El protocolo describe métodos para estudiar los cambios micromorfológicos en las neuronas y la transición del citocromo c mitocondrial mediante microscopía electrónica de inmunotransmisión.
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Artículo de método
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El protocolo describe métodos para estudiar los cambios micromorfológicos en las neuronas y la transición del citocromo c mitocondrial mediante microscopía electrónica de inmunotransmisión.
Los cambios de ubicación de las proteínas en la microestructura a menudo presentan un mecanismo de regulación preciso a nivel de orgánulos patológicos. Cómo capturar con precisión la ubicación de esta transferencia de proteínas de orgánulos tiene un significado y un valor positivos para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades. Las mitocondrias juegan un papel central en la necrosis y la vía intrínseca de la apoptosis. En condiciones normales, el citocromo c (Cyt c) solo existe entre las membranas interna y externa de las mitocondrias y en el núcleo. Cuando las células sufren apoptosis, la permeabilidad de la membrana interna mitocondrial se altera y Cyt c se libera de las mitocondrias al citoplasma. En este estudio, se estableció un modelo de rata de lesión por isquemia-reperfusión cerebral, y los cambios micromorfológicos de las neuronas sometidas a apoptosis se mostraron mediante microscopía electrónica de inmunotransmisión. Además, muestra con mayor precisión la visión del marcado de inmunooro que transfiere Cyt c de la matriz mitocondrial al citoplasma después de una lesión por isquemia-reperfusión cerebral. La técnica de microscopía electrónica de inmunotransmisión presentada en este protocolo es adecuada para la demostración de cualquier transición de posición de proteínas a nivel microscópico.
Según el estudio de la carga mundial de morbilidad de 2021, el accidente cerebrovascular fue la3ª causa principal de muerte y la4ª causa principal de años de vida ajustados por discapacidad. Hubo 11,9 millones de nuevos eventos de accidente cerebrovascular, en los que el accidente cerebrovascular isquémico constituyó el 65,3% (7,8 millones)1. La muerte neuronal ocurre después de la isquemia cerebral, incluida la necrosis y la apoptosis. El tejido cerebral más gravemente afectado sufre posteriormente la muerte celular necrótica. Las neuronas en la penumbra isquémica o zona de periinfarto pu....
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El programa de animales ha sido aprobado por el Comité de Ética de SLAS (Número de edición de IACUC: SYST-2024-018). Aquí, se criaron 6 ratas SD macho libres de patógenos (200-220 g) en jaulas de ventilación independientes, manteniendo el ambiente de laboratorio a 22-25 °C y 45%-65% de humedad relativa. Todas las ratas se sometieron a alimentación adaptativa durante 1 semana con agua libre y dieta durante el período.
1. Establecimiento del modelo de oclusión de la arteria cerebral media (MCAO)
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La evaluación de neuroscore confirma el éxito de MCAO, según Longa Score Scale, ratas en el grupo MCAO presentaron al menos círculos hacia la izquierda (neuroscore 2). Las ratas del grupo de operación simulada no mostraron una disfunción neurológica obvia (neuroscore 0). No se observó mortalidad durante el día de la cirugía. El neuroscore de los animales se enumera en la Tabla 1.
El análisis IEM del grupo MCAO reveló neuronas con núcleos encogidos y densidad de electrones cito.......
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El objetivo principal de la terapia de reperfusión en el accidente cerebrovascular isquémico agudo es restaurar la perfusión sanguínea a la región isquémica. Ahora podemos lograr este objetivo a través de la trombólisis intravenosa, el tratamiento endovascular y la terapia antitrombótica. Sin embargo, la restauración de la perfusión sanguínea conduce a una lesión por isquemia-reperfusión, agrava la necrosis neuronal y la apoptosis, lo que conduce a un deterioro neurológico. Durante la is.......
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Los autores no tienen nada que revelar.
Este trabajo fue apoyado por el Proyecto Especial de Investigación Científica sobre Medicina Tradicional China de la Administración Provincial de Medicina Tradicional China de Sichuan (2021MS414).
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Solución salina normal al 0,9% | Sichuan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd. | ||
| 200 rejillas de cobre recubiertas de malla | Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd. | BZ10262a | |
| 220-230g MCAO Monofilamentos | Beijing Cinontech Co., Ltd. | A4-243250 | |
| Etanol absoluto | Chengdu Kelong Química Co., Ltd. | ||
| acetona | Chengdu Kelong Química Co., Ltd. | ||
| Sistema de anestesia animal | Rayward Life Technology Co., Ltd. | R500 | |
| Rayward Life Technology Co., Ltd. | 69020 | ||
| Mesa para hornear | Shenzhen Bangqi Chuangyuan Technology Co., Ltd. | CT-946 | |
| Cizalla ósea | Herramientas de ciencia fina | 16102-11 | |
| moldes de incrustación capsular | Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd. | Centrífuga GP130-B | |
| SCILOGEX | D3024R | ||
| Microscopía óptica de campo claro convencional | Zeiss (Alemania) | Pinzas | |
| (10 cm) | Shanghai Medical Equipment Co., Ltd. | ||
| Cuchillo de diamante | Diatome (Suiza) | DU4530 | |
| Pinzas de disección | Rayward Life Technology Co., Ltd. | F12018-10 | |
| Pinzas de disección | Rayward Life Technology Co., Ltd. | F12010-10 | |
| Horno eléctrico de secado rápido | Shanghai YiHENG Scientific Instrument Co., Ltd. | DHG-9030A | |
| Afeitadora eléctrica | Yiwu Kemei Electric Appliances Co., Ltd. | KM-PG5002 | |
| Fluido de fijación | Sichuan Scientist Biotechnology CO., Ltd. | Diapositiva de vidrio SC0001 | |
| Nantong Mevid Life Science Co., Ltd. | |||
| Cabra conjugada con oro anti-conejo lgG | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | ||
| Pinzas hemostáticas (12,5 cm) | Anqisheng Biotechnological Co., Ltd. | PL068 | |
| Pinzas hemostáticas (14 cm) | Anqisheng Biotechnological Co., Ltd. | PL002 | |
| Isoflurano | Rayward Life Technology Co., Ltd. | ||
| L. R. Resina Blanca | Tianjin Tainuo Science and Technology Co., Ltd. | ||
| Citrato de plomo | SPI (EE. UU.) | GA10701 | |
| Portaagujas | Tecnología médica Jiachi Co., Ltd. | ||
| Tetróxido de osmio | TED PELLA (EE. UU.) | 4008-220501 | |
| PBS | Servicebio | G4202 | |
| Anticuerpo policlonal de conejo contra el citocromo | Affinity Biosciences, Ltd. | AF0146 | |
| Ratas | Beijing Huafukang Biotechnology Co., Ltd. | ||
| Kit de resina de incrustación SPI-Pon 812 | SPI (US) | GS02660 | |
| Microscopio estereoscópico | Sunny Optical Technology Co., Ltd. | Tijeras de cabeza recta Soptop SZMN | |
| (10 cm) | Anqisheng Biotechnological Co., Ltd. | PL063 | |
| Pinzas oftálmicas rectas (10 cm) | Shanghai Medical Equipment Co., Ltd. | ||
| Tijeras quirúrgicas | Rayward Life Technology Co., Ltd. | S14001-10 | |
| Microscopía electrónica de transmisión | Hitachi (Japón), Ltd. | HT7800 | |
| ultramicrotomo | Leica (Alemania) | UC7 | |
| Acetato de uranio | SPI (EE. UU. | )GS02624 |
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