Un nuevo método de fijación para el tratamiento de acupuntura en ratas

Resumen

Aquí, describimos un nuevo método de fijación de ratas que facilita la acupuntura y la moxibustión en la espalda de ratas.

Resumen

Los investigadores siempre se encuentran con el problema de que los animales son difíciles de controlar en los experimentos con animales relacionados con la acupuntura. Ya existen algunos métodos para evitar que los animales escapen de los sitios de tratamiento. Sin embargo, el efecto de estos métodos de fijación es diferente al del estado de tratamiento humano. Por lo tanto, hemos inventado un nuevo método de fijación para mantener a las ratas boca abajo, tranquilas y despiertas durante el tratamiento.

El equipo consta de una plataforma de sujeción de plástico poroso, una tela cuadrada de algodón y varias correas de sujeción para sujetar ratas. Primero, enrosque las correas de sujeción en la plataforma de sujeción. Para cada correa, pásala por dos agujeros en la misma fila, dejando dos agujeros entre ellos. Después de colocar la primera correa, inserte la otra correa en la plataforma de la misma manera, asegurando un espacio de cuatro filas entre las dos correas. En segundo lugar, agarra la cola de la rata y guíala hacia el canal formado por dos correas de sujeción. Cubre la cabeza de la rata con un paño de algodón cuadrado. En tercer lugar, apriete la correa de sujeción en el cuello para fijar la cabeza y las extremidades delanteras. A continuación, sujeta las extremidades traseras de la rata y aprieta la otra correa para fijar la cintura y las extremidades traseras.

Este método no requiere anestesia. El dispositivo es simple y fácil de operar. Para evaluar su eficacia y seguridad, administramos el procedimiento a 60 ratas. Todos ellos completaron el tratamiento de acupuntura sin complicaciones. Si bien 14 ratas exhibieron breves períodos de lucha durante el procedimiento, no se observaron efectos adversos. Los resultados demuestran que el método es eficaz y seguro para su uso.

Introducción

Tanto el modelado quirúrgico como la intervención in vitro requieren métodos de fijación animal adecuados. Esto asegura que los animales estén en la posición más maniobrable y relativamente cómoda. Nos centramos en el método de fijación animal para la intervención de acupuntura. La acupuntura es eficaz en el tratamiento de muchas enfermedades ^1,2. El estudio del mecanismo de la acupuntura ha recibido mucha atención. En la actualidad, la acupuntura y la moxibustión son temas de investigación candentes en el país y en el extranjero. El mecanismo patológico del tratamiento con acupuntura necesita ser explorado más a fondo y, además de los experimentos clínicos, también se necesita apoyo a la investigación básica ^3,4. En la investigación básica sobre acupuntura y moxibustión, la fijación animal es un paso técnico importante.

En la actualidad, los métodos de fijación comúnmente utilizados incluyen bondage, anestesia, balanceo, plataforma alta y otros métodos de fijación. Las ventajas y desventajas de estos métodos se describen a continuación.

El primer paso para realizar el método de fijación de la anestesia es anestesiar a las ratas. Al utilizar este método, los investigadores se enfrentan al riesgo de que las ratas mueran. También es posible operar directamente sin restricción después de la anestesia⁵. Cuando se utiliza el método de fijación de la plataforma del conejo, los investigadores insertan la cabeza de la rata en un calcetín recortado, extienden sus extremidades delanteras a través de los agujeros y aseguran sus patas a la plataforma del conejo con bandas elásticas. Este método facilita la selección del punto de acupuntura en las extremidades. Los investigadores deben recortar el calcetín de acuerdo con el sitio de acupuntura, pero el procedimiento es algo complejo⁶. Algunos investigadores han desarrollado un dispositivo de fijación por moxibustión que consta de tres partes: asiento de fijación, clip de fijación y soporte para palos de moxa. Este dispositivo permite a los investigadores realizar moxibustión en múltiples puntos de acupuntura simultáneamente mientras mantienen una temperatura relativamente constante. Sin embargo, el estado fijo de este método difiere significativamente del tratamiento clínico en humanos⁷. Envolver a las ratas con un paño y suspenderlas con abrazaderas puede reducir significativamente la influencia de la restricción. Sin embargo, la tela suspendida debe cortarse con anticipación para exponer los puntos de acupuntura, lo que hace que sea inconveniente exponer el sitio de tratamiento⁸. Algunos investigadores usan correas, cuerdas y una pequeña chaqueta con una correa de velcro autoblocante para asegurar a las ratas en una cubierta de jaula similar a una malla. El dispositivo ofrece bajos costos de producción, alta practicidad y operación simple. Pero se necesita más de una persona para completar el proceso de restricción⁹. Algunos investigadores construyen un cilindro de sujeción del cuerpo con malla de alambre, aseguran las patas de las ratas con abrazaderas de sujeción y fijan sus cuellos con un palo de sujeción. Este método proporciona una restricción firme. Con este método, los investigadores pueden operar mejor en ratas porque los puntos de acupuntura en todo el cuerpo están expuestos. El problema es que el cilindro puede ser incompatible con el tamaño de la rata. Además, este método aplica más estrés en comparación con otras técnicas, por lo que las ratas pueden ser más susceptibles a la asfixia^. El método de fijación de plataforma alta se aprovecha del miedo de las ratas a la altura. Los investigadores colocan ratas en el pedal de plataforma alta a 50 cm del suelo. Las ratas permanecen en una posición prona natural sin necesidad de restricciones adicionales. Este método permite puncionar la cabeza y la espalda de las ratas. Este método simula auténticamente el entorno de tratamiento, por lo que los resultados experimentales tienen un buen valor de referencia. Dado que las ratas temen a las alturas, su estado mental se vuelve anormal cuando se colocan a tales elevaciones. Esto hace que el método no sea adecuado para la investigación de enfermedades mentales y podría influir en los resultados experimentales¹¹. Algunos investigadores utilizan una plataforma de sujeción ajustable y correas para fijar a las ratas, exponiendo una gran área de tratamiento. Sin embargo, replicar el escenario clínico sigue siendo un reto¹².

Existe una necesidad urgente de abordar el problema de que los métodos de fijación no pueden simular con precisión las condiciones de tratamiento clínico. Hemos hecho todo lo posible para replicar las condiciones del tratamiento clínico humano. El método descrito en este documento entra en la categoría de método de servidumbre. El equipo utilizado en este método incluye una plataforma de sujeción y correas de sujeción, junto con un paño de algodón para ayudar en el procedimiento. El equipo es relativamente simple de operar. En comparación con otros métodos, este método expone mejor los puntos de acupuntura en la espalda de las ratas y mejora la eficiencia del tratamiento.

Para probar la fiabilidad del dispositivo, se utilizaron un total de 60 ratas para el experimento. Las 60 ratas se dividieron en dos grupos, cada uno de los cuales contenía 30 ratas: el grupo de electroacupuntura y el grupo de acupuntura caliente. Las ratas mantuvieron la calma durante el proceso de tratamiento y su movimiento tuvo un impacto mínimo en el procedimiento. En el grupo de electroacupuntura, 22 ratas completaron el tratamiento con calma y sin luchar. Un total de 8 ratas lucharon durante la operación y 6 desprendieron las agujas. Un total de 24 ratas en el grupo de acupuntura caliente permanecieron tranquilas durante el tratamiento. Las otras 6 ratas mostraron un comportamiento de lucha, pero ninguna desalojó las bolas de moxa. Estas ratas que luchaban también podían calmarse después de ser cubiertas y consoladas. Al final, todas las ratas completaron el tratamiento con éxito.

Protocolo

Este trabajo contó con el apoyo de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Nº 82205287). Los protocolos experimentales utilizados en este estudio fueron revisados y aprobados por el Comité de Ética para la Experimentación y el Comité de Uso Animal de la Universidad de Medicina China de Beijing (Nº BUCM-2024052704-2223) antes de realizar experimentos. Todos los procedimientos demostrados deben ser aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC).

Los detalles del equipo utilizado en el estudio se enumeran en la Tabla de Materiales. El protocolo se puede dividir en cuatro secciones: preparación del experimento, proceso de fijación, operación del tratamiento y desmontaje del equipo.

1. Preparación del experimento (Figura 1)

1. Prepare la plataforma de sujeción de plástico poroso. La plataforma de sujeción tiene 500 mm de largo, 300 mm de ancho y 5 mm de alto. El orificio tiene 7 mm de largo y 3,2 mm de ancho. La distancia entre dos orificios adyacentes es de 7 mm. Este equipo sirve como plataforma para arreglar ratas.
2. Prepare las correas de sujeción. Cada correa de sujeción mide 300 mm de largo y 4,8 mm de ancho. Las correas de sujeción están dentadas y cuentan con una hebilla en su punta, que se puede bloquear después de la inserción.
3. Ten a mano un paño de algodón cuadrado. El paño cuadrado de algodón mide 30 cm 30 cm. Úsalo para bloquear la vista de los animales de experimentación.
4. Prepare el instrumento de electroacupuntura. Utilice este dispositivo para llevar a cabo procedimientos de electroacupuntura.
5. Prepara las agujas de acupuntura (0,25 mm de diámetro y 25 mm de longitud).
6. Tenga a mano un par de guantes de látex de laboratorio. Estos guantes constituyen la medida protectora fundamental del experimento.
7. Tenga a mano un par de guantes anticortes, diseñados para proteger a los investigadores de las mordeduras de ratas durante el experimento.
8. Utilice la moxa para elaborar bolas de moxa con un diámetro de 5 mm, que se utilizan para la terapia de moxibustión posterior.
9. Para evitar que las ratas se quemeten, corta unos papeles cuadrados de 2 cm 2 cm.
10. Mantenga la gasa estéril lista para ser aplicada para envolver la cola de la rata, asegurando la conductividad eléctrica durante el tratamiento de electroacupuntura.
11. Preparación antes de la fijación: Antes de manipular las ratas, use guantes de látex de laboratorio y guantes anticorte para evitar ser mordido por ratas.

Figura 1: Dispositivos necesarios para el funcionamiento. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

2. Proceso de fijación

1. Pase dos correas de sujeción a través de la plataforma de sujeción. Inserte cada correa a través de dos orificios en la misma fila, espaciando dos orificios, con las correas separadas por cuatro filas entre sí. Este espaciamiento coincide con el diámetro del cuerpo de la rata, lo que restringe el movimiento lateral durante el tratamiento (Figura 2). Ajuste la distancia según la forma de las ratas y los sitios de tratamiento según sea necesario.
2. Agarra la cola de la rata con una mano. La rata se moverá instintivamente hacia adelante (Figura 3A).
3. Coloque la rata en la entrada del canal formada por dos correas de sujeción. La rata perforará el canal por sí misma (Figura 3B).
4. Cubre la cabeza de la rata con un paño de algodón cuadrado y usa esa misma mano para sostener el cuello de la rata. Agarra la cola y las extremidades traseras de la rata con la otra mano. Este método asegura que se mantenga la postura de la rata (Figura 3C).
5. Usa la mano que sostiene el lado de la cabeza para presionar suavemente la cabeza y el cuello de la rata. Use la otra mano para insertar la correa de sujeción en la hebilla y apriétela. Asegúrese de que la correa de sujeción esté ubicada en el lado de la cola de la cabeza y en las extremidades delanteras para restringir el movimiento de su cabeza (Figura 3D, E).
6. Sostén la cola de la rata con una mano. Asegúrese de que la correa de sujeción esté ubicada frente a las extremidades traseras de la rata. Luego apriete la hebilla para restringir el movimiento de la cintura (Figura 3F). La rata restringida se muestra en la Figura 3G.
7. Al realizar acupuntura en ratas, este método de fijación garantiza la estabilidad durante el tratamiento. Si la rata sigue teniendo problemas graves, cúbrele suavemente la cabeza con el paño. Proteger todo su campo de visión y mantenerlo en un ambiente oscuro puede calmar a la rata.
   1. Elija DU20, BL17 y BL23 como ejemplos. Al seleccionar esta distancia de fijación, se exponen mejor los puntos de acupuntura: DU20 está en el centro de su cabeza, BL17 está entre las dos correas de sujeción y BL23 está en el lado de la cola de la correa de sujeción, apretando la cintura de la rata.
   2. Gire la aguja en los puntos de acupuntura (Figura 4A). La rata que completa el tratamiento de acupuntura se muestra en la Figura 4B, C.

Figura 2: Montaje de la plataforma de sujeción y la correa de sujeción. La plataforma de sujeción con las correas de sujeción insertadas se muestra en la figura. Cada correa se inserta a través de dos orificios en la misma fila, espaciados dos orificios, con las correas separadas por cuatro filas entre sí. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 3: El proceso de fijación de una rata. (A) Sostenga la cola de la rata. (B) Deja que la rata huya hacia adelante hacia el canal. (C) Cubra la cabeza de la rata con un paño de algodón. Presiona su cuello y agarra su cola y extremidades traseras. (D,E) Aprieta la correa en su parte posterior. (F,G) Aprieta la correa de su cintura. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 4: Operación de acupuntura en una rata. Se eligieron DU20, BL17 y BL23 como puntos de acupuntura para este procedimiento de acupuntura. (A) Gire la aguja en los puntos de acupuntura. (B,C) Aquí se muestra la rata que completa el tratamiento. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

3. Tratamiento de electroacupuntura

1. Conecte el instrumento de electroacupuntura después de completar la acupuntura. Encienda el dispositivo de electroacupuntura, presione el botón de onda continua para seleccionar la forma de estimulación eléctrica y gire la perilla para ajustar la intensidad de la corriente a 1 mA y la frecuencia a 2 Hz (Figura 5A).
2. Tomando DU20, BL17 y BL23 como ejemplo, conecte tres pares de electrodos como se muestra en la Figura 5. Específicamente, conecte BL17 y BL23 en el mismo lado como un par (Figura 5B, C). Conecte la cola, envuelta con una gasa empapada en solución salina, con el DU20 en la cabeza (Figura 5D, E). La dirección del flujo de corriente es consistente entre los tres pares de electrodos.
3. Gire la perilla de ajuste de tiempo para establecer la duración del tratamiento en 15 minutos.

Figura 5: Operación de electroacupuntura en una rata. (A) Establezca el parámetro en onda continua y ajuste la intensidad de la corriente y la frecuencia. (B,C) Empareje BL17 y BL23 en el mismo lado. (D,E) Envuelve la cola con una gasa empapada en solución salina y conéctala al DU20. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

4. Tratamiento de acupuntura tibia

1. Prepare estos artículos si se requiere un tratamiento de acupuntura caliente: moxa, aguja de acupuntura (0,25 mm × 25 mm, igual que la utilizada anteriormente) y varias hojas cuadradas de papel. Además, prepare algunas bolas de moxa con anticipación antes de comenzar el tratamiento (Figura 1).
2. Tome un pedazo de papel cuadrado y use con cuidado una aguja para perforar el punto central del papel (Figura 6A). Posteriormente, inserte la aguja en el punto de acupuntura designado (Figura 6B).
   NOTA: Con fines ilustrativos, este estudio seleccionó el punto de acupuntura BL23.
3. Coloque con cuidado las bolas de moxa en la aguja y luego enciéndalas (Figura 6C-E).

Figura 6: Operación de acupuntura tibia en una rata. (A) Tome un papel cuadrado y perfore su centro con una aguja. (B) Inserte agujas en los puntos de acupuntura. (C) Coloque las bolas de moxa en las agujas. (D,E) Aquí se muestra la rata que completa el tratamiento. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

5. Desmontaje del equipo

1. Desmontaje del equipo de electroacupuntura
   1. Al finalizar el tratamiento de electroacupuntura, apague el instrumento de electroacupuntura. Luego, suelte con cuidado el clip de electrodo de las agujas de acupuntura. Finalmente, retire suavemente las agujas de acupuntura del área de tratamiento.
2. Desmontaje del equipo de acupuntura caliente
   1. Después del tratamiento de acupuntura tibia, retire con cuidado la ceniza de las bolas de moxa y deséchela colocándola en agua. A continuación, retire suavemente las agujas y retire los papeles adheridos.
3. Desmontaje del equipo de fijación
   1. Cubre la cabeza de la rata con un paño de algodón cuadrado mientras relajas las correas de sujeción. Afloja la correa de sujeción, apretando la cintura de la rata al principio. A continuación, agarre firmemente las extremidades traseras y el área de la cadera de la rata con una mano.
   2. Suelte la correa que se aprieta alrededor del cuello de la rata con la otra mano, luego saque suavemente a la rata de la correa de sujeción sosteniendo su cola.

Resultados

Para evaluar la efectividad del método de fijación, realizamos un ensayo en un total de 60 ratas, las cuales se dividieron en dos grupos: 30 ratas en el grupo de electroacupuntura y 30 ratas en el grupo de acupuntura caliente. Las operaciones de tratamiento incluyeron electroacupuntura y acupuntura caliente, respectivamente.

Después de insertar agujas en los puntos de acupuntura, el acupunturista realizó manipulaciones de levantamiento, empuje y rotación en ca...

Discusión

Las ratas tienden a habitar en ambientes oscuros. Se sienten seguros cuando están protegidos y responden con calma a los estímulos, exhibiendo niveles de estrés más bajos. El método descrito aquí aprovecha estas características de la rata. Las ventajas de este método de fijación se pueden resumir de la siguiente manera: (i) Este método puede minimizar la respuesta al estrés y el dolor experimentado por los animales de experimentación. Se alinea con los principios de las 3R de la ética an...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Agujas de acupuntura	Beijing ZhongYan TaiHe Medical Instrument Co., Ltd.	20222200133	Las especificaciones de las agujas de acupuntura son de 0,25 mm de diámetro y 25 mm de longitud.
Guantes anticorte Fábrica de	productos de protección laboral de Lvdazhou en el distrito de Lanshan, ciudad de Linyi	H0315103941	Diseñado para proteger a los investigadores de las mordeduras de ratas durante el experimento.
Instrumento de electroacupuntura	Suzhou Medical Appliance Factory Ltd.	20172200675	Este dispositivo se emplea para llevar a cabo procedimientos de electroacupuntura.
Guantes de látex de laboratorio	Zhonghong Pulin Medical Products Co., Ltd.	268237719221	Estos guantes constituyen la medida protectora fundamental del experimento.
Moxa	Beijing Tongrentang Xing'an Tecnología de la Salud Co., Ltd.	152200000000613	Moxa sirve como material para la elaboración de bolas de moxa con un diámetro de 5 mm, que se utilizan para la posterior terapia de moxibustión.
Plataforma de restricción de plástico poroso	Chuzhou Huaxin VinyIIndustry Co., Ltd.	341124000005877	La plataforma de retención tiene 500 mm de largo, 300 mm de ancho y 5 mm de alto. El agujero tiene 7 mm de largo y 3,2 mm de ancho. La distancia entre dos orificios adyacentes es de 7 mm. Este equipo sirve como plataforma para arreglar ratas.
Correas de sujeción	Zhejiang Litai Plastic Co., Ltd.	331003000001553	Cada correa de sujeción mide 300 mm de largo y 4,8 mm de ancho. Las correas de sujeción están dentadas y cuentan con una hebilla en su punta, que se puede bloquear después de la inserción.
Tela cuadrada de algodón	MUJI (SHANGHAI) Company Limited	WYLP20241105_1	La tela cuadrada de algodón mide 30 cm y 30 cm. Se utiliza para bloquear la vista de los animales de experimentación.
Papeles cuadrados	DELI Group Co., Ltd.	7752-1114	Para evitar que las ratas se quemen, los investigadores cortan unos papeles cuadrados cuya especificación mide 2 cm y 2 cm de altura.
Gasa estéril	Jiangxi Zhonggan Medical Devices Co., Ltd.	20172140084	La gasa estéril se aplica para envolver la cola de la rata, asegurando la conductividad eléctrica durante el tratamiento de electroacupuntura.