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Artículo de método
Este estudio investiga cómo el sevoflurano afecta la retención de la memoria y reduce la expresión de p-CREB y c-fos en las neuronas del hipocampo a través de la vía NMDAR / p-CREB / c-fos en ratas jóvenes. Los resultados muestran que el sevoflurano causa déficits de memoria a corto plazo y regula a la baja los marcadores de plasticidad sináptica, con efectos reversibles después de 3 días, independientemente de la frecuencia de dosificación.
El estudio de las deficiencias cognitivas durante el desarrollo del cerebro enfrenta desafíos debido a la naturaleza dinámica del neurodesarrollo, las limitaciones metodológicas y las barreras contextuales. Este estudio investigó un enfoque metodológico integrado para estudiar las deficiencias cognitivas en el cerebro en desarrollo causadas por el sevoflurano basado en la memoria y la expresión de p-CREB y c-fos en las neuronas del hipocampo a través de la vía de señalización NMDAR / p-CREB / c-fos en ratas jóvenes. Sesenta y cuatro ratas macho SD de 21 días de edad (peso corporal <80 g) se dividieron en cinco grupos: normal (n = 8), 60% O2 (n = 16), entrenamiento simulado (n = 8), sevoflurano de dosis única (n = 16) y sevoflurano de dosis múltiples (n = 16). Los dos grupos de sevoflurano se subagruparon en sacrificio 1 día (grupos sev1a y sev1b) y 30 días (grupos sev30a y sev30b) después del entrenamiento (n = 8 / subgrupo); Todas las demás ratas fueron sacrificadas 1 h después del entrenamiento. Se utilizó la prueba del laberinto en Y para evaluar el aprendizaje y la retención de la memoria. Se utilizó inmunohistoquímica para determinar el número de neuronas positivas para p-CREB y c-fos en las muestras de hipocampo. En comparación con el grupo 60% O2 (retención de memoria de 86,33% ± 17,52%), la memoria de las ratas en los grupos sev1a y sev1b mostró una disminución significativa (sev1a: 44,29% ± 11,26%; sev1b: 62,42% ± 7,27%; todos P<0,05), mientras que los grupos sev1b y sev30b no mostraron diferencias significativas (sev30a: 84,41% ± 14,15%; sev30b: 85,21% ± 11,61%; todos P>0,05). En comparación con el grupo O2 al 60% (c-fos: 92,83 ± 7,88; p-CREB: 72,22 ± 8,89), la expresión de p-CREB y c-fos en las neuronas del hipocampo disminuyó en el grupo sev1a (c-fos: 23,13 ± 3,28; p-CREB: 22,88 ± 5,18) y el grupo sev30 (c-fos: 23,22 ± 3,13; p-CREB: 25,58 ± 2,26) (todos P<0,05), mientras que los grupos sev30a y sev30b no mostraron diferencias significativas (todos P>0,05). El sevoflurano tiene un efecto estimulante negativo a corto plazo sobre la capacidad de mantenimiento de la memoria de ratas jóvenes sin un impacto basado en la frecuencia de dosificación. El sevoflurano disminuye la expresión de p-CREB y c-fos en las neuronas del hipocampo de ratas jóvenes.
El estudio de las deficiencias cognitivas durante el desarrollo del cerebro enfrenta desafíos significativos debido a la naturaleza dinámica del neurodesarrollo, las limitaciones metodológicas y las barreras contextuales. El desarrollo cerebral implica cambios rápidos y no lineales, lo que complica la identificación de deficiencias durante las ventanas críticas 1,2. En entornos de bajos recursos, barreras como la alfabetización de los cuidadores, la diversidad lingüística y el acceso limitado a herramientas especializadas (p. ej., resonancia magnética) dificultan la detección ....
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Todos los protocolos de este estudio fueron revisados y aprobados por el Comité de Ética del Hospital Xinhua, Facultad de Medicina de la Universidad Jiao Tong de Shanghai (aprobación No. XHEC-C-2016-023-2).
1. Visión general experimental de animales y agrupamiento
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Utilizando los datos de este estudio como ejemplos ilustrativos, hemos mostrado los tipos de resultados que se pueden generar con este marco metodológico, incluidas imágenes representativas de inmunotinción, así como datos conductuales y moleculares de diferentes grupos. El énfasis está en presentar los resultados típicos o esperados producidos por este enfoque, en lugar de proporcionar una interpretación de su significado biológico.
Resultados de las pruebas de aprendizaje y memoria d.......
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Este estudio investigó cómo el sevoflurano afecta la memoria y modula la expresión de p-CREB y c-fos en las neuronas del hipocampo a través de la vía de señalización NMDAR / p-CREB / c-fos en ratas jóvenes. Los resultados sugieren que el sevoflurano tuvo un efecto estimulante negativo a corto plazo (1 h después del entrenamiento, no después de 3 días) sobre la capacidad de mantenimiento de la memoria de ratas jóvenes, sin impacto basado en la frecuencia de dosificación (dosis única o sie.......
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Los autores informan que no hay intereses contrapuestos que declarar.
Ye Jiang y Guohui Li diseñaron el estudio. Ye Jiang y Lai Jiang recopilaron y analizaron los datos y redactaron el manuscrito. Ye Jiang y Guohui Li revisaron el manuscrito. Todos los autores revisaron y aprobaron la versión final del manuscrito para su envío. Este trabajo cuenta con el apoyo de subvenciones a Guohui Li del Programa Pujiang de Shanghai (subvención no. 23PJD057).
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Animales experimentales | |||
| Ratas Sprague-Dawley (SD) | Laboratorios Charles River (Pekín, China) | N/A | 21 días, varón |
| Comida para ratas estándar | Keao Xieli Feed (Beijing, China) | N/A | Dieta estándar para animales de laboratorio |
| Productos químicos y reactivos | |||
| Hidrato de cloral | Reactivo químico Sinopharm (Shanghái, China) | 80113818 | Anestésico para la perfusión terminal |
| Tampón de citrato (10x) | ZSGB-BIO (Pekín, China) | ZLI-9064 | Solución de recuperación de antígenos, pH 6.0 |
| Etanol (100%) | Reactivo químico Sinopharm (Shanghái, China) | 100092683 | Agente deshidratante para histología |
| Solución de tinción de hematoxilina | Baso Diagnostics Inc. (Zhuhai, China) | BA-4041 | Contratinción para IHC |
| Peróxido de hidrógeno (H2O2) | Reactivo químico Sinopharm (Shanghái, China) | 10011218 | Solución al 3% para bloquear la peroxidasa endógena |
| Bálsamo neutro | Solarbio (Pekín, China) | G8590 | Medio de montaje para diapositivas |
| Nitrógeno (N2) | Shanghai Medical Gas Co. (Shanghái, China) | N/A | Alta pureza, para mezcla de gases |
| Oxígeno (O2) | Shanghai Medical Gas Co. (Shanghái, China) | N/A | Grado médico, para mezcla de gases |
| Parafina | Leica Biosystems (Nussloch, Alemania) | 39601006 | Medio de inclusión tisular |
| Paraformaldehído (PFA) | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EUA) | 158127 | Fijador para perfusión y fijación de tejidos |
| Solución salina tamponada con fosfato (PBS) | Gibco (Waltham, MA, EE. UU.) | 70011044 | Solución madre 10x, pH 7,4 |
| Sevoflurano | AbbVie Inc. (Norte de Chicago, IL, EE. UU.) | N/A | Agente anestésico por inhalación |
| Lima sodada | W. R. Grace and Co. (Columbia, MD, Estados Unidos) | 22-01-0010 | Absorbente de CO2 para cámara de inhalación |
| Hidróxido de sodio (NaOH) | Reactivo químico Sinopharm (Shanghái, China) | 10019818 | Se utiliza para ajustar el pH de la solución de PFA |
| Sacarosa | Sangon Biotech (Shanghái, China) | A502693 | Se utiliza para la crioprotección del tejido cerebral |
| Xileno | Reactivo químico Sinopharm (Shanghái, China) | 10023418 | Agente de compensación para histología |
| anticuerpos y kits | |||
| Anticuerpo c-Fos | Abcam (Cambridge, Reino Unido) | AB190289 | Anti-ratón conejo, anticuerpo primario |
| Kit de cromógeno DAB | ZSGB-BIO (Pekín, China) | ZLI-9018 | Sustrato para el desarrollo del color HRP |
| Anticuerpo p-CREB (Ser133) | Tecnología de señalización celular (Danvers, MA, EE. UU.) | 9198 | Anti-ratón conejo, anticuerpo primario |
| Kit de detección de HRP de polímero | ZSGB-BIO (Pekín, China) | PV-9000 | Anticuerpo secundario y sistema de detección para IHQ |
| Equipo | |||
| Máquina de anestesia | Ciencias de la vida RWD (Shenzhen, China) | R500 | Para el suministro controlado de mezcla de gases |
| Procesador de tejidos automatizado | Leica Biosystems (Nussloch, Alemania) | ASP6025 | Para deshidratación y limpieza automatizadas |
| Criostato/Micrótomo | Leica Biosystems (Nussloch, Alemania) | CM1950 | Para el corte de tejido cerebral congelado/incrustado |
| Sistema de microscopio | Olimpo (Tokio, Japón) | BX53 | Para la obtención de imágenes de portaobjetos IHC |
| Bomba de perfusión | Longer Precision Pump Co. (Baoding, China) | BT100-2J | Bomba peristáltica para perfusión transcárdica |
| Vaporizador de sevoflurano | Ciencias de la vida RWD (Shenzhen, China) | R510 CV | Para un control preciso de la concentración de sevoflurano |
| Aparato Y-Maze | Med Associates Inc. (St. Albans, VT, EE. UU.) | MED-VFC-S-Y | Con red eléctrica y luces para evitar activamente |
| Software | |||
| Prisma GraphPad | Software GraphPad (San Diego, CA, EE. UU.) | Versión 9 | Análisis estadístico y visualización de datos |
| ImagenJ | Institutos Nacionales de Salud (Bethesda, MD, EUA) | Versión 1.53 | Software de análisis de imágenes para el recuento de células |
| Microsoft Excel | Microsoft Corporation (Redmond, WA, EE. UU.) | Oficina 365 | Software de hoja de cálculo para la recopilación de datos |
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