Evaluación de la hiperemia reactiva postoclusiva en la piel de la pata de rata mediante imágenes de contraste de manchas con láser

Resumen

Este protocolo presenta un método para evaluar los parámetros de hiperemia reactiva postoclusiva en la piel de una rata anestesiada utilizando imágenes de contraste de manchas láser y medición invasiva de la presión arterial.

Resumen

La imagen de contraste de manchas láser (LSCI) es una técnica moderna y no invasiva para evaluar la perfusión microvascular en humanos y animales de laboratorio. La combinación de LSCI con medición invasiva de la presión arterial (PA) y una prueba de oclusión vascular permite el estudio de la hiperemia reactiva postoclusiva (PORH), proporcionando una evaluación de la reserva de flujo sanguíneo microvascular y la reactividad vascular. Este artículo demuestra la técnica de usar el LSCI para registrar y visualizar PORH en la pata trasera de una rata bajo anestesia general. Se infla un manguito neumático especial para crear una oclusión vascular temporal (180 s) a nivel de la tibia. La evaluación de la PORH posterior (hiperemia máxima e índices cinéticos) puede proporcionar información adicional sobre los mecanismos y la gravedad del proceso patológico en estudio (shock circulatorio, insuficiencia cardíaca, hipertensión, etc.) o identificar efectos vasculares de un nuevo fármaco que no son evidentes al evaluar la perfusión en reposo. La monitorización invasiva de la PA permite el cálculo de la conductancia vascular cutánea y la consideración de los cambios en la hemodinámica sistémica, lo que es particularmente importante en modelos experimentales de enfermedades críticas. También se demostrará el uso de este enfoque para identificar la disfunción microvascular en un modelo de rata de shock hemorrágico.

Introducción

La disfunción microvascular está involucrada en la patogénesis de muchas enfermedades cardiovasculares, endocrinas y otras, comprometiendo la perfusión y oxigenación de los tejidos, y alterando los mecanismos reguladores vasomotores de la hemodinámica sistémica (por ejemplo, en la hipertensión)¹. Los trastornos de la microcirculación también tienen una gran importancia fisiopatológica en los mecanismos de disfunción orgánica en pacientes críticos con traumatismos, sepsis y diversos tipos de shock (hemorrágico, séptico, cardiogénico, etc.)².

Actualmente, se uti....

Protocolo

Los procedimientos que se describen a continuación se realizaron como parte de un protocolo aprobado por la Junta de Revisión Ética del Centro Federal de Investigación y Clínica de Medicina de Cuidados Intensivos y Rehabilitación.

1. Preparación del manguito neumático para la oclusión vascular

1. Use un manguito neumático de un sistema de medición de presión arterial no invasivo (NIBP) para ratas para crear una oclusión vascular transitoria en la pata trasera de una rata.
2. Conecte el manguito al manómetro aneroide y a la bomba de goma de un tonómetro mecánico convencional para medir la presión arterial en humanos. Utilice ....

Resultados

El método descrito anteriormente para evaluar la función microvascular fue aplicado por nosotros en una serie de experimentos con modelos de shock hemorrágico (pérdida de sangre del 35% del volumen sanguíneo calculado) en ratas macho Wistar que pesaban 250-300 g. En el grupo de animales con hemorragia (HS, n = 13), la evaluación de los parámetros de PORH con monitoreo simultáneo de la PA invasiva se realizó 30 min después de la finalización de la hemorragia. En el grupo de control de anim.......

Discusión

Aquí describimos una tecnología modernizada para evaluar la microcirculación cutánea y la reactividad vascular en un experimento in vivo en roedores. Para un uso exitoso y estandarizado de este método en estudios fisiológicos y farmacológicos, se deben tener en cuenta varias consideraciones adicionales. En el protocolo anterior, las ratas son anestesiadas con una combinación de tiletamina + zolazepam + xilacina, que está dictada principalmente por los estándares locales para trabajar con.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Aguja atraumática con nailon de sutura quirúrgica, 4C-0,5x16-4/0-N	Medtekhnika, Rusia	N/A	Azul. Longitud 75 cm. USP 4/0 (MP1.5). Para suturar una herida quirúrgica
Catéter para arteria carótida de rata con aguja de jeringa roma 22 G	SciCat, Rusia	N/A	PE-50, longitud 12 cm, OD=0,9 mm, DI= 0,6 mm.Con un anillo de fijación
Transductor de presión desechable Deltran	Utah Medical Products, EE. UU.	6069	Cable de 12"
Llave de paso de 3 vías DiscofixC para terapia de infusión y monitorización	B. Braun, Alemania	16494C
Heparina	Belmedpreparaty, Bielorrusia	N/A	Heparina sódica 5000 UI/ml, ampollas 5 mL
Lidocaína	Velpharm, Rusia	N/A	Solución inyectable 20 mg/ml, ampollas 2 ml
Manguito neumático "Systole"	Neurobotics, Rusia	N/A	Parte de la medición no invasiva de la presión arterial para roedores. Tipo cola de 5-10 mm (ratas)
Cloruro de sodio	Pharmasyntez, Rusia	N/A	Solución para perfusión al 0,9%, 250 mL
Software LabChart8	ADInstruments, Australia	N/A	Versión 8.1.13
Software MATLAB	The MathWorks Inc., EE. UU.	N/A	Versión R2019b
Jeringa estéril de un solo uso, 1 ml, 3 partes	Ciudad de Huaian Hengchun Medical Product Co. Ltd., China	N/A	Aguja de 27 G
Jeringa estéril de un solo uso, 2 (2,5) ml, 3 partes	Vogt Medical Vertrieb GmbH, Alemania	1310524	Aguja de 23 G
Sutura SILK-S	Polytechmed, Rusia	N/A	No absorbible, trenzado, hecho de seda natural con un revestimiento de silicona, negro en cassette. USP 4/0 (MP1.5). Longitud 100 m. Para ligar vasos
Xyla	Interchemie, Países Bajos	N/A	Xilacina 20 mg/ml, 50 ml
Zoletil 100	Virbac, Francia	N/A	Tiletamina HCl 50 mg/ml, zolazepam HCl 50 mg/ml, 5 ml