Integración de la decocción de Yangjing Zhongyu en ciclos de FIV / ICSI-ET en pacientes con reserva ovárica disminuida

Resumen

Este estudio demuestra que la decocción de Yangjing Zhongyu mejora los resultados de la reproducción asistida en mujeres con reserva ovárica disminuida al mejorar la calidad de los ovocitos y embriones. En un modelo de rata de insuficiencia ovárica prematura, la decocción restauró el equilibrio hormonal, promovió el desarrollo de folículos y moduló la autofagia y el metabolismo de los lípidos.

Resumen

Se ha sugerido que la decocción de Yangjing Zhongyu (YZD), una fórmula herbal tradicional china, mejora la función ovárica y los resultados de fertilidad, pero la evidencia clínica estandarizada sigue siendo limitada. Este estudio evaluó los efectos de YZD en mujeres con reserva ovárica disminuida (DOR) sometidas a FIV / ICSI-ET, junto con la validación mecanicista en un modelo de rata de insuficiencia ovárica prematura (POF). En el ensayo clínico, los pacientes con DOR recibieron el protocolo estándar de antagonistas de la GnRH solo o en combinación con YZD. Las características basales entre los grupos fueron comparables, y el grupo YZD mostró un mayor número de ovocitos recuperados y embriones de alta calidad, así como mejores puntuaciones del síndrome de medicina tradicional china. Paralelamente, se indujo FOP en ratas, y los animales tratados con YZD exhibieron una mejor ciclicidad estral, restauración de los niveles séricos de estradiol, reducción de la hormona estimulante del folículo e histología ovárica más saludable. La microscopía electrónica reveló que YZD redujo la formación excesiva de autofagosomas y la acumulación de lípidos en las células ováricas, lo que sugiere la regulación del eje autofagia-metabolismo de los lípidos. En conjunto, estos hallazgos indican que YZD mejora la función de reserva ovárica, mejora el desarrollo embrionario y puede aumentar el potencial de embarazo en mujeres con DOR. Este protocolo estandarizado proporciona un marco reproducible para integrar YZD en los ciclos de tecnología de reproducción asistida, lo que respalda su potencial traslacional en medicina reproductiva clínica.

Introducción

La reserva ovárica disminuida (DOR) es una condición clínica que compromete la salud reproductiva femenina y se caracteriza por una reducción en el número o la calidad de los folículos ováricos¹. Clínicamente, se refleja en una disminución del recuento de folículos antrales, niveles reducidos de hormona antimülleriana (AMH) o concentraciones elevadas de hormona estimulante del folículo (FSH)². El DOR representa aproximadamente el 10% de los casos de infertilidad y representa una barrera importante para el éxito de la concepción³. En el contexto de la tecnología de reproducción asistida (TRA), la prevalencia de DOR se estima en 19%-26% en los Estados Unidos⁴, y se asocia con tasas de embarazo reducidas, mayor incidencia de preeclampsia y un mayor riesgo de aborto espontáneo recurrente⁵. A pesar de la disponibilidad de múltiples enfoques terapéuticos, mejorar los resultados del TAR en pacientes con DOR sigue siendo un desafío considerable, lo que subraya la necesidad de intervenciones novedosas y efectivas⁶.

La decocción de Yangjing Zhongyu (YZD), una formulación clásica de medicina tradicional china (MTC) con múltiples hierbas, se ha aplicado durante mucho tiempo en la práctica reproductiva⁷. Se cree que mejora el equilibrio endocrino y apoya la función ovárica, mejorando así los resultados en los ciclos de fertilización in vitro e inyección intracitoplasmática de espermatozoides-transferencia de embriones (FIV / ICSI-ET)⁸. Los datos clínicos preliminares sugieren que la YZD puede mejorar la respuesta ovárica, pero los estudios mecanicistas y traslacionales rigurosos aún son limitados. Las vías biológicas precisas a través de las cuales actúa YZD en pacientes con DOR siguen sin estar claras ^9,10. La literatura actual indica que los compuestos herbales chinos pueden influir en el microambiente ovárico a través de múltiples mecanismos, como la modulación de la expresión de AMH, la inhibición de las vías de señalización relacionadas con la atresia folicular, incluida PI3K / AKT / mTOR, y la reducción de la lesión por estrés oxidativo. Sin embargo, estas hipótesis mecanicistas son en gran medida indirectas y carecen de validación experimental.

Este estudio aborda estas brechas integrando la evaluación clínica con la verificación experimental. Específicamente, examinamos los efectos de YZD en mujeres con DOR sometidas a TAR e investigamos sus fundamentos mecanicistas utilizando un modelo de rata DOR inducido por glucósidos de tripterigio. En los experimentos con animales, monitoreamos marcadores endocrinos (estradiol y FSH), recuentos de folículos antrales, formación de autofagosomas y acumulación de lípidos en el tejido ovárico. Al combinar los resultados clínicos con datos mecanicistas experimentales, este trabajo proporciona un protocolo estandarizado para incorporar YZD en ciclos de FIV / ICSI-ET y ofrece evidencia novedosa que respalda su potencial como terapia complementaria para mejorar la reserva ovárica y los resultados reproductivos en pacientes con DOR. La novedad de este estudio radica en su enfoque dual, que vincula la aplicación clínica estandarizada con conocimientos mecanicistas, que avanza tanto en la traducción clínica como en la comprensión teórica de YZD en medicina reproductiva.

Protocolo

Todos los procedimientos clínicos se llevaron a cabo de acuerdo con la Declaración de Helsinki y fueron aprobados por el Comité de Ética del Hospital Shanghai Changhai (Aprobación No. CHEC2022-156). Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de todos los participantes. Los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité de Ética de la Facultad de Medicina de Changhai (Aprobación No. CHEC2022-156) y cumplió con los estándares nacionales de cuidado de animales de laboratorio.

Características clínicas

Reclutamiento y agrupación de pacientes
De agosto de 2022 a marzo de 2023, 78 pacientes con infertilidad diagnosticados con síndrome de deficiencia de yin^{renal 10} y que buscaban TRA fueron reclutados del Centro de Medicina Reproductiva del Primer Hospital Afiliado de la Universidad Médica Naval y del departamento ambulatorio del Hospital Yueyang, Universidad de Medicina Tradicional China de Shanghai. Los participantes fueron asignados aleatoriamente a un grupo de control o a un grupo de tratamiento (39 casos cada uno) mediante la generación de números aleatorios SPSS 23.0.

Criterios diagnósticos
El diagnóstico médico occidental siguió la opinión del Comité de 2020 de la Sociedad Estadounidense de Medicina Reproductiva (ASRM) sobre los indicadores de reserva ovárica¹¹. Los criterios incluyeron FSH ≥ 10 UI/L, estradiol ≥ 80 pg/mL, Recuento de folículos antrales (AFC) < 7 y AMH < 0,5-1,1 ng/mL. El síndrome de deficiencia de yin renal se diagnosticó de acuerdo con la ginecología de la medicina tradicional china¹² y los criterios de eficacia diagnóstica de los síndromes de MTC¹³.

Criterios de inclusión y exclusión
Los criterios de inclusión fueron la FIV/ICSI-ET planificada utilizando un protocolo antagonista; antecedentes de mala respuesta ovárica (< 5 ovocitos recuperados); edad 20-40 años; cumplir con los criterios de DOR y síndrome de MTC; y consentimiento informado firmado. Los criterios de exclusión incluyeron patología endometrial (pólipos, tuberculosis, displasia, cáncer), malformación uterina, comorbilidades (diabetes, lupus), terapia hormonal reciente (< 3 meses), antecedentes de cirugía pélvica, anomalías cromosómicas o alergia a medicamentos. Se aplicaron criterios de eliminación para la desviación del protocolo, los eventos adversos, el retiro o la concepción espontánea dentro de las 2 semanas posteriores a la inscripción.

Método de medicación
Ambos grupos se sometieron a una evaluación inicial en el día menstrual 2-3 mediante ecografía transvaginal y pruebas hormonales. El grupo control recibió el régimen antagonista: FSH recombinante o gonadotropina menopáusica humana, dosis inicial de 225 UI/día por vía intramuscular durante 5 días, seguida de un ajuste de dosis basado en el crecimiento del folículo. Cuando el diámetro del folículo principal superó los 12 mm, se inició el antagonista de la GnRH (0,125 mg/día subcutáneo) y se continuó hasta el desencadenante. Cuando ≥ 1 folículo alcanzó los 18 mm, el ≥ 2 alcanzó los 17 mm, o el ≥ 3 alcanzó los 16 mm, la ovulación se desencadenó con 250 μg de hCG recombinante, seguida de la recuperación de ovocitos después de 34-36 h.

El grupo de tratamiento siguió el mismo protocolo con la adición de la decocción de Yangjing Zhongyu (YZD), administrada por vía oral 2 veces al día (mañana y noche), una decocción por día, comenzando desde los días 2-3 del ciclo menstrual hasta el día del desencadenante. La fórmula clínica contenía Rehmannia 12 g, Paeonia lactiflora 12 g, Cornus officinalis 10 g y Angelica sinensis 12 g.

Indicadores de observación
Los resultados clínicos incluyeron parámetros basales de edad, IMC (calculado como peso (kg)/altura² (m²)), duración de la infertilidad, FSH, dosis/duración de gonadotropina, puntuaciones del síndrome de deficiencia de yin renal, número de folículos antrales (evaluados por ecografía transvaginal, 2-9 mm de diámetro), ovocitos recuperados, ovocitos de metafase II (MII) (identificados en la extracción de ovocitos), embriones fertilizados, escisiones, embriones de alta calidad (definidos por criterios estándar de laboratorio de embriología), y tasa de embarazo clínico, que se definió como la presencia de un saco gestacional en la ecografía a las 6-7 semanas de gestación.

Animales de experimentación
Aquí, 30 ratas Sprague-Dawley hembras de grado SPF (8 semanas de edad, 160-200 g) se aclimataron en condiciones controladas (23 ± 2 °C, 40%-45% de humedad, ciclo de luz/oscuridad de 12 h) con comida y agua ad libitum .

Preparación de medicamentos
YZD se preparó con Rehmannia 30 g, Angélica 15 g, Paeonia lactiflora 15 g y Cornus officinalis 15 g. Las hierbas se decocearon en agua, se filtraron a través de un filtro de malla 200 y se concentraron a presión reducida a 70 °C. Las soluciones finales para dosis bajas, medias y altas fueron 0,34 g/mL, 0,68 g/mL y 1,35 g/mL, correspondientes a 0,5x, 1,0x y 1,2x de la dosis clínica de YZD. Las decocciones se almacenaron a 4 °C.

Modelado y agrupación
Se indujo un modelo de DOR mediante inyección intraperitoneal de glucósidos de tripterigio (40 mg/kg diarios durante 15 días). Las ratas se asignaron aleatoriamente a los grupos de tratamiento en blanco (n = 6), modelo (n = 6) y YZD (dosis bajas, medias y altas; n = 6 cada uno). La administración por sonda (10 mL/kg de peso corporal) se realizó 1 vez al día, a partir del primer día de inyección de glucósidos de tripterigio continuada durante 15 días.

Citología vaginal
Las etapas del ciclo estral se evaluaron mediante citología exfoliativa vaginal. Los frotis vaginales se recolectaron una vez al día (08:00-10:00) con hisopos de algodón estériles, diluidos en 30 μL de solución salina y examinados bajo un microscopio óptico con un aumento de 100x. El período de observación duró 15 días consecutivos. El índice de ciclo estral normal se definió como la proporción de ratas que exhibieron ciclos estrales regulares de 4-5 días durante este período.

Ensayos hormonales
La sangre total se recolectó bajo anestesia mediante punción cardíaca al final del período de tratamiento de 15 días, se dejó coagular a temperatura ambiente durante 30 min y se centrifugó a 1000 x g durante 15 min a 4 °C para obtener suero. Los niveles de E2 y FSH se midieron mediante ELISA de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Histología ovárica
El tejido ovárico se recolectó inmediatamente después de la eutanasia mediante extirpación quirúrgica de ambos ovarios, se enjuagó con solución salina fría para extraer sangre y luego se fijó en paraformaldehído al 4% a 4 ° C durante 24-48 h. Los tejidos se deshidrataron en etanol graduado, se aclararon en xileno, se incrustaron en parafina y se seccionaron a 4-5 μm. Las secciones se tiñeron con hematoxilina y eosina, se deshidrataron, se aclararon y se montaron.

Análisis estadístico
Los datos se analizaron mediante SPSS 26.0. Las variables normales se expresaron como media ± DE y se compararon mediante la prueba t; variables no normales como mediana (RIC) y comparadas por la prueba U de Mann-Whitney. Las variables categóricas se expresaron como % y se compararon mediante la prueba de chi-cuadrado. p < 0,05 se consideró estadísticamente significativo. Para mantener la coherencia, se aplicaron los mismos métodos estadísticos a los análisis de figuras (no hay una descripción separada de la prueba t de Student).

Seguridad y eliminación de residuos
Los glucósidos de paraformaldehído, xileno y tripterigio se manipularon en campanas extractoras certificadas con guantes, gafas y batas de laboratorio; los derrames y los desechables contaminados se recolectaron en contenedores de desechos peligrosos etiquetados y se eliminaron según el POE de bioseguridad institucional. Todos los procedimientos que involucran glucósidos de paraformaldehído, xileno y tripterigilo se realizaron en campanas extractoras con equipo de protección personal adecuado (guantes, batas de laboratorio, gafas). Los desechos químicos y los cadáveres de animales se eliminaron de acuerdo con las pautas institucionales de bioseguridad.

Resultados

Características clínicas

Durante el estudio, 3 pacientes del grupo de control se retiraron debido a la infección por COVID-19 y 1 fue excluido debido a una función hepática anormal, dejando 35 pacientes. En el grupo de tratamiento, 4 se retiraron debido a COVID-19 y 35 pacientes completaron el estudio. Así, se incluyeron un total de 70 sujetos en el análisis final. No hubo difer...

Discusión

En este estudio, investigamos el papel potencial de la decocción de Yangjing Zhongyu (YZD) como terapia complementaria para la disminución de la reserva ovárica (DOR) en la tecnología de reproducción asistida (TRA). Los hallazgos clínicos demostraron que las pacientes que recibieron YZD además del protocolo de antagonistas estándar lograron un número significativamente mayor de ovocitos recuperados y embriones de alta calidad. Aunque las tasas de embarazo no difirieron significativamente...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Centrífuga	Separación sérica (1000 x g, 15 min, 4 °C; C)	Eppendorf 5810R	5811 000.012
Hisopos de algodón (estériles)	Recogida de muestras de citología vaginal	Suministros médicos Kangjian de Jiangsu	KJ-MW-01
Kit ELISA para E2	Cuantificación de estradiol sérico (rata)	Elabscience Biotechnology Inc.	E-EL-0152
Kit ELISA para FSH	Cuantificación de FSH en suero (rat)	Elabscience Biotechnology Inc.	E-EL-R0391
Etanol (70– 100%)	Deshidratación graduada para histoología	Sinopharm Chemical Reagent Co., China	100092683
Diapositivas y diapositivas de vidrio Cubiertas	Montaje de muestra	Citotest Scientific, China	7101/1812
Hematoxilina y Eosina	Solución de tinción para histología	Beyotime Biotechnology, China	C0105S
Microscopio óptico	Observación en histología y citología	Olympus (genérico, sin marca registrada)	CX23
Parafina	Medio de incrustación	Leica Biosystems	39601095
Paraformaldehído (4%)	Fijador para la preparación de tejidos	Sigma-Aldrich	P6148
Solución salina (0,9%)	Preparación de la citología vaginal	Sinopharm Chemical Reagent Co., China	10019318
Sprague y dash; Ratas de Dawley	Animales experimentales (hembras, 8 semanas, 160 y ndash; 200 g)	Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Tech Co., Ltd.	SCXK(Pekín)2024-0011
SPSS Software	Análisis estadístico (ver. 26.0)	IBM Corp.	RRID:SCR_002865
Microscopio Electrónico de Transmisión	Observación ultraestructural	JEOL Ltd.	JEM-1400Plus
Glucósidos tripterigios	Inducción del modelo de rata DOR	Proveedor genérico (sin marca registrada)	TG-001
Xileno	Reactivo de limpieza para histología	Sinopharm Chemical Reagent Co., China	10023418