67746

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December 6th, 2024

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1Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy/Academy for Interdisciplinary, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Research Institute of Integrated Traditional Chinese Medicine and Western Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 4Chengdu University of CTM, Basic Medical College, 5Chengdu Fifth People's Hospital, 6TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este protocolo describe un método eficiente, sencillo y mínimamente invasivo para el estudio de los nódulos pulmonares. La extracción de sangre de las venas submaxilares y las imágenes por micro-TC se utilizan como técnicas de investigación.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La microtomografía computarizada (micro-TC) es una técnica en tiempo real, intuitiva, sensible y mínimamente invasiva para controlar los cambios de nódulos pulmonares (NP) a cáncer de pulmón (CP). La integración de la toma de muestras de sangre de la vena submandibular permite una detección rápida, estable y sencilla de las imágenes y las alteraciones clave del objetivo durante la progresión de la NP a la LC. En este estudio, administramos una dosis de 100 mg/kg de 4-(metilnitrosamino)-1-(3-piridil)-1-butanona en ratones A/J para desarrollar un modelo de adenocarcinoma de pulmón. A continuación, se monitorizó la progresión de la enfermedad en los animales de experimentación mediante muestras de sangre de la vena submandibular y un ensayo de microtomografía computarizada. Los resultados experimentales mostraron la presencia de focos nodulares en los pulmones de algunos animales a la10ª semana, y el desarrollo de imágenes de adenocarcinoma de pulmón se hizo evidente a la21ª semana. En conclusión, la micro-TC puede observar eficazmente los cambios patológicos en los pulmones de los ratones y, cuando se combina con la toma de muestras de sangre de las venas submandibulares, puede controlar dinámicamente los cambios en la sangre, las proteínas y los objetivos. Este método proporciona un enfoque muy específico, sencillo y sensible para la detección de fármacos, las pruebas farmacocinéticas, los experimentos toxicológicos y los estudios de seguridad.

Introduction

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El cáncer de pulmón (CP) es una neoplasia grave que se origina en la mucosa bronquial o en las glándulas pulmonares. Según las estadísticas de 2021, la LC causa aproximadamente dos millones de muertes en todo el mundo cada año, con tasas de incidencia y mortalidad en aumento1. El diagnóstico y la intervención tempranos en el CL contribuyen a tasas de curación más altas, menor mortalidad y menores costos de tratamiento. Los nódulos pulmonares (NP) son precursores específicos de la CP, caracterizados por sombras sólidas o subsólidas localizadas, redondas y más densas ≤30 mm de diámetro en los exámenes radiológicos, sin evidencia de colapso pulmonar, agrandamiento de los ganglios linfáticos mediastínicos o derrame pleural2. La National Comprehensive Cancer Network (NCCN) en 2022 clasificó la NP por número, diámetro y densidad, identificando combinaciones como un nódulo de vidrio esmerilado aislado de 5 mm en el pulmón derecho3. Sin embargo, las guías de la NCCN indican que el riesgo de malignidad en la NP aumenta con el diámetro y la cantidad de los nódulos. La aplicación generalizada de la tomografía computarizada de baja dosis ha aumentado drásticamente los diagnósticos de NP, con millones de nuevos casos identificados cada año4.

La combinación de ratones A/J con 4-(metilnitrosamino)-1-(3-piridil)-1-butanona (NNK) es el modelo animal más utilizado para el cáncer de pulmón (CL)5,6. El uso de la micro-TC junto con la toma de muestras de sangre de las venas submandibulares es un enfoque eficaz para la monitorización en tiempo real de los cambios de nódulos pulmonares (NP) a CL. La inducción química de carcinógenos, particularmente con ratones NNK y A/J, es el método más prevalente para el modelado del cáncer de pulmón y ha demostrado ser un enfoque eficaz para establecer el carcinoma in situ 7,8. Este método de modelado simula con mayor precisión la progresión de NP a LC en comparación con el método de inoculación axilar.

Los estudios previos se han centrado en el análisis estadístico de la morfología de los nódulos y en la tinción patológica de las muestras de tejido después de la eutanasia9. Sin embargo, estos métodos carecen de la capacidad de monitorear en tiempo real la progresión dinámica de NP a LC10. La micro-TC, como técnica de imagen no invasiva, proporciona datos longitudinales precisos con alta resolución, imágenes rápidas, baja dosis de radiación y seguridad, lo que la hace adecuada para la detección de imágenes pulmonares en tiempo real11,12. La toma de muestras de sangre en la vena submandibular es el método más reciente, sencillo y rápido para obtener muestras de sangre de ratones13. Esta técnica no invasiva requiere un manejo mínimo de los animales y permite una recuperación rápida, alineándose con los principios de las 3R que tienen como objetivo reducir el número de animales utilizados en la investigación, minimizar las molestias y promover el tratamiento ético. El volumen sanguíneo recogido, aproximadamente 0,2-0,5 mL, es suficiente para monitorizar los parámetros sanguíneos con requerimientos moderados14.

El uso simultáneo de la micro-TC y la toma de muestras de sangre en las venas submandibulares permite la observación dinámica y en tiempo real de la progresión de la NP a la LC en las imágenes y la detección en tiempo real de objetivos clave dentro del torrente sanguíneo15. Además, este enfoque permite la investigación en tiempo real de metabolitos y otros productos bioquímicos, lo que, cuando se combina con técnicas como la cromatografía de alta resolución, avanza nuestra comprensión de la LC16,17.

En este estudio, se utilizaron ratones A/J combinados con NNK para crear un modelo de ratón de cáncer de pulmón in situ. Se realizaron microtomografías computarizadas a las 4, 10 y 20 semanas después de la inducción del modelo para capturar imágenes pulmonares, mientras que la sangre se recolectó mediante muestreo de venas submandibulares durante todo el experimento. Este estudio tiene como objetivo establecer una base para la investigación de la NP y la LC mediante la combinación de muestras de sangre de la vena submandibular con micro-CT.

En oncología, la micro-TC es una herramienta altamente efectiva para detectar el crecimiento tumoral, ofreciendo una técnica de alta resolución para medir los cambios locales en el foco de la sombra en cualquier momento durante dichos estudios18,19. Sin embargo, es esencial reconocer que la micro-TC por sí sola no proporciona información sobre las características del enfoque de la sombra, el estado fisiológico del animal o los niveles de factores biológicos clave. Por lo tanto, se utilizó el muestreo de la vena submandibular como método complementario en este estudio.

Protocol

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Todos los experimentos con animales descritos en este estudio fueron aprobados por el Comité de Ética de Bienestar Animal Experimental de la Universidad de Medicina Tradicional China de Chengdu y se llevaron a cabo de acuerdo con las leyes y normas éticas pertinentes para la investigación con animales (número de revisión: 2024035). Las hembras endogámicas A/JGpt (7-8 semanas de edad) se mantuvieron a una temperatura de 20-24 °C con una humedad relativa del 40%-70%. Se les proporcionó alimento para animales estándar y agua purificada ad libitum durante un ciclo de luz y oscuridad de 12 horas. Antes del experimento, cada animal se aclimató a este entorno durante 7 días. Los detalles de los reactivos y el equipo utilizado se enumeran en la Tabla de Materiales.

1. Reactivos y preparación animal

  1. Productos químicos y reactivos
    1. Disuelva NNK en solución salina para formar una mezcla maestra de 10 mg/mL20. Administrar una única inyección intraperitoneal de 0,2 mL con una concentración de 100 mg/kg al grupo NNK, mientras se proporciona un volumen igual de solución salina normal al grupo blanco.
      NOTA: Siga a Jang et al.21 para determinar el momento para la exploración por micro-TC y la toma de muestras de sangre.
  2. Extracción de sangre
    NOTA: Para garantizar la salud de los ratones, limite la recolección de sangre a no más de 0.2 mL en cada momento y espere una semana para la recuperación. Debido a la abundancia de pelo en la región submentoniana, tenga cuidado de evitar la contaminación de la muestra de sangre por pelo durante la recolección.
    1. Retira el vello facial del animal el día antes del experimento con una afeitadora adecuada.
    2. Agarre firmemente la piel de la cara posterior de la cabeza del ratón con la mano izquierda para evitar cualquier movimiento y mantener la cabeza del ratón en una posición fija.
    3. Inserte rápidamente la aguja de recolección de sangre en la arteria submaxilar desde el área mandibular detrás de la cuenca oblicua del ojo. Mantenga la aguja en su lugar durante al menos 3 segundos para permitir un flujo sanguíneo óptimo. Recoge de 50 a 200 μL de sangre.
    4. Recoge la sangre en un tubo de EDTA. Use un hisopo de algodón para aplicar una presión suave sobre la piel y detener el sangrado. Una vez que el sangrado se haya detenido, suelte el ratón y obsérvelo durante 30 s.
    5. Agite suavemente el tubo de ensayo para asegurarse de que la sangre se mezcle completamente con el coagulante.
    6. Para los análisis de sangre de rutina, coloque la sangre recolectada en el instrumento de prueba de rutina de sangre veterinario, presione el botón de recolección y permita que el instrumento recoja la sangre. Registre los resultados mostrados. Deseche la sangre restante de manera segura.

2. Obtención de imágenes in vivo por micro-TC

NOTA: Siempre retire los objetos metálicos, como los crotales, del animal de prueba antes de usar la microtomografía computarizada. Los objetos metálicos pueden causar artefactos graves en la imagen. La microtomografía computarizada emite una cierta cantidad de radiación; Asegurarse de que otros resultados experimentales no se vean afectados.

  1. Encienda la unidad, inicie el software de micro-CT y realice la calibración y el calentamiento de la sonda. Utilice el banco de herramientas específico del ratón para escanear.
  2. Cree una nueva base de datos y asígnele un nombre para este análisis, o conéctela a una base de datos existente.
  3. Modifique los parámetros en la ventana de configuración del software. Ajuste el filtro de rayos X a Cu0,06 + Al0,5, con un voltaje de 70 kV, una corriente de 80 μA, un campo de visión de 36 mm × 36 mm, escaneo rotacional de 360° y un tiempo de escaneo de 4 min22.
  4. Anestesiar a los ratones con isoflurano al 3% antes de la exploración23 (siguiendo protocolos aprobados institucionalmente). Abra la pantalla de visualización de micro-CT y asegure los ratones a la cama de herramientas con cinta adhesiva. Mantenga la anestesia de forma continua utilizando una sonda nasogástrica colocada dentro del instrumento de micro-TC en el lecho de herramientas.
  5. Guíe cuidadosamente al animal dentro del aparato y controle su posición en tiempo real. Utilice los botones apropiados para ajustar la posición del mouse, asegurándose de que su pecho sea completamente visible dentro del campo de visión.
  6. Gire la cama de herramientas 90° para colocar el ratón. Utilice los botones para ajustar la posición del ratón, asegurándose de que la región pulmonar esté situada en el centro del campo de visión. A continuación, vuelva a colocar la cama de la herramienta en su posición original.
  7. Para iniciar el escaneo, seleccione el botón Escanear . Permita que el sistema complete el escaneo sin interrupciones y evite abrir la pantalla de visualización durante el proceso. Observe los cortes transaxiales, coronales y sagitales de la reconstrucción a través del software.
  8. Evalúe la calidad de la imagen inmediatamente después del escaneo. Si aparecen artefactos o imágenes borrosas, repita el procedimiento de escaneo.
  9. Retire a los ratones del aparato y controle su salud para asegurarse de que estén en condiciones estables antes de devolverlos a sus jaulas.
  10. Al final del experimento, retire la cinta adhesiva de la base de herramientas y luego limpie la cama. Guarde los datos y apague el instrumento.
  11. Transfiera a los ratones a sus jaulas con cuidado para minimizar el estrés. Asegúrese de que las jaulas estén limpias y tengan ropa de cama adecuada.
  12. Monitoree a los ratones para detectar signos de recuperación de la anestesia. Observa su comportamiento, movilidad y apetito. Proporcione alimentos y agua según sea necesario.
  13. Mantenga un ambiente cálido para los ratones para evitar la hipotermia después de la anestesia. Use almohadillas térmicas o mantas si es necesario.
  14. Realice controles de salud diarios durante la próxima semana. Busque signos de angustia, comportamiento inusual o cualquier lesión. Documente las observaciones de cada ratón.
  15. Si algún ratón muestra signos de enfermedad o angustia, consulte con un veterinario para obtener la intervención y los cuidados adecuados.
  16. Asegúrese de que los ratones vuelvan a sus condiciones normales de alojamiento después de que se hayan recuperado por completo y estén estables.

3. Procesamiento y análisis de datos

  1. Utilice el software de estadísticas y gráficos como una herramienta valiosa para el análisis de datos y la creación de tablas para presentar resultados.
  2. Abra el software. Seleccione los gráficos XY de la tabla de datos recién creada, introduzca los datos semanales para el NNK y los grupos de control, y genere un gráfico que muestre los cambios en el peso de los ratones.
  3. Abra el software nuevamente, seleccione el diagrama de contingencia de la tabla de datos recién creada, ingrese los datos de la rutina de sangre para el grupo NNK y el grupo de control, y genere un icono.
  4. Seleccione las opciones de análisis en el software. Analice los datos generales utilizando ANOVA de un factor, seguido de la verificación de los datos mediante la implementación de una prueba t. Marcar diferencias significativas.
  5. Guarde los datos de micro-CT en formato SimpleViewer o DICOM. Abra el software SimpleViewer y observe los datos de las imágenes bajo la guía de un médico especialista en imágenes. Etiquete los nódulos y cuantifique el volumen de sombra utilizando las herramientas de medición proporcionadas.

Results

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Este estudio demostró la construcción de un modelo de cáncer de pulmón estable utilizando NNK en combinación con ratones A/J. El diseño experimental se ilustra en la Figura 1. El objetivo fue observar el proceso en tiempo real de la transición de nódulos pulmonares (NP) a cáncer de pulmón (CP) en pulmones de ratón, utilizando micro-TC y muestreo de sangre de venas submandibulares. En consecuencia, se realizaron microtomografías computarizadas y muestras de sangre de los pulmones de ratón a las semanas cuarta, décima y vigésima.

Los resultados experimentales mostraron que el enfoque de modelado de NNK en conjunto con ratones A/J imitó efectivamente el proceso patológico de NP a LC. En primer lugar, se puede afirmar que el ensayo utilizado en este estudio no tuvo un impacto significativo en el bienestar de los animales de experimentación. Como se ilustra en la Figura 2, los pesos corporales de los animales de experimentación durante el período de alimentación de 20 semanas no mostraron diferencias notables en comparación con el grupo control. En segundo lugar, los resultados de los análisis de sangre rutinarios realizados en muestras tomadas de los animales de experimentación revelaron un aumento significativo en el número de leucocitos y plaquetas en el grupo modelo, mientras que el número de glóbulos rojos y hemoglobina se mantuvo sin cambios (Figura 3). Esto indica que el proceso de transformación de NP a LC también se asocia con un aumento gradual de la inflamación crónica. Es importante destacar que tanto la microtomografía computarizada como la toma de muestras de sangre de las venas submandibulares no dañaron la función hematopoyética de los animales de experimentación, lo que concuerda con los hallazgos de numerosos estudios previos. Además, la observación minuciosa del comportamiento, la condición del pelaje, la respiración, la dieta y la ingesta de agua de los animales experimentales a lo largo del estudio no reveló anomalías.

Después de la administración inicial de NNK a los animales de experimentación, realizamos una micro-TC de los pulmones el primer día de la cuarta, décima y vigésima semana24. Los resultados indicaron que, en comparación con el grupo control, la textura pulmonar del grupo modelo exhibió un engrosamiento gradual. Hacia la10ª semana, se observaba la formación de diminutos focos nodulares, y hacia la20ª semana, los nódulos se habían convertido en focos de sombra discernibles. A la luz de estos hallazgos, se puede postular que la formación de focos de sombra en los pulmones se asocia con la inflamación crónica inducida por NNK25. Sin embargo, dado que este estudio fue diseñado para observar el desarrollo seguro, eficiente e inocuo de la NP a LC sin involucrar estudios patológicos en animales, los estudios posteriores deben realizarse de acuerdo con protocolos experimentales específicos26. La Figura 4 ilustra las alteraciones en las imágenes pulmonares observadas en animales de experimentación en las semanas 4, 10 y 20.

figure-results-1
Figura 1: Diseño experimental para el tratamiento con NNK en ratones A/J. A cinco ratones hembra A/J se les inyectó el compuesto NNK en un solo momento, mientras que a otros cinco se les inyectó solución salina como control. Las muestras de sangre se recogieron en las semanas 4, 10 y 20 mediante microtomografías computarizadas de los pulmones del ratón y la extracción de sangre de las venas submaxilares. Los datos obtenidos fueron validados de forma cruzada para evaluar la progresión de la enfermedad en los ratones. (A) Visión general del diseño experimental. (B) Diagrama de la muestra de sangre de la arteria submaxilar. (C) Representación esquemática de la configuración de imágenes de micro-TC, que muestra el ratón colocado en la cama del animal (azul) y el marco amarillo como visor, que debe cubrir completamente el tejido pulmonar del ratón. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

figure-results-2
Figura 2: Cambios de peso en ratones durante 20 semanas. Las tendencias de peso indicaron que el tratamiento con NNK en ratones A/J no redujo significativamente el peso corporal. La microtomografía computarizada y la extracción de sangre de las venas submaxilares pueden causar cierto estrés a los ratones; sin embargo, se recuperaron rápidamente. Los datos se expresan como media ± SEM, (n = 5). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

figure-results-3
Figura 3: Recuentos de células sanguíneas a lo largo del tiempo. Se midió el contenido de glóbulos blancos, plaquetas, glóbulos rojos y hemoglobina en ratones en las semanas 4, 10 y 20. En comparación con el grupo de control, el grupo NNK mostró una tendencia creciente en el número de glóbulos blancos y plaquetas, mientras que los niveles de hemoglobina y glóbulos rojos no cambiaron significativamente. Estos hallazgos sugieren que el proceso de transformación de la PN-LC se asocia con un aumento de la inflamación y que el método de recolección de sangre en la vena submaxilar, realizado a intervalos de más de 4 semanas, no causa infección ni daño a la función hematopoyética en ratones. (A) Glóbulos blancos. b) Plaquetas. (C) Glóbulos rojos. (D) Hemoglobina. Los datos se expresan como media ± SEM, (n = 5). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

figure-results-4
Figura 4: Imágenes de microtomografía computarizada de ratones en las semanas 4, 10 y 20. Los resultados de las imágenes de micro-TC demuestran que el tratamiento con NNK en ratones A/J simula eficazmente el proceso de transformación de la PN-LC. En comparación con el grupo de control, el grupo NNK comenzó a mostrar características de engrosamiento y textura alterada en las imágenes pulmonares en la semana 10. En la semana 20, se distinguieron focos de sombra robustos dentro del tejido pulmonar. (A) Imágenes de la semana 4. (B) Imágenes de la semana 10. (C) Imágenes de la semana 20. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Discussion

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Es importante reiterar varios puntos clave de este estudio. En primer lugar, aunque la extracción de sangre de la vena submandibular es un procedimiento de lesiones relativamente bajas, puede provocar algún grado de daño a los animales. Por lo tanto, es necesario realizar múltiples procedimientos para reducir la carga en los ratones y completar el proceso de manera oportuna27. En segundo lugar, la eliminación del vello antes de la recolección de la muestra de sangre garantiza la pureza de la muestra. En tercer lugar, es imperativo utilizar vasos de recolección de sangre adecuados. En el presente estudio, se emplearon vasos de recolección de sangre que contenían EDTA para las pruebas de sangre de rutina. Si se utilizara suero, se requerirían vasos específicamente diseñados para la recolección de sangre pura28. En cuarto lugar, todos los anestésicos tienen un cierto nivel de letalidad; Por lo tanto, minimizar el tiempo de anestesia e imagen puede salvaguardar eficazmente la salud de los ratones. En quinto lugar, dado que la micro-TC puede observar una variedad de tejidos y órganos, los ajustes de parámetros específicos en el software de micro-TC utilizado durante la imagen de NP pueden ser referenciados a partir de este estudio, pero pueden no ser aplicables a otros tejidos29,30.

Los estudios previos se inclinaron más por la eutanasia de los animales en puntos de tiempo fijos y examinaron el proceso de transformación de los nódulos pulmonares a través de la tinción patológica31. Este enfoque dio lugar a un número considerable de muertes entre los animales de experimentación y dificultó el seguimiento en tiempo real de los cambios pulmonares. En comparación con las técnicas convencionales, la toma de muestras de sangre submandibular y la microtomografía computarizada ofrecen varias ventajas, como el daño mínimo, la monitorización en tiempo real, el funcionamiento intuitivo y la versatilidad. En este estudio, se eligió la extracción de sangre submandibular como el método preferido para la obtención de muestras de sangre para las pruebas de rutina32. Además, la sangre se puede utilizar para análisis proteómicos, farmacológicos séricos y bioquímicos sanguíneos.

Del mismo modo, en este estudio se empleó la micro-TC para observar el crecimiento dinámico de la NP en ratones experimentales sin necesidad de sacrificarlos. Este enfoque facilita una evaluación más intuitiva y precisa del efecto inhibidor del fármaco sobre la NP, al tiempo que reduce significativamente el número de animales necesarios para el experimento, mejorando así la precisión de los resultados experimentales. En particular, la combinación de estas dos tecnologías permite un seguimiento exhaustivo de los procesos de formación, desarrollo y carcinogénesis de nódulos en animales de experimentación, así como la localización de alteraciones en objetivos clave (como el TNF-α)33. Esto presenta un concepto único para esta investigación sobre la NP e incluso el cáncer de pulmón.

Sin embargo, hay varias cuestiones que requieren una mayor consideración para mejorar la calidad de las investigaciones futuras. Dado el largo período experimental requerido para el modelo animal de NNK combinado con ratones A/J, es imperativo que las inyecciones tempranas de medicamentos se realicen con la máxima precisión34. En segundo lugar, el método estándar para producir adenocarcinoma de pulmón en ratones involucra NNK en coordinación con ratones hembra A/J, con el mecanismo subyacente relacionado con el estradiol. Por lo tanto, es fundamental considerar los mecanismos específicos de acción de los fármacos terapéuticos involucrados35. Además, no se utilizó la micro-TC para determinar la naturaleza de los focos de sombra, lo que requirió el uso de tinción con hematoxilina y tinción con fluorescencia, que aún requieren la eutanasia de los ratones para obtener muestras de tejido pulmonar. Por último, aunque la micro-TC tiene la ventaja de una baja exposición a la radiación, aún puede causar ciertos daños en el cuerpo humano, lo que requiere evitar la proximidad con personal no relacionado36. Para abordar estos problemas, la diferenciación y el marcaje de varios tejidos, vías respiratorias y vasos sanguíneos se pueden lograr de manera efectiva mediante la inyección de un agente de contraste en la vena de la cola. Además, la micro-TC combinada con nuevos fármacos materiales (por ejemplo, nanopartículas) puede emplearse para un tratamiento más preciso. Por último, la tecnología de micro-TC se ha integrado gradualmente con la patología, como la histología espacial y de imagen, para realizar un seguimiento más dinámico de los cambios en los nódulos pulmonares36,37.

Disclosures

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Los autores no tienen nada que revelar.

Acknowledgements

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Agradecemos al Profesor Cong Huang, de la Facultad de Ciencias Médicas Básicas, y al Profesor Yan Huang, de la Facultad de Farmacia de la Universidad de Medicina Tradicional China de Chengdu, por su apoyo. También nos gustaría agradecer al Dr. Binjie Xu y al Dr. Pengmei Guo. (Instituto Innovador de Medicina y Farmacia China, Chengdu
Universidad de Medicina Tradicional China) para proporcionar instrumental y apoyo técnico.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Ratones A/JGemPharmatech LLC.
tubos de EDTA de 0,5 mLLabshark 
1-butanona,4-(metilnitrosoamino)-1-(3-piridinil)Gu Shi Gong Yuan Medical Equipment Co.
75% etanolChengDu Chron Chemicals Co,. Ltd2023052901
Afeitadora de animalesCodosBM010220
IsofluranoShenzhen Reward Life Technology Co.R510-22-16
tricorder médicoMedChemexpress69652
Quantum GX2 sistema de imágenes microCTPerkinElme2020166501
solución salina (medicina)Beijing Biolabs Technology Co.GL1736‌
N000018130201070N589770

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  21. Tobacco-induced hyperglycemia promotes lung cancer progression via cancer cell-macrophage interaction through paracrine IGF2/IR/NPM1-driven PD-L1 expression. Nat Commun. 15 (1), 4909(2024).">Jang, H. J., et al. Tobacco-induced hyperglycemia promotes lung cancer progression via cancer cell-macrophage interaction through paracrine IGF2/IR/NPM1-driven PD-L1 expression. Nat Commun. 15 (1), 4909(2024).
  22. Curcumin analogue EF24 prevents alveolar epithelial cell senescence to ameliorate idiopathic pulmonary fibrosis via activation of PTEN. Phytomedicine. 133, 155882(2024).">Zhang, Y., et al. Curcumin analogue EF24 prevents alveolar epithelial cell senescence to ameliorate idiopathic pulmonary fibrosis via activation of PTEN. Phytomedicine. 133, 155882(2024).
  23. Isoflurane anesthesia decreases excitability of inhibitory neurons in the basolateral amygdala leading to anxiety-like behavior in aged mice. Exp Ther Med. 28 (4), 399(2024).">Li, M., et al. Isoflurane anesthesia decreases excitability of inhibitory neurons in the basolateral amygdala leading to anxiety-like behavior in aged mice. Exp Ther Med. 28 (4), 399(2024).
  24. Hypermethylation of the ADIRF promoter regulates its expression level and is involved in NNK-induced malignant transformation of lung bronchial epithelial cells. Arch Toxicol. 97 (12), 3243-3258 (2023).">Xiong, R., et al. Hypermethylation of the ADIRF promoter regulates its expression level and is involved in NNK-induced malignant transformation of lung bronchial epithelial cells. Arch Toxicol. 97 (12), 3243-3258 (2023).
  25. Thearubigins/polymeric black tea polyphenols (PBPs) do not prevent benzo[a]pyrene (B[a]P) induced lung tumors in A/J mice. Am J Transl Res. 15 (9), 5826-5834 (2023).">Shaikh, Z. M., et al. Thearubigins/polymeric black tea polyphenols (PBPs) do not prevent benzo[a]pyrene (B[a]P) induced lung tumors in A/J mice. Am J Transl Res. 15 (9), 5826-5834 (2023).
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  27. A flow cytometry-based examination of the mouse white blood cell differential in the context of age and sex. Cells. 13 (18), 1583(2024).">Arlt, E., et al. A flow cytometry-based examination of the mouse white blood cell differential in the context of age and sex. Cells. 13 (18), 1583(2024).
  28. Feasibility of using serum, plasma, and platelet 5-hydroxytryptamine as peripheral biomarker for the depression diagnosis and response evaluation to antidepressants: Animal experimental study. Clin Psychopharmacol Neurosci. 22 (4), 594-609 (2024).">Su, Z., et al. Feasibility of using serum, plasma, and platelet 5-hydroxytryptamine as peripheral biomarker for the depression diagnosis and response evaluation to antidepressants: Animal experimental study. Clin Psychopharmacol Neurosci. 22 (4), 594-609 (2024).
  29. Mechanosensitive lncRNA H19 promotes chondrocyte autophagy, but not pyroptosis, by targeting miR-148a in post-traumatic osteoarthritis. Noncoding RNA Res. 10, 163-176 (2025).">Zhou, X., et al. Mechanosensitive lncRNA H19 promotes chondrocyte autophagy, but not pyroptosis, by targeting miR-148a in post-traumatic osteoarthritis. Noncoding RNA Res. 10, 163-176 (2025).
  30. Cardamonin attenuates iron overload-induced osteoblast oxidative stress through the HIF-1α/ROS pathway. Int Immunopharmacol. 142 (Pt A), 112893(2024).">Chen, C., et al. Cardamonin attenuates iron overload-induced osteoblast oxidative stress through the HIF-1α/ROS pathway. Int Immunopharmacol. 142 (Pt A), 112893(2024).
  31. Hypoxia promotes non-small cell lung cancer cell stemness, migration, and invasion via promoting glycolysis by lactylation of SOX9. Cancer Biol Ther. 25 (1), 2304161(2024).">Yan, F., et al. Hypoxia promotes non-small cell lung cancer cell stemness, migration, and invasion via promoting glycolysis by lactylation of SOX9. Cancer Biol Ther. 25 (1), 2304161(2024).
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  33. Quercetin through miR-147-5p/CLIP3 axis reducing Th17 cell differentiation to alleviate periodontitis. Regen Ther. 27, 496-505 (2024).">An, Y., et al. Quercetin through miR-147-5p/CLIP3 axis reducing Th17 cell differentiation to alleviate periodontitis. Regen Ther. 27, 496-505 (2024).
  34. Diallyl disulfide blocks cigarette carcinogen 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone-induced lung tumorigenesis via activation of the Nrf2 antioxidant system and suppression of NF-κB inflammatory response. J Agric Food Chem. 71 (46), 17763-17774 (2023).">Tian, J., et al. Diallyl disulfide blocks cigarette carcinogen 4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone-induced lung tumorigenesis via activation of the Nrf2 antioxidant system and suppression of NF-κB inflammatory response. J Agric Food Chem. 71 (46), 17763-17774 (2023).
  35. Wutou decoction alleviates arthritis inflammation in CIA mice by regulating Treg cell stability and Treg/Th17 balance via the JAK2/STAT3 pathway. J Ethnopharmacol. 334, 118463(2024).">Han, L., et al. Wutou decoction alleviates arthritis inflammation in CIA mice by regulating Treg cell stability and Treg/Th17 balance via the JAK2/STAT3 pathway. J Ethnopharmacol. 334, 118463(2024).
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  37. Using broadly targeted plant metabolomics technology combined with network pharmacology to explore the mechanism of action of the Yishen Gushu formula in the treatment of postmenopausal osteoporosis in vivo. J Ethnopharmacol. 333, 118469(2024).">Liu, H., et al. Using broadly targeted plant metabolomics technology combined with network pharmacology to explore the mechanism of action of the Yishen Gushu formula in the treatment of postmenopausal osteoporosis in vivo. J Ethnopharmacol. 333, 118469(2024).

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