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Administración de Δ 9-tetrahidrocannabinol (THC) en ratones adolescentes y adultos

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DOI:

10.3791/68358

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1 de agosto de 2025

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1Department of Anatomy and Neurobiology, University of California, Irvine, 2Department of Biological Chemistry, University of California, Irvine, 3Department of Pharmaceutical Sciences, University of California, Irvine

En este artículo

Resumen

El δ 9-tetrahidrocannabinol (THC) es el componente intoxicante del cannabis y una sustancia controlada en los Estados Unidos. Este artículo describe los procedimientos estándar para obtener, almacenar y administrar THC a ratones que cumplen con las regulaciones legales vigentes y presenta brevemente un método para evaluar los efectos farmacodinámicos básicos del THC en roedores.

Resumen

El δ-9-tetrahidrocannabinol (THC) es responsable de los efectos intoxicantes (psicotrópicos) del cannabis y los productos derivados del cannabis actualmente disponibles en los mercados legales e ilegales. Los efectos psicotrópicos del THC se producen a través de la activación de los receptores cannabinoides CB1 en el cerebro, que normalmente son activados por sustancias cannabinoides endógenas (endocannabinoides). Fuera del cerebro, el THC contribuye a la regulación de una amplia gama de procesos fisiológicos mediante la activación de los receptores CB1 y CB2. Las funciones fisiológicas que cumplen las sustancias endocannabinoides y los receptores cannabinoides, conocidos colectivamente como sistema endocannabinoide, cambian considerablemente a lo largo de la vida, siendo la adolescencia un período de mayor sensibilidad a las contribuciones de este complejo de señalización. Este artículo describe un protocolo para preparar THC para administración parenteral y evaluar sus efectos farmacodinámicos agudos en ratones de ambos sexos en dos etapas de desarrollo: adolescencia y edad adulta temprana. Centrándonos en tres dosis que se utilizan ampliamente en la literatura (1, 5 y 10 mg/kg) y la vía intraperitoneal, se ilustran los efectos bien conocidos del THC: inducción de catalepsia, inhibición de la actividad locomotora y supresión de la nocicepción. Además, dado el estatus del THC como sustancia controlada en los Estados Unidos, se describen brevemente los procedimientos para obtenerlo y almacenarlo de conformidad con la legislación vigente.

Introducción

La prevalencia del consumo de cannabis en la población adulta de los Estados Unidos ha aumentado continuamente en las últimas décadas y se mantuvo alta en 2023. Entre los adultos de 19 a 30 años, aproximadamente el 42% informó haber consumido cannabis en el último año, el 29% en el último mes y el 10% informó haber consumido cannabis diariamente o casi a diario (20 o más veces en los últimos 30 días)1. Para los adultos de 35 a 50 años, las cifras son del 29%, 19% y 8%, respectivamente. Aunque estas estimaciones no son estadísticamente diferentes de las obtenidas en 2022, indican aumentos en los últimos 5 y 10 años para ambos grupos demográficos1. Es importante destacar que la evidencia actual sugiere que aproximadamente el 9% de las personas que consumen cannabis desarrollan tolerancia y dependencia de la droga, una condición conocida como trastorno por consumo de cannabis (SUD)2 y un posible problema de salud3.

Al igual que con otras drogas psicoactivas, el consumo de cannabis generalmente comienza en los primeros años de la adolescencia y aumenta progresivamente a lo largo de la adolescencia. En 2023, el 8% de los estudiantes de8.º grado en los Estados Unidos, el 18% de los estudiantes de10.º grado y el 29% de los estudiantes de12.º grado informaron haber usado la droga al menos una vez4. Aunque relativamente estables durante los últimos años, incluso frente a una menor percepción del riesgo 5,6, estos números siguen siendo demasiado altos. Además de su uso no médico generalizado, el cannabis ha demostrado potencial terapéutico en una variedad de afecciones médicas 7,8. Una forma sintética de su componente intoxicante (psicotrópico), Δ 9-tetrahidrocannabinol (THC) (Figura 1), se ha utilizado durante más de 40 años como medicamento recetado para tratar las náuseas y la pérdida de apetito en pacientes con VIH y cáncer sometidos a quimioterapia 9,10. Tanto el THC como su análogo cannabidiol (CBD) (Figura 1), que no es psicotrópico, se han implicado en el manejo del dolor, la inflamación y diversos trastornos neurológicos11,12. Por lo tanto, la rápida propagación de los productos derivados del cannabis medicinal, por ejemplo, en la epilepsia infantil y el autismo, también está introduciendo nuevos grupos de jóvenes a la droga. Estos desarrollos son especialmente preocupantes en un contexto social donde los cambios legislativos y la creciente aceptación alimentan intereses financieros que pueden anular las preocupaciones de salud y seguridad públicas13.

El cannabis que contiene THC ('marihuana') se consume en varias formas, como fumar, vaporizar, comestibles, tinturas y aceites. Una vez ingerido, el THC se distribuye por todo el cuerpo y entra en el cerebro, donde produce euforia, relajación, alteración de la percepción sensorial y aumento del apetito, aunque también puede causar ansiedad y paranoia en algunos individuos14,15. El THC interactúa con el sistema endocannabinoide (ECB) activando dos tipos de receptores cannabinoides (CB) ubicados tanto dentro como fuera del cerebro 15,16. En el cerebro, donde los receptores CB1 son más abundantes, su activación afecta el estado de ánimo, la percepción del dolor, el apetito y la cognición, entre otras funciones. El THC también activa los receptores CB1 y CB2 en los órganos periféricos, lo que influye en el metabolismo energético sistémico, incluida la ingesta, la absorción y el almacenamiento de nutrientes, así como en el inicio del dolor, la inflamación y la inmunidad17,18.

El THC ejerce efectos tanto agudos como persistentes, y aún se requiere investigación preclínica y clínica adicional sobre las consecuencias a largo plazo del consumo de cannabis. Se debe hacer especial hincapié en las posibles reacciones adversas a las altas dosis de THC, considerando que la concentración promedio de THC en el cannabis vendido en los Estados Unidos ha aumentado en las últimas décadas del 8,9% en 2008 al 17,1% en 201719 e incluso más en los últimos años. Los "productos de cannabis de alta potencia" (productos que contienen altas concentraciones de THC) son comunes en muchos mercados legales en los Estados Unidos, donde el contenido promedio de THC en la flor de cannabis es del 20-35%, y algunos productos extractivos alcanzan hasta el 90% de THC. En estas dosis altas, el THC puede tener efectos cualitativamente diferentes a los producidos por el tradicional "cannabis de baja potencia" utilizado en las décadas de 1970 y 1980, que contenía un 6% de THC o menos20. Por lo tanto, comprender la farmacología de los productos de cannabis de alta potencia es fundamental para informar las estrategias preventivas y guiar la política regulatoria y fiscal. Además, comprender cómo factores como la edad, la genética y las condiciones preexistentes influyen en las respuestas individuales al THC puede ayudar a adaptar la prevención y el tratamiento a poblaciones específicas. En particular, las consecuencias del consumo de cannabis por parte de adolescentes y mujeres embarazadas o lactantes deben investigarse más a fondo, ya que la exposición a los cannabinoides durante los períodos prenatal/perinatal y adolescente, en los que el sistema ECB desempeña un papel clave en el desarrollo neurológico, podría tener consecuencias negativas persistentes21. Además, se necesita más investigación para comprender cómo interactúa el THC con otros medicamentos o sustancias. Los datos completos sobre la seguridad y eficacia del THC pueden informar las decisiones regulatorias y las políticas de salud pública, asegurando un uso seguro tanto en contextos médicos como no médicos.

Aquí, describimos los procedimientos estándar para obtener, almacenar y administrar THC en un entorno de laboratorio de acuerdo con la legislación actual de los Estados Unidos (la Ley de Sustancias Controladas de 1971). Centrándose en tres dosis de THC ampliamente utilizadas en la literatura científica (1, 5 y 10 mg/kg)22 y la vía de administración intraperitoneal (i.p.), se ilustraron tres efectos clásicos sobre el THC: inducción de catalepsia, inhibición de la actividad locomotora y antinocicepción. Este protocolo también se puede utilizar después de múltiples inyecciones de THC para estudiar las consecuencias del uso crónico de THC, lo que conduce a la tolerancia y una variedad de consecuencias para la salud mental que normalmente no se observan con la administración aguda en humanos.

Protocolo

Todos los procedimientos fueron aprobados por el IACUC de la Universidad de California, Irvine, y se llevaron a cabo en estricta conformidad con las pautas de los Institutos Nacionales de Salud (NIH) para el cuidado y uso de animales de experimentación.

1. Procedimientos para obtener y almacenar THC

NOTA: En los Estados Unidos, el uso de THC en un entorno de investigación académica requiere seguir varios pasos exigidos por el estatus legal del cannabis. Tanto el cannabis como el THC derivado del cannabis se clasifican como sustancias controladas de la Lista I. Por esta razón, antes de que se pueda comprar cannabis o THC, los investigadores deben obtener una licencia de la Administración para el Control de Drogas (DEA). A continuación se proporciona una descripción general de este proceso, que puede demorar hasta 6 meses o más.

  1. Determinar el alcance de la investigación: Defina el propósito y los objetivos del proceso de investigación y especifique por qué es necesario el THC. Desarrolle un protocolo de investigación que detalle las cantidades de THC necesarias, su fuente comercial y cómo se manipulará y almacenará. Incluya tantos detalles relevantes como sea posible.
  2. Recibir la aprobación regulatoria institucional: Presentar la propuesta de investigación al Comité de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la institución local (para el trabajo preclínico) o a la Junta de Revisión Institucional (IRB) (para el trabajo clínico). Este paso de revisión protege los derechos de los sujetos de investigación y garantiza que el estudio cumpla con los estándares éticos.
  3. Cumplimiento de las regulaciones estatales: Tenga en cuenta las regulaciones específicas del estado con respecto a la investigación del cannabis, ya que pueden variar significativamente. Por ejemplo, en California, obtener la aprobación del Panel Asesor de Investigación de California (RAPC)23.
  4. Obtención de THC: Compre cannabis y THC a cultivadores o fabricantes que tengan licencia para este propósito.
    NOTA: Una lista de cultivadores aprobados está disponible en el sitio web de la DEA. El Instituto Nacional sobre el Abuso de Drogas (NIDA) proporciona THC a través del Programa de Suministro de Drogas del NIDA24. Para solicitar este programa, se debe proporcionar información sobre una institución, un protocolo de investigación detallado y documentación de regulaciones institucionales como cartas de aprobación de IACUC o IRB. Se requiere completar el Formulario 222 de la DEA, que es el formulario de una sola página designado específicamente para cada número de registro de la DEA, para la compra o transferencia de sustancias controladas de la Lista 1.
  5. Recibir y almacenar THC
    1. Almacene el THC en una caja fuerte o bóveda bien cerrada que siga un diseño aprobado por la DEA. El acceso al área de investigación debe estar controlado (por ejemplo, las puertas del edificio y/o del laboratorio deben estar cerradas). Solo el personal autorizado debe tener acceso al THC.
    2. Prepare y establezca una lista de personas a las que se les permite acceder a ella y mantenga la lista actualizada. Etiquete claramente los envases de THC con el nombre, la concentración, la fecha de recepción y las advertencias de peligro.
    3. Siga los procedimientos de eliminación establecidos, que requieren documentación específica y cumplimiento de las regulaciones federales y estatales. Mantenga el THC a -20 °C o menos.
  6. Gestión de inventario:
    1. Implemente un sistema de inventario sólido para realizar un seguimiento de la cantidad, el uso y la ubicación del THC. Prepare una carpeta de sustancias controladas, que incluye una licencia de la Lista 1, información del personal autorizado, registros de todos los recibos, eliminaciones y cualquier uso de sustancias (Figura 2).
    2. Realizar auditorías periódicas de las prácticas de inventario y almacenamiento completando el registro de inventario semestral para garantizar el cumplimiento de los requisitos reglamentarios. Verifique los registros de acceso y los registros de inventario periódicamente.
  7. Capacitación y protocolos: Se debe proporcionar capacitación a todo el personal que maneja THC. Se deben establecer protocolos claros para el almacenamiento, manejo y eliminación del medicamento.
    NOTA: Al implementar estas prácticas, los laboratorios académicos pueden asegurarse de cumplir con los requisitos legales y mantener un entorno de investigación seguro.

2. Procedimientos para administrar THC a ratones por inyección i.p.

NOTA: Al manipular THC, es esencial controlar la temperatura y proteger el compuesto de la luz para preservar su estabilidad. El THC es sensible al calor y debe almacenarse a -20 °C o menos para su almacenamiento a largo plazo. Para el almacenamiento a corto plazo, el THC puede conservarse a temperatura ambiente o refrigerarse a 4 °C durante varias horas. El THC también es sensible a los rayos ultravioleta (UV) y a la luz visible, que pueden causar degradación a través de la oxidación. Para evitar esto, el THC debe almacenarse en recipientes herméticos de vidrio ámbar o recipientes transparentes envueltos en papel de aluminio y almacenados en la oscuridad. Se recomienda etiquetar todas las muestras con fechas y condiciones de almacenamiento para garantizar un seguimiento y una estabilidad adecuados.

  1. Materiales
    1. Prepare todas las soluciones utilizando agua ultrapura y reactivos de grado analítico. Obtenga THC de Cayman Chemical (Ann Arbor, MI) o RTI International (Research Triangle Park, NC) o a través del Programa de Suministro de Drogas24 del NIDA.
  2. Equipos y suministros
    1. Asegúrese de que los elementos enumerados en la Tabla de materiales estén listos antes de comenzar el procedimiento.
      NOTA: Es imprescindible utilizar viales de vidrio (8 mL o similar) y recipientes cuando se trabaja con THC. Los plásticos pueden reaccionar o absorber moléculas hidrófobas como el THC, lo que puede provocar la pérdida de muestras o concentraciones inconsistentes. El vidrio es químicamente estable y no reactivo, lo que ayuda a prevenir interacciones no deseadas con moléculas hidrofóbicas.
  3. Procedimientos para la administración de THC en ratones
    1. Retire el recipiente de THC del casillero de seguridad en el congelador.
    2. Manteniendo el recipiente en hielo, extraiga un volumen adecuado de THC con una pipeta y agréguelo con cuidado al fondo de un vial de vidrio de 8 ml. Calcule el volumen en función de la dosis (mg / kg) y el peso corporal de los ratones (g).
    3. Mueva el vial a una campana extractora química y evapore suavemente el solvente hasta que se seque con una corriente suave de gas nitrógeno. Tenga cuidado de no salpicar la solución que contiene THC en los lados del vial, ya que esto provocará una pérdida grave. Este proceso dura aproximadamente 5-10 min.
    4. Registre en el Registro de Uso de Sustancias Controladas I en el Carpeta de Sustancias Controladas la cantidad de THC que se tomó del vial que se está utilizando actualmente.
    5. Cuando el disolvente esté completamente seco, añadir un volumen adecuado de Tween-80. Este es el volumen de Tween-80 requerido para obtener una concentración final del 5% de Tween-80 en solución salina, como se muestra en el paso 2.3.8.
    6. Calentar el vial en un vaso de precipitados que contenga agua caliente a 60 °C o menos. Agite el vial para disolver completamente el THC y repita según sea necesario.
    7. Agregue gradualmente solución salina estéril en pequeños incrementos: por ejemplo, 200 μL, 300 μL, 500 μL y 1 mL. Vórtice y caliente.
    8. Repita los pasos 2.3.6 y 2.3.7 hasta que se haya agregado el volumen total de solución salina necesario para hacer una solución final de THC en solución salina al 5% Tween-80 y solución salina al 95% y la solución se disuelva por completo.
    9. (OPCIONAL) Sonicar el vial en un baño de agua ultrasónico a una potencia aproximada del 100% a 40 kHz y 37 °C durante 5 min. Verifique que la solución sea clara y libre de cualquier sustancia no disuelta. El color del líquido puede variar según el vehículo utilizado.
    10. Pese el ratón y determine la cantidad adecuada para inyectar. El volumen de inyección debe ser de 10 ml/kg por ratón.
    11. Proceda con las inyecciones intraperitoneales (i.p.). Asegúrese de que las soluciones de THC estén recién preparadas el día de su uso.

3. Procedimientos para evaluar los efectos farmacológicos del THC

  1. Animales
    1. Utilice ratones de ambos sexos para este estudio.
      NOTA: En este estudio, se utilizaron ratones C57BL/6J adolescentes (día postnatal, DPN, 30-35) y adultos (DPN 70-75) de ambos sexos de los Laboratorios Jackson (Farmington, CT).
      El procedimiento es aplicable a otras cepas de ratón.
    2. Aloje a los ratones en jaulas ventiladas (4-5 por jaula) con comida y agua disponibles ad libitum. Asigne animales de edad y peso al azar a los grupos de tratamiento y permítales aclimatarse durante al menos 1 semana antes de los experimentos.
    3. Mantenga las habitaciones de la vivienda en un ciclo de luz de 12 h / 12 h de oscuridad (luces encendidas a las 6:30 a.m.) con temperatura constante (20 ± 2 ° C) y humedad relativa (55%-60%).
  2. Grupos experimentales
    1. Divida cada grupo de edad y sexo en cuatro grupos de tratamiento: un grupo de control de vehículos y tres grupos de tratamiento de THC para dosis de 1, 5 y 10 mg / kg.
  3. Administración de medicamentos
    1. Preparar THC como se ha descrito anteriormente en un vehículo de solución salina al 95% con Tween-80 al 5% y administrado por inyección i.p.
  4. Pruebas de comportamiento
    NOTA: En este ejemplo, cada animal se sometió a las pruebas que se describen a continuación para rastrear los efectos del THC22. Las tres pruebas de comportamiento se realizaron sucesivamente en la misma cohorte de animales. El orden de los procedimientos fue: locomoción (30 min post-THC), catalepsia (45 min post-THC) e inmersión en la cola (60-, 180- y 300-min post-THC) (Figura 3). Para los experimentos de mujeres adolescentes, reutilizamos el mismo grupo tratado con Vehicle y luego administramos 1 mg / kg o 10 mg / kg de THC a la misma cohorte para realizar las pruebas de catalepsia e inmersión en la cola. Este enfoque nos permitió alcanzar suficiente poder estadístico al tiempo que minimizamos el número de animales utilizados, de acuerdo con las pautas éticas. El comportamiento se registró con una videocámara y los archivos de película se analizaron con un software de seguimiento del comportamiento.
    1. Prueba de catalepsia
      NOTA: La catalepsia en ratones es un estado (fisio)fisiológico caracterizado por una falta de movimiento voluntario, rigidez de la postura y resistencia a los cambios inducidos externamente en la posición del cuerpo. Se considera uno de los cuatro efectos estándar del THC, junto con la inhibición locomotora, la antinocicepción y la disminución de la temperatura corporal. En este ejemplo, el comportamiento cataléptico se evaluó con base en los procedimientos establecidos22, como se detalla a continuación:
      1. Configuración: Prepare una barra horizontal (7 cm de longitud) elevada 4 cm por encima de la superficie de una mesa de laboratorio limpia con iluminación ambiental normal (160 lux). Coloque un temporizador electrónico cerca que esté listo para usar.
      2. Transfiera el ratón de las instalaciones de alojamiento al laboratorio de pruebas y aclimatérelo dentro de la jaula durante 60 minutos antes de la prueba. Use una bata de laboratorio limpia y sin perfume.
      3. Con guantes de látex limpios, retire suavemente al ratón de su jaula, administre de manera segura una cantidad adecuada de THC o vehículo y vuelva a colocarlo en la jaula.
      4. En un momento adecuado después de la inyección de THC (45 min en este caso), retire el ratón de la jaula y coloque suavemente sus patas delanteras en la barra horizontal.
      5. Registre el tiempo de inmovilidad con el temporizador electrónico.
        NOTA: El tiempo de inmovilidad se define como el tiempo transcurrido desde que el ratón se coloca en la barra hasta el momento en que retira una o ambas patas.
      6. Detenga el temporizador cuando el mouse retire una o ambas patas de la barra o cuando se alcance el tiempo de corte de 10 s.
      7. Repita la prueba dos veces para cada ratón, con un intervalo de descanso de 2 min entre ensayos.
      8. Utilice el promedio de los dos tiempos de inmovilidad para el análisis final de los datos.
      9. Medida de resultado: Utilizar el tiempo de inmovilidad (en segundos) como indicador de catalepsia.
    2. Prueba de campo abierto (actividad locomotora en un entorno novedoso)
      NOTA: La hipolocomoción inducida por THC se evalúa mediante la prueba de campo abierto y siguiendo un protocolo establecido25.
      1. Configuración: Utilice una arena de campo abierto equipada con equipo de seguimiento de video para esta prueba. Asegúrese de que la arena de campo abierto esté limpia y libre de señales de olor de experimentos anteriores.
        NOTA: Se puede realizar una limpieza eficaz utilizando productos disponibles comercialmente descritos en la Tabla de materiales.
      2. Transfiera el ratón de las instalaciones de alojamiento al laboratorio de pruebas y aclimatérelo dentro de su jaula durante 60 minutos antes de realizar la prueba. Asegúrese de que la sala de pruebas tenga iluminación de baja intensidad (10 lux)25. Use una bata de laboratorio limpia y no use perfume.
      3. Con guantes limpios, retire suavemente al ratón de su jaula, administre de manera segura una cantidad adecuada de THC o vehículo y vuelva a colocar el ratón en la jaula.
      4. En un momento adecuado después de la inyección de THC (30 min en este caso), coloque el mouse suavemente en el centro de la arena, teniendo cuidado de minimizar el estrés de manejo.
      5. Graba sesiones de 10 minutos con una videocámara y un software de seguimiento del comportamiento.
      6. Después de la prueba, devuelva el ratón a su jaula de origen y limpie la arena a fondo con la solución de limpieza descrita anteriormente.
      7. Medida de resultado: Calcular la distancia total recorrida, medida en metros, como parámetro principal para cuantificar la actividad locomotora.
    3. Prueba de inmersión en la cola (umbrales nociceptivos, también conocida como prueba de extracción de la cola en agua caliente)
      NOTA: La nocicepción se evalúa mediante la prueba de inmersión de cola, como se describió anteriormente26. Esta prueba se utiliza para evaluar la efectividad de los analgésicos potenciales y para evaluar la tolerancia a sus efectos. Durante la prueba, se aplica calor a la cola de un ratón como un estímulo doloroso y se mide el tiempo para retirar la cola de la fuente de calor.
      1. Configuración: Prepare un baño de agua mantenido a 54 °C con iluminación ambiental normal (160 lux). Coloque un temporizador electrónico cerca que esté listo para usar.
      2. Sujete suavemente al ratón con un bolsillo de tejido blando fabricado con almohadillas de entrenamiento para mascotas (Glad), asegurándose de que la cola permanezca accesible.
      3. Sumerja el tercio distal de la cola en el baño de agua y encienda el temporizador simultáneamente.
      4. Registre la latencia hasta la retirada de la cola (en segundos), definida como el movimiento reflejo de la cola.
      5. Establezca un tiempo de corte máximo de 10 s para evitar daños en los tejidos y molestias.
      6. Repita la medición dos veces para cada ratón en cada punto de tiempo (en este caso, 60, 180 y 300 minutos después de la inyección de THC), con un intervalo de 5 minutos entre ensayos.
      7. Promedie las dos mediciones de latencia para el análisis de datos.
      8. Medida de resultado: Calcular la latencia hasta la retirada de la cola, medida en segundos, como la variable de resultado principal para evaluar los efectos antinociceptivos.
  5. Análisis estadísticos
    1. Expresar los resultados como medios ± SEM. Determinar la significación utilizando el análisis de varianza de dos vías (ANOVA) seguido de la prueba de comparaciones múltiples de Šídák o ANOVA de tres vías seguida de la prueba de comparaciones múltiples de Tukey. Considere las diferencias significativas si P < 0.05.
      NOTA: Se utilizó GraphPad Prism versión 10.4 para realizar el análisis.

Resultados

Para ilustrar el protocolo descrito anteriormente, presentamos resultados sobre los efectos farmacológicos agudos del THC. Cuatro grupos de ratones (8 por grupo), macho adolescente, macho adulto, hembra adolescente y hembra adulta, recibieron tres dosis de THC (1, 5 y 10 mg / kg) junto con un vehículo como control. A continuación, se evaluaron la catalepsia, la actividad locomotora y la nocicepción, centrándose en la dependencia dosis-dosis de los efectos y las diferencias entre sexos y edades.

Primero, para los efectos catalépticos agudos, el THC produjo catalepsia dependiente de la dosis en ratones machos adolescentes y adultos (Figura 4A y Tabla 1). La duración de la respuesta fue dependiente de la dosis (P<0,0001, ANOVA de dos vías), con 5 y 10 mg/kg produciendo efectos estadísticamente significativos en ambos grupos de edad, en comparación con los controles de vehículos en cada grupo (P < 0,0001 por la prueba de comparaciones múltiples de Šídák). A la dosis de 10 mg/kg, el THC produjo catalepsia tanto en ratones hembra adolescentes como adultos (Figura 4B y Tabla 2), y las hembras adultas mostraron una respuesta menos marcada en comparación con las hembras adolescentes (P < 0,0001 según la prueba de comparaciones múltiples de Šídák). Los conjuntos de datos se analizaron más a fondo para determinar si el sexo afectaba la catalepsia inducida por THC. Se observó una respuesta sexualmente dimórfica modesta pero significativa en las adolescentes en comparación con los hombres (P = 0,0204) (Figura 4C y Tabla 3). Se encontró un efecto del sexo considerablemente más fuerte en las hembras adultas, que eran significativamente menos sensibles a los efectos catalépticos del THC en comparación con los ratones adultos machos (P < 0,0001) (Figura 4D y Tabla 4).

En segundo lugar, para los efectos locomotores agudos, el THC redujo la actividad locomotora en ratones machos (Figura 5A y Tabla 5). Este efecto dependía tanto de la dosis de THC como de la edad de los animales (P < 0,0001 y P = 0,0042, respectivamente), siendo los ratones adolescentes más sensibles al efecto del THC en comparación con los ratones adultos. Las pruebas de comparación múltiple post-hoc indicaron que a una dosis de 5 mg / kg de THC, los ratones adolescentes se movieron significativamente menos que los ratones adultos (P < 0.0001). El THC redujo la actividad locomotora también en ratones hembra (Figura 5B y Tabla 6). El ANOVA de dos vías mostró efectos significativos tanto de la dosis como de la edad también en ratones hembra (P < 0,0001 y P = 0,0103, respectivamente) (Figura 5B y Tabla 6). Sin embargo, las pruebas de comparación múltiple post-hoc no revelaron diferencias estadísticamente significativas entre ratones hembra adolescentes y adultos a dosis de 0 o 10 mg / kg de THC (Figura 5B). Estos conjuntos de datos se analizaron más a fondo para determinar si el sexo afectaba la hipolocomoción inducida por THC. No se observó dimorfismo sexual en ratones adolescentes (Figura 5C y Tabla 7); sin embargo, los ratones adultos exhibieron un dimorfismo sexual estadísticamente significativo (P = 0,0046), y las hembras adultas mostraron un movimiento significativamente mayor en comparación con los machos adultos. Sin embargo, las pruebas de comparación múltiple post-hoc no revelaron diferencias estadísticamente significativas entre sexos a dosis de 0 o 10 mg/kg de THC (Figura 5D y Tabla 8).

En tercer lugar, para los efectos antinociceptivos agudos, el THC redujo la nocicepción por inmersión de la cola en ratones machos (adolescentes, Figura 6A y Tabla 9; adultos, Figura 6C y Tabla 11). En varones adolescentes, el THC produjo efectos antinociceptivos significativos a 5 y 10 mg / kg, probados a los 60, 180 y 360 minutos después de la administración (P < 0.0001 por la prueba de comparaciones múltiples de Šídák, en relación con la latencia de movimiento de cola de los ratones de control del vehículo) (Figura 6A y Tabla 9). El ANOVA de dos vías confirmó los fuertes efectos de la dosis de THC en la latencia del movimiento de la cola (P < 0,0001) y mostró una disminución dependiente del tiempo en los efectos antinociceptivos, especialmente a la dosis más alta (P = 0,0133) (Figura 6A y Tabla 9). Se observó un efecto similar dependiente de la dosis de THC, pero no el efecto del tiempo, en ratones adolescentes hembras (P < 0,0001 y P = 0,9923, respectivamente) (Figura 6B y Tabla 10). En hombres adultos, el THC produjo efectos antinociceptivos significativos solo a la dosis más alta (10 mg / kg) y al punto de tiempo más temprano (60 min después de la administración) (P < 0.0001 por la prueba de comparaciones múltiples de Šídák, en comparación con los controles del vehículo) (Figura 6C y Tabla 11). El ANOVA de dos vías mostró un efecto significativo tanto de la dosis como del tiempo (dosis, P < 0,0001; tiempo, P = 0,0007) (Tabla 11). En mujeres adultas, se observó un efecto antinociceptivo significativo solo a la dosis más alta (10 mg / kg) y al punto de tiempo más temprano (60 min después de la administración) (P < 0.0012 por la prueba de comparaciones múltiples de Šídák, en relación con los controles del vehículo) (Figura 6D y Tabla 12). Con respecto a los efectos del sexo y la edad en la antinocicepción inducida por THC, el ANOVA de dos vías reveló que los efectos del THC en la latencia del movimiento de la cola se vieron afectados tanto por la edad como por el sexo (Figura 6E, F, Tabla 13 y Tabla14). El efecto más fuerte se observó en varones adolescentes 60 minutos después de la administración de THC, aunque los cuatro grupos de ratones mostraron una antinocicepción inducida por THC significativa en comparación con los controles de vehículos apropiados en este punto de tiempo (Figura 6E). Curiosamente, se observó un efecto significativo del sexo en ratones adolescentes pero no adultos en el punto de tiempo de 60 minutos después del THC (adolescentes, P = 0,0083; adultos, P = 0,9919 según la prueba de comparaciones múltiples de Šídák) (Figura 6E y Tabla 13). En el punto de tiempo posterior al THC de 300 minutos, se encontraron efectos antinociceptivos significativos solo en ratones adolescentes, tanto machos como hembras, pero no en ratones adultos (Figura 6F y Tabla 14). El ANOVA de tres vías probó las tres variables, dosis, edad y sexo, simultáneamente y reveló efectos significativos tanto del tiempo como de la dosis (P = 0,0007 y P < 0,0001, respectivamente) y la interacción significativa entre el tiempo y la dosis (P = 0,0022) (Tabla 15).

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Figura 1: Estructuras químicas de los fitocannabinoides, THC y CBD, y endocannabinoides, anandamida y 2-AG. El delta-9-tetrahidrocannabinol (THC) se produce en la inflorescencia de la planta de cannabis hembra y es responsable de sus efectos psicotrópicos; El THC actúa uniéndose a los receptores CB1 y CB2 acoplados a proteínas G en el cerebro y otros tejidos del cuerpo. El cannabidiol (CBD) es un cannabinoide no psicotrópico con propiedades antiepilépticas y posiblemente antipsicóticas y antiinflamatorias. Dos activadores endógenos principales de los receptores CB, la anandamida y el 2-araquidonoil-sn-glicerol (2-AG), son mensajeros derivados de lípidos en el cerebro y los tejidos periféricos, producidos a demanda, y están involucrados en varios procesos de señalización de corto alcance, como el ajuste fino de la plasticidad sináptica en el SNC. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 2: Ejemplo de un registro de uso de sustancias controladas I. Cualquier uso de THC debe registrarse en un registro de uso de sustancias controladas I ad-hoc, que se guarda en la carpeta de sustancias controladas almacenada en un gabinete cerrado con llave o en un espacio de oficina seguro. Este formulario debe incluir el nombre y la afiliación del investigador principal que debe estar registrado para una licencia de la Lista 1, información sobre el medicamento programado y el lote exacto, número de protocolo, persona autorizada que está usando el medicamento con la cantidad y el saldo para cada uso. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 3: Esquema que muestra el orden de los experimentos de pruebas de comportamiento. El orden de los procedimientos fue: locomoción (30 min post-THC), catalepsia (45 min post-THC) e inmersión en la cola (60-, 180- y 300-min post-THC). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 4: Catalepsia aguda inducida por THC en ratones. El THC produce catalepsia en ratones adolescentes y adultos (A) machos y (B) hembras. La respuesta se evaluó mediante la prueba de barras después de la inyección i.p. de THC a la dosis indicada. El mismo conjunto de datos se analizó para determinar los efectos del sexo en la catalepsia inducida por THC en ratones (C) adolescentes y (D) adultos machos y hembras. Los resultados se expresan como medias ± SEM. La significación se determinó mediante ANOVA de dos vías seguido de la prueba de comparaciones múltiples de Šídák. Las diferencias se consideraron significativas si P < 0,05. P < 0,0001 en comparación con el control del vehículo, ##P < 0,01 y ####P < 0,0001 en comparación con el grupo de adolescentes de 10 mg/kg en el panel B o el grupo de hombres de 10 mg/kg en los paneles C y D. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 5: Hipolocomoción aguda inducida por THC en ratones. El THC reduce la actividad locomotora espontánea en ratones adolescentes y adultos (A) machos y (B) hembras. La respuesta se evaluó mediante la prueba de campo abierto después de la inyección i.p. de THC a la dosis indicada. El mismo conjunto de datos se analizó para determinar los efectos del sexo en la hipolocomoción inducida por THC en ratones (C) adolescentes y (D) adultos machos y hembras. Los resultados se expresan como medias ± SEM. La significación se determinó mediante ANOVA de dos vías seguido de la prueba de comparaciones múltiples de Šídák. Las diferencias se consideraron significativas si P < 0,05. *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001 y ****P < 0,0001 en comparación con el control del vehículo, y ####P < 0,0001 en comparación con el grupo de adolescentes de 5 mg/kg en el panel A. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 6: Analgesia aguda inducida por THC en ratones. Los efectos antinociceptivos agudos del THC se midieron mediante la prueba de inmersión en la cola en (A) ratones adolescentes machos, (B) adolescentes hembras, (C) machos adultos y (D) hembras adultas después de 60, 180 o 300 minutos desde la inyección i.p. de THC a la dosis indicada. El mismo conjunto de datos se analizó para los efectos de la edad y el sexo sobre la antinocicepción inducida por THC después de (E) 60 min o (F) 300 min de la administración de THC. Los resultados se expresan como medias ± SEM. La significación se determinó mediante ANOVA de dos vías seguido de la prueba de comparaciones múltiples de Šídák. Las diferencias se consideraron significativas si P < 0,05. *P < 0,05, ***P < 0,001 y ****P < 0,0001 en comparación con el control del vehículo, y ##P < 0,01 entre el grupo de 10 mg/kg de hombres y mujeres adolescentes, y @P < 0,05 y @@P < 0,01 en comparación con el grupo de 10 mg/kg de hombres adultos y mujeres adultas, respectivamente. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Tabla 1: Análisis ANOVA de dos vías sobre los efectos agudos del THC en la producción de catalepsia en ratones machos adolescentes y adultos (relacionado con la Figura 4A) (n = 7-8 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 2: Análisis ANOVA de dos vías sobre los efectos agudos del THC en la producción de catalepsia en ratones hembra adolescentes y adultos (relacionado con la Figura 4B) (n = 5-8 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 3: Análisis ANOVA de dos vías sobre los efectos agudos del THC en la producción de catalepsia en ratones machos y hembras adolescentes (relacionado con la Figura 4C) (n = 5-8 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 4: Análisis ANOVA de dos vías sobre los efectos agudos del THC en la producción de catalepsia en ratones machos y hembras adultos (relacionado con la Figura 4D) (n = 7-10 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 5: Análisis ANOVA de dos vías sobre los efectos agudos del THC en la locomoción en ratones machos adolescentes y adultos (relacionado con la Figura 5A) (n = 7-9 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 6: Análisis ANOVA bidireccional sobre los efectos agudos del THC en la locomoción en ratones hembra adolescentes y adultos (relacionado con la Figura 5B) (n = 5-8 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 7: Análisis ANOVA de dos vías sobre los efectos agudos del THC en la locomoción en ratones adolescentes machos y hembras (relacionado con la Figura 5C) (n = 5-8 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 8: Análisis ANOVA de dos vías sobre los efectos agudos del THC en la locomoción en ratones adultos machos y hembras (relacionado con la Figura 5D) (n = 7-9 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 9: Análisis ANOVA bidireccional sobre los efectos analgésicos agudos del THC en ratones machos adolescentes (relacionado con la Figura 6A) (n = 7-8 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 10: Análisis ANOVA de dos vías sobre los efectos analgésicos agudos del THC en ratones hembra adolescentes (relacionado con la Figura 6B) (n = 5-8 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 11: Análisis ANOVA de dos vías sobre los efectos analgésicos agudos del THC en ratones machos adultos (relacionado con la Figura 6C) (n = 6-8 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 12: Análisis ANOVA de dos vías sobre los efectos analgésicos agudos del THC en ratones hembra adultos (relacionado con la Figura 6D) (n = 7-8 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 13: Análisis ANOVA de dos vías sobre los efectos analgésicos agudos del THC en ratones adolescentes y adultos, machos y hembras, probado después de 60 min de la inyección de 10 mg / kg de THC (relacionado con la Figura 6E) (n = 5-8 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 14: Análisis ANOVA de dos vías sobre los efectos analgésicos agudos del THC en ratones adolescentes y adultos, machos y hembras, probado después de 300 min de la inyección de 10 mg / kg de THC (relacionado con la Figura 6F) (n = 5-8 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Tabla 15: Análisis ANOVA de tres vías sobre los efectos analgésicos agudos del THC en ratones adolescentes y adultos, machos y hembras, probados después de 60, 180 y 300 min de la inyección de 10 mg / kg de THC (relacionado con la Figura 6E y 6F) (n = 7-8 por grupo). Haga clic aquí para descargar esta tabla.

Discusión

Este artículo proporciona una descripción general de los procedimientos para obtener y almacenar THC de acuerdo con las regulaciones actuales de EE. UU. y describe un protocolo para preparar THC para inyección intraperitoneal y administrarlo a ratones adolescentes (PND 30-35) y adultos jóvenes (PND 70-75). Es fundamental obtener THC de una fuente legítima y cumplir con todas las regulaciones aplicables. En los Estados Unidos, los investigadores deben cumplir con los requisitos regulatorios federales y estatales, incluso en los estados donde el cannabis es legal tanto para uso médico como no médico. El uso de una fuente certificada garantiza el acceso al THC de grado de investigación, que se fabrica bajo un estricto control que garantiza una potencia y pureza constantes. Por el contrario, el uso de una fuente no regulada o no autorizada compromete la integridad científica, introduce un riesgo de desviación y expone a los investigadores a consecuencias legales.

Examinamos tres respuestas farmacológicas estándar al THC: catalepsia, locomoción reducida y analgesia. Reproducimos extensos datos de la literatura (véanse, por ejemplo, las referencias 27,28,29) que muestran que el THC afecta estas respuestas de una manera dependiente de la dosis. Estas pruebas se utilizan en la investigación preclínica para evaluar las propiedades farmacológicas de los agonistas de los receptores cannabinoides, aunque su relevancia para la experiencia humana puede variar. La catalepsia se refiere a un estado en el que el sujeto experimenta una capacidad reducida para moverse o participar en funciones motoras normales. Esto se manifiesta como una inmovilización física o rigidez, con el sujeto manteniendo posturas inusuales. La locomoción reducida (o hipolocomoción) se refiere a una disminución en el nivel general de actividad motora horizontal, que se manifiesta como un movimiento lento o menos frecuente. Esto puede deberse a sedación, discapacidad motora o simplemente falta de motivación para moverse. En estudios con animales, esto a menudo se observa como una reducción en el comportamiento exploratorio o los niveles generales de actividad en un entorno nuevo. La tercera prueba, la antinocicepción, se refiere a la capacidad del THC para aumentar la latencia de abstinencia de la cola en una prueba de inmersión de la cola. En modelos animales, donde la evaluación del componente subjetivo de la analgesia requiere pruebas especializadas, la antinocicepción por inmersión en cola proporciona una visión útil, aunque limitada, de cómo los medicamentos afectan la función nociceptiva.

Los resultados presentados aquí muestran que el THC induce catalepsia de forma dependiente de la dosis independientemente del sexo y la edad, en particular en las dosis de 5 mg/kg y 10 mg/kg. Se observó un efecto específico por edad y sexo en ratones hembra adultos, que mostraron una producción significativamente atenuada de catalepsia en comparación con los ratones machos o hembra adolescentes. La hipolocomoción inducida por THC en un entorno novedoso fue más fuerte en ratones adolescentes en comparación con ratones adultos, independientemente del sexo. Esta diferencia relacionada con la edad se distinguió de los efectos hipolocomotores selectivos del THC en adultos en su jaula doméstica, un entorno familiar30. Con respecto a las acciones antinociceptivas agudas del THC, se encontraron efectos estadísticamente significativos tanto en dosis de 5 mg / kg como de 10 mg / kg en ratones machos adolescentes, pero en ratones machos adultos, solo la dosis de 10 mg / kg fue efectiva. Entre los tres puntos de tiempo probados aquí, los efectos antinociceptivos del THC fueron más altos a los 60 minutos después del THC y disminuyeron después. Los varones adolescentes fueron los más sensibles a los efectos antinociceptivos del THC entre los cuatro grupos de edad y sexo, y se observó una diferencia significativa entre sexos en los grupos de ratones adolescentes después de 60 minutos de la inyección de 10 mg / kg de THC. Después de 300 min de administración de THC, se encontró un claro efecto de la edad en el que se observaron efectos antinociceptivos significativos en adolescentes pero no en ratones adultos, independientemente del sexo. En general, los ratones adolescentes exhibieron una mayor sensibilidad al THC en comparación con los adultos, particularmente en medidas de locomoción y nocicepción. Con todo, estos resultados indican que la adolescencia es un período sensible a los efectos farmacológicos agudos del THC, aunque esto puede depender de la prueba30. Los resultados aquí también identifican el impacto tanto de la edad como del sexo en los efectos del THC, lo que sugiere que las mujeres adultas son las menos sensibles al THC.

La exposición al THC durante la adolescencia, especialmente cuando es frecuente y en dosis altas, puede alterar la función del sistema endocannabinoide en todo el cuerpo, incluidoel cerebro. Esta interrupción puede tener efectos duraderos tanto en la salud mental como en la física 32,33,34. Los estudios epidemiológicos de las últimas tres décadas han demostrado consistentemente asociaciones entre el consumo de cannabis en adolescentes y deficiencias a largo plazo en la cognición, el estado de ánimo y el funcionamiento psicosocial, y estos efectos pueden extenderse a la edad adulta, incluso después de dejar de consumir 32,33,34,35,36. Además, se han reportado alteraciones a largo plazo en el peso corporal, el metabolismo y la función inmune. Aunque estas asociaciones están bien documentadas, es fundamental establecer una relación causal entre el consumo de cannabis y sus posibles impactos en la salud. Se pueden utilizar varios métodos, incluido el análisis de gemelos discordantes, la aleatorización mendeliana y las intervenciones cuasiexperimentales, para evaluar la causalidad en las poblaciones humanas. Sin embargo, los experimentos con animales de laboratorio también juegan un papel vital en la dilucidación de la causalidad37. Los hallazgos de nuestro laboratorio, financiado por el Instituto Nacional sobre el Abuso de Drogas, utilizando un modelo de roedores de exposición moderada pero frecuente al THC durante la adolescencia, respaldan la hipótesis de que la adolescencia es un período vulnerable para la exposición al THC 17,18,25,38,39,40. Incluso dosis moderadas de la droga durante esta ventana crítica de desarrollo pueden tener efectos duraderos en varios componentes del sistema endocannabinoide adulto. Estos efectos están relacionados con cambios neuroconductuales, así como con deficiencias en las respuestas inmunes y la capacidad de hacer frente al estrés psicosocial. Nuestra investigación anterior también descubrió alteraciones inesperadas en la función del tejido adiposo, proporcionando una posible explicación molecular para los cambios metabólicos a largo plazo observados en los consumidores habituales de cannabis18. Al activar de manera inapropiada los receptores CB1 en el cerebro durante períodos importantes de desarrollo neurológico como la adolescencia, el THC puede alterar el equilibrio requerido para la maduración cerebral, lo que lleva a cambios estructurales y funcionales que pueden persistir en la edad adulta.

En los humanos, fumar y vapear son los métodos más comunes de consumo de cannabis en todos los grupos de edad. Nuestro protocolo actual describe la administración de THC por vía intraperitoneal (i.p.), que es práctica, reproducible y produce respuestas farmacocinéticas y farmacodinámicas en roedores que, en varios aspectos, se asemejan a las observadas en los consumidores humanos de cannabis. Por ejemplo, se ha demostrado que una dosis i.p. de 5 mg/kg de THC en ratones machos adolescentes y adultos produce concentraciones sanguíneas máximas comparables a las reportadas en usuarios humanos adultos. La administración de THC en aerosol (coloquialmente conocida como "vapor") se está explorando como complemento de la inyección i.p. Este enfoque se basa en la premisa de que la inhalación pasiva de THC en aerosol, como fumar o vapear, conduce a la absorción pulmonar, lo que resulta en un inicio más rápido de los efectos, un metabolismo hepático reducido y resultados psicoactivos potencialmente distintos en comparación con la administración parenteral. En particular, estudios anteriores han demostrado que las ratas se autoadministran extractos de cannabis en aerosol o mezclas de THC / cannabidiol en paradigmas conductuales operantes, lo que destaca el potencial de este método para estudiar las propiedades reforzantes del THC.

En conclusión, este protocolo se basa en métodos establecidos para evaluar los comportamientos de tétrada inducidos por cannabinoides41,42, que dependen de la activación de los receptores neuronales CB1 43, al ofrecer varias actualizaciones y refinamientos clave. Primero, describimos los procedimientos que se alinean con las regulaciones institucionales y de la DEA actuales para obtener, manejar y administrar consideraciones críticas sobre el THC para cualquier persona sin experiencia práctica. En segundo lugar, aplicamos el paradigma de la tétrada a ratones adolescentes (PND 30-35) y adultos jóvenes (PND 70-75), dos etapas de desarrollo que son muy relevantes para la exposición al cannabis en adultos jóvenes y emergentes, pero que siguen estando subrepresentadas en la investigación preclínica. Los hallazgos de este estudio recapitulan los efectos conocidos dependientes de la dosis del THC sobre la catalepsia, la locomoción y la analgesia, al tiempo que revelan una mayor sensibilidad al THC en ratones adolescentes, particularmente en los dominios nociceptivo y locomotor. Esta información específica de la edad y la alineación regulatoria hacen que este protocolo sea especialmente valioso para los recién llegados a la investigación de cannabinoides y para los investigadores que investigan el impacto de los cannabinoides en el desarrollo.

Divulgaciones

Los autores no informan intereses financieros biomédicos ni posibles conflictos de intereses.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por los Institutos Nacionales sobre el Abuso de Drogas (Subvención No. 2P50DA044118 [a DP]).

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Jeringas TB de 1 mlBD309659200/caja; Estéril, de un solo uso.
Viales de vidrio de 8 mlFisher Scientific W224584144/Caja, utilizado para preparar la solución inyectable de THC.
Software ANY-mazeCUALQUIER-laberinto6000Se utiliza para grabar videos de pruebas de comportamiento y cuantificar elementos de las pruebas para el análisis de datos.
Ratones C57BL/6JLaboratorios Jackson#000664Ratones de tipo salvaje utilizados para todos los experimentos; Puede especificar la edad exacta y el sexo deseado.
Báscula Compass CXOhausCR221Se utiliza para pesar ratones para determinar la cantidad de THC a inyectar; 220 g máximo, d = 0,1 g.
Placa caliente Corning PyroceramFisher Scientific11500151Se utiliza para calentar el baño de agua para la prueba de movimiento de cola.
Delta-9-tetrahidrocannabinolCayman Chemical 12068Almacenado en la caja fuerte cerrada de forma segura para medicamentos de la Lista 1 en un -30 º C congelador.
Guantes de nitrilo FisherbrandFisher Scientific19-181-610100/paquete; Guantes de un solo uso, sin látex, utilizados para el equipo de protección personal adecuado.
GraphPad Prism v10.4Teclado gráficoN/ASoftware de análisis estadístico utilizado para analizar datos experimentales y ejecutar pruebas estadísticas.
Vaso de precipitados de alta resistenciaFisher ScientificS81280Se utiliza para retener agua caliente para la prueba de movimiento de cola.
Gas nitrógeno de alta purezaAirgasUN1066  Se utiliza para evaporar el etanol de la solución madre de THC.
Cámara web Logitech C920Logitech960-001055Se utiliza para registrar pruebas de comportamiento de animales; Carl Zeiss 1080p/30 fps HD USB.
Cuadro de campo abiertoStoelting Co60101Caja con lados opacos para realizar pruebas de campo abierto; Lados fácilmente extraíbles para su limpieza.
Almohadillas de entrenamiento para mascotasAlegreB088G1N2H885/paquete; 22 pulg. &agudo; 22 pulgadas; se utiliza para envolver y sujetar ratones para la prueba Tail Flick.
Agujas PrecisionGlideBD305109100/caja; 0,4 mm y agudo; 13 milímetros; Estéril, de un solo uso.
SalinoFisher Scientific (Cytiva)Z1377Frascos de 1 L, USP Grado Estéril.
SCOE 1xBioFOGR-SKSolución de limpieza utilizada para limpiar materiales de prueba de comportamiento.
Tween-80Sigma AldrichP8074-500MLBioXtra, líquido viscoso; CAS # 9005-65-6.
Baño de agua ultrasónicoFisher Scientific (Branson)CPX2800Control de temperatura; Limpiador ultrasónico digital.
Mezclador de vórticeFisher Scientific2215365Se utiliza para mezclar el contenido de la solución inyectable de THC mientras se prepara.

Referencias

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