Técnicas eficientes para el muestreo exhaustivo de tejidos accesibles en xenopus adulto

Summary

Esta es la primera parte de un protocolo integral de muestreo de Xenopus . Los tejidos muestreados son el ventrículo cardíaco, el tronco arterial, el lóbulo hepático izquierdo, la vesícula biliar, el pulmón, el páncreas, el bazo, la laringe, el esófago, el estómago, los intestinos, los testículos, los cuerpos grasos, el oviducto, los riñones pareados, el plexo ciático, la piel, el timo y todo el ojo.

Abstract

Xenopus ha sido durante mucho tiempo un organismo modelo fundamental para investigar el desarrollo y las enfermedades de los vertebrados, ofreciendo información profunda sobre los procesos celulares y la función de los genes. A pesar de la gran cantidad de información sobre el Xenopus embrionario, sigue habiendo una brecha significativa en los métodos estandarizados para el muestreo de tejidos adultos, especialmente para los enfoques modernos como la proteómica cuantitativa. Este estudio presenta un protocolo integral para el muestreo rápido, preciso y eficiente de múltiples tejidos en Xenopus adultos. El protocolo aborda los desafíos asociados con las sutiles diferencias anatómicas en comparación con otros anuros, lo que garantiza la reproducibilidad incluso para aquellos con experiencia limitada en la disección de ranas. Este protocolo está optimizado para análisis bioquímicos de alta calidad al priorizar la frescura de la muestra. Facilitamos la recolección rápida de hasta 18 tejidos en una hora. Además, los métodos se aplican a condiciones perfundidas y no perfundidas, lo que proporciona flexibilidad para una serie de necesidades experimentales. Este trabajo no solo llena un vacío metodológico crítico para Xenopus laevis y tropicalis , sino que también sirve como un recurso valioso para los investigadores que adaptan técnicas a modelos de anfibios similares, mejorando así el alcance y la confiabilidad de los estudios biológicos y evolutivos comparativos.

Introduction

Xenopus ofrece ventajas únicas sobre ratones, peces cebra y otros organismos modelo para el estudio de enfermedades humanas, particularmente en contextos evolutivos y de desarrollo. Su desarrollo embrionario externo y sus embriones grandes y fácilmente manipulables permiten la observación en tiempo real y las intervenciones experimentales (por ejemplo, injertos de tejido, edición de genes) que son difíciles en ratones, que se desarrollan internamente y requieren procedimientos invasivos. Además, el corazón de tres cámaras y las extremidades tetrápodas de Xenopus proporcionan un puente evolutivo más directo para el es....

Protocol

Todos los experimentos fueron aprobados y realizados de acuerdo con las reglas y regulaciones de la Escuela de Medicina de Harvard IACUC (Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales IS 00001365_3). Si se sigue el protocolo de perfusión¹³ antes de la toma de muestras, pase al paso 2.3.

1. Preparación (sin perfusión)

1. Asegurarse de que la institución de investigación ha aprobado la técnica de eutanasia descrita en este protocolo.
2. Prepare una solución de 5 g/L de MS-222 (metanosulfonato de tricaína) y 5 g/L de bicarbonato de sodio (ver Tabla de Materia....

Results

Al seguir todos los pasos de este protocolo, el ventrículo cardíaco, el tronco arterial, el lóbulo del hígado izquierdo, la vesícula biliar, el pulmón, el páncreas, el bazo, la laringe, el esófago, el estómago, los intestinos, los testículos, los cuerpos grasos, el oviducto, los riñones emparejados, el plexo ciático, la piel, el timo y todo el ojo se extirparon limpiamente dentro de una hora después de la eutanasia (ver Figura 1, Figura 2,

Discussion

El protocolo presentado aquí está diseñado para proporcionar flexibilidad a los usuarios en varios niveles de experiencia, al tiempo que garantiza la recolección de tejidos esenciales de manera oportuna y eficiente. Se recomienda a los nuevos usuarios que sigan cada paso del protocolo como se describe para garantizar la recolección sistemática de tejidos. Sin embargo, los usuarios más experimentados pueden optar por saltarse ciertos pasos y tomar muestras solo de los tejidos que necesita.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Corning	21-040-CV
5x Lupa con luz LED y soporte	amazon.com	B08QJ6J8P1	luz no debe producir calor
Pipetas de transferencia desechables	VWR	414004-036
Pinzas de disección de punta fina	Fisher Scientific	08-875
Tijeras de disección piont afilado, rectas 6.5"	VWR	76457-374
Bandeja de disección	Fisher Scientific	14-370-284 hojas de	espuma de poliestireno son una alternativa aceptable
Contenedor de eutanasia	US Plastic	Artículo  2860	contenedores opacos alternativos aceptables
Tapa de contenedor de eutanasia	US Plastic	Artículo  Tijeras de iridectomía 3047
6"	VWR	470018-938	tijeras de iris son una alternativa aceptable
MS-222: Sinciína (anteriormente tricaína)	Pentair AES	TRS1
tejido de diente de rata 5.5 in., Acero inoxidable	Fisher Scientific	S08100
Bicarbonato de sodio, polvo, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Pinzas para especímenes, dentadas	VWR	82027-442
T-Pins para disección	Fisher Scinetific	S99385