Artículo de método

Un procedimiento de cirugía craneotomía para imágenes cerebrales crónicas

DOI:

10.3791/680

15 de febrero de 2008

En este artículo

Resumen

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Este video y el protocolo de demostrar cómo la implantación de una cubierta de cristal ventana craneal en los roedores. Estas preparaciones se pueden utilizar para la crónica en vivo de dos fotones de imágenes de la corteza cerebral en escalas de tiempo de meses. También puede ser utilizado para otros tipos de imágenes, incluyendo imágenes ópticas señal intrínseca.

Resumen

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Las técnicas de imagen son cada vez más importante en la función cerebral de estudio. Entre ellos, dos fotones microscopía de escaneo láser se ha convertido en un método muy útil, porque permite el estudio del cerebro intacto en vivo. Con los preparativos adecuados, esta técnica permite la observación de la zona cortical misma crónica, de minutos a meses. En este vídeo, se muestra una preparación para la crónica en imágenes in vivo del cerebro usando la microscopía de dos fotones. Esta técnica fue inicialmente promovida por el Dr. Karel Svoboda, quien es ahora un Howard Hughes Medical Institute en la Granja Janelia. Preparaciones como la que se muestra aquí se puede utilizar para obtener imágenes de la estructura neocortical (por ejemplo, la dinámica, dendríticas y axonal), para registrar la actividad neuronal con tintes sensibles al calcio, a la imagen de la dinámica del flujo sanguíneo cortical, o para los estudios de imagen óptica intrínseca. Imágenes profundas de la corteza cerebral es posible con óptima cirugías ventana craneal. Operando bajo las condiciones más estériles posible para evitar infecciones, junto con el uso de un cuidado extremo para no dañar la duramadre durante la cirugía, se traducirá en éxito y duradera cubierta de cristal y craneal.

Protocolo

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  1. Anestesiar a los ratones con isoflurano (4% para la inducción, 1,5-2% para la cirugía) con IACUC los procedimientos aprobados. Es importante que la cola y / o aprieta los pies se utilizan con el fin de garantizar que el animal está completamente sedado.
  2. Uso de un optimizador de roedores, se afeitan el pelo de la parte posterior del cuello hasta los ojos.
  3. Coloque el ratón en un marco estereotáxico, más de una cirugía de agua de recirculación de manta. Sujetar firmemente la cabeza con barras de oído.
  4. Aplicar pomada para los ojos, con el fin de evitar que el ojo del animal que se sequen.
  5. Administrar por vía subcutánea, dexametasona (0,2 mg / Kg) ....

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Discusión

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Como hemos mostrado en el video y en las figuras complementarias, la preparación de la ventana del cráneo, combinada con el uso de la microscopia de dos fotones, es una herramienta muy poderosa para estudiar in vivo la estructura y función del neocórtex. La técnica requiere de un riguroso entrenamiento para familiarizarse con la anatomía pertinente y los procedimientos quirúrgicos muy bien y las habilidades que requiere esta preparación. Sólo cirugías originales pueden ser utilizados para obtener imágenes de crónica. Si la duración es manip.......

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Materiales

Barras de titanio están hechas a medida

Referencias

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  1. Svoboda, K., Denk, W., Kleinfeld, D., Tank, D. W. In vivo dendritic calcium dynamics in neocortical pyramidal neurons. Nature. 85, 161-165 (1997).
  2. Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing....

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