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Artículo de método

Análisis de genes diferenciales y validación de disulfidepttosis en un modelo de lesión por isquemia-reperfusión miocárdica en ratas

630 vistas

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DOI:

10.3791/68019

⸱

18 de abril de 2025

 , 
1Department of Cardiovascular Medicine, The Affiliated Hospital of Guizhou Medical University

En este artículo

Resumen

El protocolo describe la identificación de varios genes diferenciales nuevos relacionados con la disulfideptosis asociados con la lesión por isquemia-reperfusión miocárdica mediante análisis bioinformático y validación experimental.

Resumen

La lesión miocárdica por isquemia-reperfusión (MIRI) es una lesión adicional que ocurre durante el proceso de restaurar el flujo sanguíneo del tejido cardíaco después de una lesión inducida por isquemia. La MIRI afecta seriamente la eficacia y el pronóstico a corto y largo plazo de la reperfusión después del infarto de miocardio. En la actualidad, el mecanismo de MIRI no está del todo claro. La disulfideptosis es un nuevo modo de muerte celular, y la relación entre MIRI y la expresión de genes relacionados con la disulfideptosis (DRG) aún no está clara. En primer lugar, este estudio explora los genes diferencialmente expresados asociados con la disulfideptosis en MIRI a través del análisis bioinformático. En segundo lugar, mediante la construcción de un modelo de rata de MIRI, se detectaron aún más DRG. Este estudio identificó 12 genes relacionados, incluidos Myh9, SLC7A11, SLC3A2, Myh7b, ACTB, FLNB, Actn1, Actn4, Flnc, Dbn1 y Pdlim1. El tejido miocárdico de ratas con MIRI muestra daño patológico evidente y eventos de apoptosis. Los resultados de la inmunohistoquímica indicaron que la estimulación con MIRI aumentó la expresión de la proteína GLUT1 en el tejido miocárdico, pero restringió la expresión de la proteína F-actina. Además, se validaron diferencias significativas en la expresión de tres proteínas utilizando conjuntos de datos externos y modelos de ratas MIRI. Este estudio demostró que los DRG tenían un valor predictivo significativo en MIRI, proporcionando nuevas perspectivas para explorar biomarcadores y posibles dianas terapéuticas de MIRI.

Introducción

El infarto agudo de miocardio (IAM) es una afección cardiovascular grave y sigue siendo una de las principales causas mundiales de mortalidad. La intervención coronaria percutánea ha reducido significativamente las tasas de mortalidad en pacientes con IAM1. Sin embargo, la terapia de reperfusión dirigida a restaurar el riego sanguíneo miocárdico se acompaña de una serie de respuestas patológicas y fisiológicas adversas. Estos procesos pueden resultar en un aumento del tamaño del infarto, muerte de las células miocárdicas, arritmias ventriculares sostenidas y muerte súbita2. La lesión por isquemia-reperfusión miocárdica (IRIM) es una afección cardiovascular compleja influenciada por factores como citocinas, quimiocinas, factores de crecimiento, estrés oxidativo y sobrecarga de calcio3. La mitigación de la MIRI sigue siendo un reto importante.

Recientemente, la disulfideptosis ha surgido como una nueva forma de muerte celular caracterizada por el rápido colapso de la red de actina del citoesqueleto debido a la acumulación excesiva de disulfuros, incluida la cisteína, dentro de las células, como resultado de la depleción de NADPH+. La acumulación excesiva de disulfuro interrumpe los enlaces disulfuro entre las proteínas del citoesqueleto, lo que conduce a la migración de actina y la muerte celular 4,5. A diferencia de las formas de muerte celular previamente reportadas, como la apoptosis, la necrosis, la piroptosis y la ferroptosis, la disulfideptosis se inicia por la agregación excesiva de disulfuros intracelulares y no es antagonizada por inhibidores específicos de otras vías de muerte celular. Como muerte celular distintiva, la evidencia ha indicado que la deficiencia celular de glucosa provocada por la sobreexpresión SLC7A11 puede desencadenar disulfidptosis4. Después de MIRI, la secreción insuficiente de insulina puede inducir hipoglucemia y posterior disulfidptosis, lo que puede causar un mayor daño a las células miocárdicas y puede ser uno de los mecanismos novedosos de MIRI5.

En este estudio, el objetivo principal fue utilizar bases de datos completas de expresión génica, como el Ómnibus de Expresión Génica (GEO), para analizar la expresión génica diferencial entre muestras normales y MIRI. Realizamos un análisis cruzal entre genes expresados diferencialmente y genes asociados a la disulfideptosis, con el objetivo de identificar genes relacionados con la disulfideptosis (GRD) que presentan expresión diferencial en MIRI. Se emplearon algoritmos de aprendizaje automático para identificar genes clave y validamos los patrones de expresión de los genes diferenciales de interés seleccionados utilizando un modelo animal. Este enfoque proporciona una nueva perspectiva para obtener una comprensión más profunda de los posibles mecanismos que subyacen al inicio y la progresión de MIRI. El objetivo principal de esta investigación fue investigar un nuevo mecanismo de muerte celular dentro de MIRI, descubrir genes diferenciales asociados y realizar experimentos preliminares para validar estos hallazgos. El objetivo final era identificar nuevas dianas terapéuticas para mitigar la MIRI basadas en este mecanismo emergente de muerte celular.

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Protocolo

Para este estudio, se seleccionaron nueve ratas macho Sprague-Dawley (SD), de 6-8 semanas de edad y con un peso de 180-220 g, del Centro de Investigación de Animales Experimentales de Hubei [SCXK (Hubei) 20200018]. Las ratas se mantuvieron en establos de animales libres de patógenos específicos para aclimatarse durante 1 semana, con un ciclo de luz y oscuridad de 12 h/12 h, bebiendo y comiendo libremente. El presente estudio se llevó a cabo con la aprobación del Comité de Ética Animal del Tercer Hospital Afiliado de la Universidad Médica de Zunyi (número de aprobación: (2016)-1-56). Todos los procedimientos se realizaron de acuerdo con las recomendaciones descritas en la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio publicada por los Institutos Nacionales de Salud de los Estados Unidos. Se implementaron medidas estrictas para minimizar el número de animales utilizados y mitigar su sufrimiento.

1. Análisis de expresión diferencial de genes relacionados con MIRI y disulfideptosis

NOTA: Se seleccionaron los datos de secuenciación de ARN de MIRI denominados GSE214122 para detectar genes asociados con la disulfideptosis según el informe de la literatura6.

  1. Abra la base de datos GEO, escriba GSE214122 en el cuadro de búsqueda y haga clic en Entrar. Descargue los archivos de matriz de serie generados en formato TXT en la sección Descargar.
    NOTA: Antes de realizar el análisis de datos, normalmente es necesario preprocesar los datos descargados. Esto incluye la comprobación de los valores faltantes, la eliminación de muestras y genes de baja calidad, y la normalización o estandarización de los datos. El conjunto de datos GSE214122 recuperado contenía muestras de los grupos operados simuladamente y MIRI.
  2. Realizar análisis de expresión génica diferencial de las muestras utilizando el paquete DESeq27. Considere los genes con |log2FC|>1 (cambio de pliegue mayor que 2) y FDR<0.05 como estadísticamente significativos, lo que resulta en la identificación de genes expresados diferencialmente asociados con MIRI. Genere un mapa de calor de la expresión génica diferencial en el paso 1.2 utilizando el paquete de mapa de calor7 de R.
  3. Construya un diagrama de Venn utilizando el paquete VennDiagram7 de R (consulte Tabla de materiales). Genere gráficos de volcanes para visualizar genes relacionados con la disulfideptosis utilizando un paquete EnhancedVolcano en R7.
  4. Construir una red PPI que conecte los genes MIRI expresados diferencialmente con los genes de disulfideptosis utilizando la base de datos STRING7 (ver Tabla de Materiales).

2. Construcción del modelo MIRI de ratas

  1. Ayuna a las ratas durante la noche antes de realizar la anestesia. Anestesiar ratas mediante inyección intraperitoneal de pentobarbital sódico al 2% (40 mg/kg) y asegurar las extremidades a una tabla de ratas en posición supina. Confirma la profundidad de la anestesia al no responder al pellizco de los dedos de los pies, la pérdida del reflejo de enderezamiento y el reflejo de guiño. Use ungüento veterinario para prevenir la sequedad mientras está bajo anestesia.
  2. Desinfectar la piel del cuello y el escote con yodoforo y desyodinar con alcohol al 75%. Afeitar el pelaje del cuello y el pecho izquierdo con una navaja eléctrica y hacer una incisión mediana del cuello de aproximadamente 2,5 cm de largo con un bisturí (ver Tabla de Materiales).
  3. Separe la tráquea con pinzas y realice la intubación endotraqueal con una conexión a un ventilador para animales pequeños3 (ver Tabla de Materiales).
  4. Cortar 4 cm longitudinalmente a lo largo del lado izquierdo del esternón con unas tijeras oftálmicas y separar sin rodeos los músculos subcutáneos con pinzas para exponer la pleura entre la tercera y la cuarta costilla.
  5. Haga una incisión de 4-5 cm desde la apófisis xifoides hasta el centro del segundo espacio intercostal izquierdo mientras sostiene el bisturí en un ángulo de 45°. Separe suave y lentamente los músculos pectoral mayor y serrato anterior con pinzas oftálmicas para acceder al espacio intercostal.
  6. Realice una incisión transversal de 1,5 cm entre la tercera y la cuarta costilla izquierdas con unas tijeras oftálmicas. Después de diseccionar el pericardio con pinzas oftálmicas, eleve el apéndice auricular izquierdo con pinzas para identificar el ostium coronario en la raíz aórtica.
  7. Ligadura de la arteria coronaria descendente anterior izquierda entre el cono pulmonar y la orejuela auricular izquierda mediante una sutura 6-0 (ver Tabla de Materiales).
  8. Después de 30 minutos, afloje la sutura para permitir la reperfusión durante 120 minutos, seguido del cierre de las capas musculares y cutáneas con una sutura 6-0. Aplicar penicilina (ver Tabla de Materiales) inyectando por vía intraperitoneal 80.000-100.000 unidades.
  9. En el grupo simulado, se deben realizar todos los procedimientos como se hizo para el grupo modelo, pero solo se enhebrar la arteria coronaria descendente anterior izquierda sin ligadura ni reperfusión.
  10. Una vez que las ratas recuperen la conciencia, retire los tubos endotraqueales. Regrese las ratas al establo para su recuperación, donde tendrán libre acceso a comida y agua. Alojar a la rata sometida a cirugía en una jaula individual con un sistema de ventilación independiente en un laboratorio estéril.
  11. Durante 30 min de isquemia y 120 min de reperfusión, realizar ecocardiografía. El modelo se consideró exitoso si la fracción de eyección del ventrículo izquierdo era inferior al 50%1,6.

3. Recolecta tejido cardíaco3

  1. Después de 120 min de reperfusión, coloque las ratas en el recipiente de eutanasia para implementar la eutanasia por inhalación de dióxido de carbono. Recoja los tejidos del corazón de la rata inmediatamente.
  2. Retire el vello abdominal de las ratas con un dispositivo de afeitado y esterilice el área anterior del tórax con yodo y alcohol al 75%. Disecciona la cavidad abdominal de la rata a lo largo de la línea media del abdomen con un bisturí.
  3. Corte la piel desde la apófisis xifoides hasta el espacio submandibular con unas tijeras quirúrgicas y retire sin romorder la piel y el tejido subcutáneo con pinzas a ambos lados para exponer la caja torácica y la capa muscular cervical superficial (ver Tabla de Materiales).
  4. Abra el tórax y la pleura a lo largo de la línea media con una tijera quirúrgica para exponer el corazón, pinza la aorta con una pinza vascular y corte la arteria con unas tijeras oftálmicas. Extraer el corazón y diseccionar en bloque de tejido de1 mm 3 en solución salina fría en baño de hielo y fijar con paraformaldehído al 4% durante 48 h (ver Tabla de Materiales).

4. Tinción con hematoxilina-eosina (H&E)

  1. Deshidratación e incrustación: Deshidrate el bloque de tejido cardíaco sumergiéndolo en secuencia en 75% de alcohol, 85% de alcohol, 95% de alcohol (I), 95% de alcohol (II), 100% de alcohol (I) y 100% de alcohol (II) durante 1 h en cada solución. Transparentar con xileno (I) y xileno (II) sumergiendo durante 15 min en cada solución. Coloque el bloque de tejido cardíaco en parafina líquida (I), parafina (II) y parafina (III) durante 20-30 minutos en secuencia. Deje que el bloque de parafina se enfríe naturalmente hasta que se solidifique.
  2. Cortar el bloque de tejido cardíaco incrustado en parafina en secciones de 4 μm utilizando una máquina cortadora de parafina (ver Tabla de Materiales). Coloque las secciones planas con un cepillo suave en un baño de agua a 45 °C y luego recoja las secciones completamente expandidas con una corredera.
  3. Desparafinado: Hornear las rodajas en un horno durante 30-60 min a 55 °C, y desparafinar con xileno (I) durante 5-10 min y xileno (II) durante 5-10 min. Luego, lave el xileno con etanol absoluto durante 1-5 minutos, etanol al 95% durante 1-5 minutos y etanol al 75% durante 1-5 minutos, y enjuague con agua del grifo durante 1-5 minutos.
  4. Tinción: Teñir con una solución de hematoxilina durante 5-20 min, enjuagar con agua del grifo durante 5-10 s, teñir con una solución de eosina durante 15-30 s y lavar con etanol al 75%-85% durante 30 s.
  5. Deshidratante, transparente y sellador: Deshidratar con etanol (I) al 95% durante 0,5-2 min y etanol (II) al 95% durante 2-5 min, seguido de etanol absoluto (I) durante 2-5 min y etanol absoluto (II) durante 2-5 min. Transparentar con xileno (I) durante 1 min y xileno (II) durante 1 min, y luego sellar la rodaja añadiendo dos gotas de resina neutra sobre la rodaja y colocar un cubreobjetos. Presione ligeramente el vidrio de cubierta para llenar la rebanada con resina neutra (consulte la tabla de materiales).
  6. Observe cada corte bajo un microscopio óptico con un aumento de 200x de manera doble ciego por dos técnicos independientes.
    1. Seleccione tres campos visuales aleatorios para evaluar la congestión miocárdica, la hemorragia, la fibrosis, la necrosis y la degeneración. Utilice los siguientes criterios de puntuación: 0 indica que no hay lesión; 0-1 lesiones indicadas eran menos de 1/4 del área designada; 1-2 lesiones indicadas oscilaron entre aproximadamente 1/4 y 1/2 del área designada; 2-3 lesiones indicadas oscilaron entre aproximadamente 1/2-3/4 del área designada; y 3-4 lesiones indicadas eran mayores de 3/4 del área designada.

5. Ensayo TUNEL:

  1. Diluir la proteinasa K con una solución tampón de fosfato (PBS) a 40 μg/mL y añadir 100 μL de proteinasa K a 4 μm en secciones de 4 μm preparadas en el paso 4.3 para cubrir toda el área de la muestra e incubar durante 10 min a temperatura ambiente.
    NOTA: La proteinasa K está incluida en el kit de detección de apoptosis TUNEL (ver Tabla de Materiales).
  2. Lave la sección 2 veces con PBS durante 5 minutos cada una, elimine el exceso de líquido por succión con papel de filtro y mantenga la sección húmeda en una caja húmeda.
    NOTA: La proteinasa K debe lavarse para no interferir con las reacciones de etiquetado posteriores.
  3. Añadir uniformemente 50 μL de solución de reacción TUNEL que contenga 2 μL de enzima TdT y 48 μL de tampón de reacción TUNEL y colocar la sección en una caja húmeda para incubar a 37 °C en la oscuridad durante 2 h.
    NOTA: La enzima TdT y el tampón de reacción TUNEL están incluidos en el kit de detección de apoptosis TUNEL.
  4. Deseche la solución de reacción TUNEL y enjuague 2 veces con PBS durante 5 minutos cada una. Lave la sección 3 veces durante 5 minutos, cada una con PBS que contiene 0.1% de Triton X-100 y 5 mg/mL de BSA.
  5. Añadir uniformemente 50 μL de solución de tinción DAPI e incubar durante 10 min a temperatura ambiente en la oscuridad. Deseche la solución de tinción DAPI y remoje la sección en PBS, 3 veces, 5 minutos cada vez.
  6. Obtenga señales rojas TUNEL y azules DAPI a longitudes de onda de excitación y emisión de 593/614 nm y 364/454 nm, respectivamente. Capture imágenes bajo un microscopio de fluorescencia con un aumento de 200x (consulte la tabla de materiales).

6. Tinción inmunohistoquímica

  1. Añadir 200 μL de tampón bloqueante de peroxidasa endógena mejorada a la sección del paso 4.3 e incubar durante 10 min a temperatura ambiente en la oscuridad. Lave las secciones 2 veces con agua destilada durante 5 minutos cada una.
  2. Agregue 1 mL de solución mejorada de recuperación de antígeno de citrato y 49 mL de agua bidestilada a la caja de incubación de anticuerpos y mezcle suavemente. Sumerja la sección en la solución de recuperación de antígenos y caliente a 95 °C durante 20 minutos antes de enfriar a temperatura ambiente (consulte la tabla de materiales).
  3. Lave la sección 2 veces con PBS durante 5 minutos cada una. Colocar la sección en la caja de incubación de anticuerpos para incubar con 100 μL de anticuerpos primarios contra F-actina (1:100), GLUT1 (1:200), Myh9 (1:200), SLC7A11 (1:200) y SLC3A2 (1:200) durante la noche a 4 °C.
  4. Lave la sección 2 veces con PBS durante 5 minutos cada una. Añadir 100 μL de anticuerpo secundario a la sección e incubar durante 20 min a temperatura ambiente.
  5. Lave la sección 2 veces con PBS durante 5 minutos cada una. Teñir con 100 μL de solución de trabajo DAB durante 5 min a temperatura ambiente y detener la reacción de color enjuagando con agua purificada.
    NOTA: La solución de trabajo DAB se preparó mezclando la solución cromogénica DAB A y la solución cromogénica DAB B en una proporción de 1:1, que se incluye en el kit de desarrollo de color de peroxidasa de rábano picante DAB (consulte la Tabla de materiales).
  6. Teñir la sección con 100 μL de solución de tinción de hematoxilina durante 3 min y lavar con agua corriente durante 3 min (ver Tabla de Materiales).
    NOTA: El kit de tinción de hematoxilina y eosina incluye una solución de tinción de hematoxilina.
  7. Sumerja la sección en etanol al 75%, etanol al 95% y etanol al 100% durante 2 minutos en cada uno.
  8. Selle la sección con resina neutra, cúbrala con un cubreobjetos y examine la sección bajo un microscopio óptico con un aumento de 200x (consulte la tabla de materiales). Los tejidos que exhiben un color marrón son reacciones positivas. Calcule la tasa de expresión positiva como la relación entre el área teñida y el área total del campo de visión. Realice análisis cuantitativos utilizando el software Image J.

7. Detección de Western blot

NOTA: El tampón de lisis y el inhibidor de la proteasa se incluyeron en un kit de cuantificación de proteínas BCA (ver Tabla de materiales).

  1. Pesar 0,1 g de muestras de miocardio frescas del paso 3.5 y mezclar con 1 ml de tampón de lisis y 10 μl de inhibidor de la proteasa, seguido de una molienda en un recipiente de vidrio para moler y centrifugar a 10,304 x g durante 10 min a 4 °C.
  2. Recoja el sobrenadante y realice la cuantificación de proteínas utilizando el método BCA de acuerdo con las instrucciones del fabricante8. Hervir el sobrenadante a 95 °C durante 5 min.
  3. Separe proteínas de diferentes pesos moleculares utilizando gel separador al 10% cargando 10 μL de muestra para electroforesis de proteínas a 80/120 V.
  4. Transfiera las proteínas del gel a una membrana de PVDF9. Posteriormente, bloquear la membrana con leche desnatada en polvo al 5% durante 1 h e incubar durante la noche a 4 °C con anticuerpos primarios Myh9, SLC7A11, SLC3A2 y β-tubulina a una dilución de 1:1000 (ver Tabla de Materiales).
  5. Después de lavar con PBS 3x durante 5 min cada uno, incubar la membrana con anticuerpo secundario (1:5000; ver Tabla de Materiales) a temperatura ambiente durante 2 h, seguido de un lavado con PBS 3x durante 5 min cada uno antes de la visualización con un instrumento de visualización de proteínas (ver Tabla de Materiales).
  6. Calcule la relación entre la escala de grises y la β-tubulina de las bandas utilizando el software Image J 8,9.

8. Análisis estadístico

  1. Exprese los datos como la media ± la desviación estándar. Analice los datos utilizando el análisis de varianza unidireccional seguido de la prueba post hoc de diferencia menos significativa. Realizar análisis estadísticos utilizando una herramienta comercial de análisis estadístico (ver Tabla de Materiales) y considerar p < 0.05 como estadísticamente significativo.

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Resultados

Cribado de GRD en MIRI
El conjunto de datos GSE214122 de Gene Expression Omnibus incluyó tres datos falsos y tres muestras MIRI. Utilizando el paquete DESeq2 en R, se identificaron 1233 genes expresados diferencialmente (DEGs) entre MIRI y muestras simuladas. Sobre la base de |log2FC|>2 y FDR<0.05, se seleccionaron 417 genes significativamente diferentes utilizando el paquete de mapas de calor de R (Figura 1A). Luego, se presentaron 15 genes de intersección entre es...

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Discusión

La disulfideptosis está estrechamente asociada con el citoesqueleto de actina, una estructura celular crítica esencial para mantener la forma y la viabilidad de las células. Compuesto por filamentos de actina, el citoesqueleto de actina imparte forma y estructura celular general. La F-actina sirve como marcador para el citoesqueleto celular y, en condiciones de inanición de glucosa, los enlaces disulfuro aumentan significativamente, lo que lleva a la regulación a la baja de la F-actina. ...

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Divulgaciones

Los autores no tienen nada que revelar.

Agradecimientos

Esta investigación contó con el apoyo de la Oficina Provincial de Ciencia y Tecnología de Guizhou (Qiankehe [2022]-583) y la Administración Provincial de Medicina Tradicional China de Guizhou (QZYY-2016-019).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
75% de alcoholHunan Tongruijian Pharmaceutical Co. Ltd., Hunan, China85026
6-0 sutura de nylonShanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co. Ltd., Shanghai, ChinaCS002
BCA kit de cuantificación de proteínasBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaP0011
Albúmina sérica de toroBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaST2254
CentrífugaHunan Kaida Scientific Instrument Co. Ltd., Hunan, ChinaKH19A DAB
kit de desarrollo de color peroxidasa de rábano picanteBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaP0203
Solución de tinción DAPIBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaPaquete
DESeq2Versión 4.1
Kelmerpp235376
Tampón bloqueador de peroxidasa endógeno mejoradoBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaP0100B 
Papel de filtroNanjing Keruicai Equipment Co., Ltd., Nanjing, China1.00049E+11
Microscopio de fluorescenciaNikonECLIPSE Ci
Base de datos GEOhttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/
Amoladora de vidrioShanghai Leigu Instrument Co. Ltd., Shanghai, ChinaB-013002
Prisma GraphPad SoftwareV8.0
Kit de tinción de hematoxilina y eosinaBeyotime Biotechnology, Shanghái, ChinaC0105M
Imagen J softwareInstitutos Nacionales de Salud, Bethesda, EE. UUv1.8.0
Solución mejorada de recuperación de antígeno de citrato (50X)Beyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaP0083
IodophorFolca, Shenzhen, China1.00077E+11
Microscopio ópticoNikonECLIPSE Ci
Solución tampón de fosfatoBeyotime Biotechnology, Shanghai, ChinaC0221A
Anticuerpos primarios contra GLUT1Proteintech Group, Inc, Wuhan, China21829-1-AP
Anticuerpos primarios contra MYH9Proteintech Group, Inc, Wuhan, China11128-1-AP
Anticuerpos primarios contra SLC3A2Wuhan Lingsi Biotechnology Co., Ltd., Wuhan, ChinaLJS-D-7468
Anticuerpos primarios contra SLC7A11Proteintech Group, Inc, Wuhan, China26864-1-AP
Instrumento de visualización de proteínasThermo Fisher Scientific Inc.iBright CL750
Tablero de rataZhengzhou Haopai Biotechnology Co. Ltd., Zhengzhou, ChinaJPB-E
BisturíShanghai Lianhui Medical Supplies Co., Ltd., Shanghai, China1.00471E+13
Anticuerpo secundarioWuhan Boster Biological Technology, Ltd., Wuhan, ChinaBA1054
STRING https://cn.string-db.org/Versión 12.0
Triton X-100Beyotime Biotechnology, Shanghái, ChinaST1722
TUNEL kit de detección de apoptosisProteintech Group, Inc., Wuhan, ChinaPF00009
C1006 Maquinilla de afeitar eléctrica . Base de datos

Referencias

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