Artículo de método
Aquí, presentamos un protocolo para optimizar la germinación asibiótica de semillas, el desarrollo de plántulas y el alargamiento de brotes en Hemipilia cucullata. El protocolo también permite la inducción de cuerpos similares a protocormos a partir de explantes de hojas estériles, lo que facilita la propagación in vitro eficiente para la conservación y el uso sostenible de esta orquídea medicinal en peligro de extinción.
Hemipilia cucullata (Orchidaceae) es una orquídea terrestre ampliamente valorada por sus propiedades medicinales y atractivo ornamental, sin embargo, sus poblaciones silvestres están en peligro debido a la degradación del hábitat, la baja viabilidad de las semillas y el éxito limitado de la polinización. Para apoyar su conservación y utilización sostenible, este estudio desarrolló un protocolo optimizado para la germinación asibiótica de semillas maduras, el desarrollo de protocormos, el alargamiento de brotes y la inducción de cuerpos similares a protocormos (PLB) a partir de explantes de hojas estériles. Las semillas cultivadas en medio líquido 1/2 MS suplementado con 0,5 mg/L de NAA mostraron una tasa de germinación de 72 ± 6%, significativamente mayor que el testigo (46%) y el medio sólido (31%), iniciándose la germinación aproximadamente 21 días antes en cultivo líquido. Los protocormos se subcultivaron en medio B5 que contenía 0,5 mg/L de BA, 0,2 mg/L de NAA y 100 mL/L de agua de coco, lo que condujo a una proliferación eficiente. Después de 5-6 semanas, las plántulas se transfirieron a un medio de elongación de brotes (B5 suplementado con 0,5 mg / L de BA y 1 mg / L de NAA), donde exhibieron un alargamiento robusto de los brotes y una formación de hojas saludables. Para la inducción de PLB, la tasa de inducción más alta (44,3 ± 5,1%) se logró en medio de EM que contenía BA (3 mg / L) y NAA (0,2 mg / L). Este protocolo integral y reproducible puede ser una plataforma eficaz para la propagación a gran escala y la conservación ex situ de H. cucullata, ofreciendo un valioso apoyo para los esfuerzos de recuperación de esta orquídea en peligro de extinción.
Hemipilia cucullata (L.) Y.Tang, H.Peng & T.Yukawa, comúnmente conocida como orquídea neottiana cuculada, es una orquídea terrestre silvestre nativa de la templada Eurasia y está ampliamente distribuida desde Polonia hasta Japón1. Inicialmente clasificada en el género Neottianthe, esta especie fue reasignada recientemente al género Hemipilia, sección Neottianthe, según la evidencia molecular2. La planta crece a partir de tubérculos subterráneos y alcanza hasta 30 cm de altura, produciendo flores rosadas o de color rojo púrpura dispuestas en una espiga ....
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NOTA: Antes de comenzar el experimento, use equipo de protección personal, incluidos guantes, una bata de laboratorio y gafas de seguridad. Realice todos los procedimientos bajo una campana de flujo laminar para la esterilidad. Manipule el etanol y el hipoclorito de sodio con precaución y elimine los desechos según las normas de seguridad del laboratorio.
1. Esterilización de cápsulas y extracción de semillas
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Los pasos del protocolo presentados en este estudio representan la metodología optimizada desarrollada a través de una serie de experimentos comparativos destinados a mejorar la germinación asimbiótica de semillas, la proliferación de protocormos, el alargamiento de brotes y la inducción de PLB en H. cucullata. Por ejemplo, en la selección de PGR para promover la germinación de semillas, NAA mejora el desarrollo embrionario y la absorción de agua, mientras que BA promueve la diferenciación de yemas y la división.......
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Las cápsulas de orquídeas suelen contener numerosas semillas, a menudo superiores a diez mil, pero su germinación natural es extremadamente limitada debido a la ausencia de endospermo y su alta dependencia de asociaciones fúngicas simbióticas y señales ambientales específicas20. Por lo tanto, los protocolos de germinación asimbótica se han adoptado ampliamente para evitar estas limitaciones y permitir una propagación eficiente de las plántulas en condiciones contr.......
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Los autores no tienen nada que revelar.
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 1/2 MS Sales base con vitaminas | Coolaber | Referencia PM1061 | |
| 6-Bencilaminopurina | Tecnología bioquímica Shanghai Macklin Co., Ltd. | 1214-39-7 | |
| Poder de agar | Beijing Chembase Technology Co., Ltd. | 1400 | |
| Banco limpio | Equipo de purificación de Suzhou Co., Ltd. | SW-CJ-2G | |
| Agua de coco | BUEN AGRICULTOR | https://e.tb.cn/h.6F8GTrHG7pif7Tj?tk=jFTyVPU3OBs | |
| Detergente | Liby Ciencia y Tecnología | 6920174756784 | |
| Gamborg B5 Mediano | Laboratorios de Fitotecnología | G398 | |
| Botella de vidrio | Morebetter Biotechnology Co., Ltd. | MBT-BL-240 | |
| Murashige y Sales basales basales de Skoog | Laboratorios de Fitotecnología | M519 | |
| Pipeta | Eppendorf | 3123000268 | |
| Balanza de precisión | METTLER TOLEDO | 30834109 | |
| SPSS | Corporación de máquinas comerciales internacionales | Software utilizado para pruebas de significación estadística | |
| Sacarosa | Reactivo químico Sinopharm Co., Ltd. | 20210802 | |
| Tidiazurón | Tecnología bioquímica Shanghai Macklin Co., Ltd. | 51707-55-2 | |
| Ácido &alfa;-naftalenacético | Tecnología bioquímica Shanghai Macklin Co., Ltd. | 86-87-3 |
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