Detección de ácido nucleico y gen de resistencia a medicamentos de Mycoplasma pneumoniae

Resumen

Este protocolo proporciona una forma rápida y fiable de detectar infecciones por Mycoplasma pneumoniae e identificar la resistencia a los antibióticos. Ayuda a los médicos a elegir los tratamientos adecuados más rápido, mejorando la atención a los pacientes con neumonía y apoyando un mejor uso de los antibióticos

Resumen

Mycoplasma pneumoniae (Mp) representa uno de los patógenos más prevalentes responsables de la neumonía adquirida en la comunidad (NAC) en poblaciones pediátricas. La detección de genes de resistencia a Mycoplasma pneumoniae proporciona un sólido apoyo técnico y una base teórica para el diagnóstico clínico preciso y el tratamiento de las infecciones por MP. El diagnóstico y la evaluación precisos de la resistencia a los medicamentos en la infección por Mp son esenciales para el tratamiento clínico. Los métodos de detección comunes para Mycoplasma pneumoniae incluyen cultivo, detección de anticuerpos y ensayos basados en biología molecular. El cultivo de MP es el estándar de oro para el diagnóstico, pero requiere un medio específico, requiere mucho tiempo y tiene baja sensibilidad. La detección de Mp basada en anticuerpos se usa ampliamente; sin embargo, pueden ocurrir falsos negativos en la etapa inicial de la infección. La detección basada en biología molecular proporciona una respuesta rápida, bajo riesgo de contaminación, alta sensibilidad, alta especificidad y no está limitada por el momento de la recolección de muestras o el estado inmunológico. Por lo tanto, ha sido reconocido como un nuevo estándar de oro para diagnosticar la infección por Mycoplasma pneumoniae . Los agentes macrólidos son el tratamiento de primera elección para la infección por Mp en niños. Sin embargo, con el uso extensivo de macrólidos en infecciones del tracto respiratorio en niños, la incidencia de infección por Mycoplasma pneumoniae resistente a los medicamentos ha ido en aumento. Los pacientes infectados con cepas resistentes experimentan una duración significativamente más larga de la fiebre, hospitalización prolongada y fiebre prolongada después de la administración en comparación con los infectados con cepas sensibles. Los sitios de mutación identificados hasta la fecha incluyen 2063, 2064, 2067 y 2617. En China, las mutaciones puntuales se han documentado solo en las posiciones 2063 y 2064, siendo la más común una sustitución de A a G en la posición 2063. Para estos sitios, se ha empleado la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) combinada con tecnología de sonda fluorescente para detectar los ácidos nucleicos y las mutaciones de resistencia a los medicamentos de Mycoplasma pneumoniae en muestras de esputo humano. La detección de genes de resistencia a Mycoplasma pneumoniae ofrece un apoyo técnico crucial y una base teórica para un diagnóstico preciso y un tratamiento eficaz de la infección por Mp.

Introducción

Mycoplasma pneumoniae (Mp) es el microorganismo patógeno más pequeño capaz de sobrevivir de forma independiente, situado en una posición intermedia entre bacterias y virus. Se disemina principalmente por gotitas respiratorias o aerosoles y constituye el segundo patógeno más común asociado con la neumonía adquirida en la comunidad (NAC) en niños¹, responsable del 20% al 40% de los casos de NAC². Mp muestra resistencia inherente a los antibióticos β-lactámicos, como la penicilina y las cefalosporinas, debido a su ausencia de pared celular, a la que estos antibióticos se dirigen ob....

Protocolo

Todos los protocolos del estudio fueron revisados y aprobados por el Comité de Ética Médica del Hospital Popular de Heyuan (Aprobación No. YXYJLL-LW2025001). Todos los pacientes proporcionaron su consentimiento informado por escrito antes de participar.

1. Recogida de muestras

NOTA: Tenga cuidado al mantener la técnica aséptica durante la recolección de muestras.

1. Recoger muestras de esputo del paciente o paciente sospechoso. Obtenga muestras dentro de los 3 días posteriores al inicio de la enfermedad del paciente.
2. Indique al paciente que se enjuague la boca ....

Resultados

Después de la licuefacción, la extracción de ácidos nucleicos y la amplificación por PCR de fluorescencia de muestras de esputo, el valor inicial, el valor final y el valor umbral de la línea de base se modificaron después del análisis de la curva de amplificación. El valor inicial fue 3 y el valor final fue 20.

Los resultados representativos de este experimento fueron positivos para el ácido nucleico Mp, y se produjo una mutaci.......

Discusión

La PCR y sus técnicas derivadas demuestran una sensibilidad y especificidad superiores en comparación con los métodos serológicos en la identificación, tipificación y detección de resistencia a los medicamentos en Mycoplasma pneumoniae (MP). Además, las técnicas basadas en PCR proporcionan facilidad de operación y reducción de gastos, lo que las convierte en una alternativa viable para el diagnóstico clínico de rutina³⁶. Mp es un patógeno notable asociado.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Instrumento automatizado de extracción de ácidos nucleicos	Guangzhou Da 'an Gene Co., Ltd.	Inteligente 32
Consejos de filtro	Extracción de núcleos de ciencias de la vida Co., Ltd.	29822001	0-10µ L
Consejos de filtro	Extracción de núcleos de ciencias de la vida Co., Ltd.	03023001	1-50µ L
Consejos de filtro	Extracción de núcleos de ciencias de la vida Co., Ltd.	05623001	5-300µ L
Microtubos	Extracción de núcleos de ciencias de la vida Co., Ltd.	14124934	1,5 ml
Mycoplasma pneumoniae kit de detección de sitios de mutación de resistencia a fármacos y ácidos nucleicos (método de PCR de fluorescencia)	Jiangsu Mole Biotechnology Co., Ltd.	20241111
Reactivo de extracción de ácidos nucleares (método de perlas magnéticas)	Shengxiang Biotechnology Co., Ltd.	G24004
Tubos de PCR	DN Biotech(Hong Kong)  Co., Ltd.	6121003	0,2 ml
Instrumento de PCR fluorescente en tiempo real	BIO-RAD	CFX96