Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.

Artículo de método

Los Tregs CD8+CD103+ atenuan la enfermedad del ojo seco mediante la supresión de la inflamación mediada por células T CD4+ y la protección de la integridad de la superficie ocular en ratones

319 vistas

⸱

DOI:

10.3791/69110

⸱

21 de noviembre de 2025

 , 
1Department of Ophthalmology, Jinan Second People's Hospital

En este artículo

Resumen

Aquí presentamos un protocolo que demuestra la transferencia adoptiva de células T reguladoras CD8+CD103+ como intervención inmunoterapéutica para mejorar la enfermedad ocular seca inducida por estrés y desecante mediante la modulación integral de las respuestas patogénicas de células T CD4+.

Resumen

CD8+CD103+ las células T reguladoras representan una población inmunosupresora especializada con potencial terapéutico demostrado en trastornos autoinmunes; sin embargo, su papel en la inflamación de la superficie ocular sigue sin explorar. Este protocolo describe un enfoque sistemático para aislar células T CD8+CD103+ de ratones expuestos a estrés desecante y evaluar su eficacia terapéutica mediante transferencia adoptiva en la enfermedad experimental del ojo seco. La metodología abarca la clasificación celular activada magnéticamente para la purificación de células T CD8+CD103+, inducción estandarizada de estrés desecante y evaluaciones funcionales integrales, incluyendo la medición de la producción de lágrimas, pruebas de permeabilidad de la barrera corneal y análisis molecular de mediadores inflamatorios. Los resultados representativos demuestran que la terapia con células T CD8+CD103+ restauró significativamente la producción de lágrimas, preservó las poblaciones de células conjuntivales y mantuvo la integridad de la barrera epitelial corneal. El tratamiento logró una supresión sustancial de la expresión de metaloproteinasas de la matriz, redujo la muerte celular apoptótica y moduló los perfiles de citoquinas de patrones proinflamatorios a protectores tisulares. El protocolo redujo eficazmente la infiltración de células T CD4+ en los tejidos oculares, mientras que simultáneamente suprimía la producción patógena de IL-17A e IFN-γ y mejoraba los niveles protectores de IL-13. Este enfoque proporciona un marco experimental robusto para investigar la inmunomodulación mediada por células T CD8+CD103+ en trastornos de la superficie ocular y establece una metodología fundamental para desarrollar nuevas terapias celulares para el manejo de la enfermedad ocular seca.

Introducción

La enfermedad ocular seca (DED) representa un trastorno de la superficie ocular prevalente y debilitante que se ha convertido en una preocupación significativa de salud global, afectando al 10-30% de la población mundial y comprometiendo sustancialmente la calidad de vida, la productividad laboral y el bienestar psicológico delos pacientes 1,2,3. La fisiopatología de la DED implica una compleja interacción entre la inestabilidad de la película lagrimal, la inflamación de la superficie ocular y las anomalías neurosensoriales, que en conjunto perpetúan un círculo vicioso de daño tisular y deteriorofuncional 4. A nivel molecular, la hiperosmolaridad lagrimalial actúa como un mecanismo patógeno central, desencadenando eventos inflamatorios en cascada que activan las vías de respuesta al estrés, inducen la liberación de mediadores proinflamatorios y, en última instancia, comprometen el delicado equilibrio homeostático del microambiente de la superficieocular 5,6,7.

El panorama inmunológico de la ED está dominado por respuestas inmunitarias adaptativas, con la inmunidad mediada por células T CD4+ desempeñando un papel fundamental en la orquestación del deterioro de la superficie ocular y la perpetuación de la inflamacióncrónica 8. Las células T CD8+ constituyen un componente esencial de la población normal de células inmunitarias homeostáticas dentro de los tejidos oculares, manteniendo la vigilancia inmunitaria y la integridad tisular bajo condiciones fisiológicas. Investigaciones fundamentales han demostrado que el estrés desecante (DS) activa células presentadoras de antígenos y, posteriormente, prepara a las células T CD4+ hacia fenotipos patógenos, que pueden inducir de forma autónoma la queratoconjuntivitis lacrimal seca (KCS) autoinmune cuando se transfieren adoptivamente a ratones desnudos deficientes en células T, recapitulando así las características clave de la DEDhumana 10,11.

Dado el papel central de las respuestas desreguladas de las células T CD4+ en la patogénesis de la DED, las estrategias terapéuticas dirigidas a la modulación de la inmunidad patogénica de las células T han surgido como enfoques prometedores para el manejo de esta enfermedad. En este contexto, las células T reguladoras CD8+ (Treg), en particular el subconjunto CD8+CD103+, han recibido una atención significativa debido a sus potentes capacidades inmunosupresoras y funciones protectoras tisulares en diversas condiciones autoinmunes e inflamatorias. Estas poblaciones reguladoras especializadas modulan las respuestas inmunitarias mediante múltiples mecanismos, incluyendo la supresión mediada por citocinas, la inhibición del contacto celular directo y la regulación metabólica de la función de los linfocitosefectores 12,13,14. La integrina αEβ7 (CD103) actúa como un receptor crítico de homing que facilita la posición de los linfocitos intraepiteliales en los tejidos mucosos, permitiendo que los Tregs CD8+CD103+ ejerzan efectos inmunoregulatorios localizados en los sitios deinflamación 15.

Cada vez hay más evidencia de que los Tregs CD8+CD103+ tienen un potencial terapéutico significativo para mitigar reacciones inmunitarias perjudiciales en una variedad de condiciones mucosasautoinmunes 16,17,18. Estas células presentan patrones de tráfico únicos que permiten su acumulación preferencial en los sitios mucosos, donde pueden contrarrestar eficazmente las respuestas inmunitarias destructivas de los tejidos mientras promueven la curación y la homeostasis. Investigaciones recientes han comenzado a esclarecer el papel de las células T CD8+CD103+ en la inmunidad de la superficie ocular, demostrando su expansión numérica en los ganglios linfáticos cervicales tras la exposición al SD y su capacidad para migrar a los tejidosconjuntivales 19,20,21,22. Sin embargo, a pesar de estas observaciones intrigantes, las contribuciones funcionales específicas de los linfocitos T CD8+CD103+ a la patogénesis del ojo seco y su potencial terapéutico para modular el daño superficial ocular mediado por células T CD4+ siguen siendo incompletamente comprendidos.

La transferencia adoptiva de Tregs CD8+CD103+ representa un avance claro respecto a los enfoques terapéuticos convencionales de DED, incluyendo desgarros artificiales, agentes antiinflamatorios e fármacos inmunosupresores, al atacar los mecanismos inmunitarios patógenos subyacentes en lugar de limitarse a abordar manifestacionessintomáticas 23. A diferencia de las terapias inmunosupresoras sistémicas que suprimen ampliamente la función inmunitaria, la intervención basada en Treg CD8+CD103+ ofrece una modulación dirigida de las respuestas patogénicas de células T CD4+ mientras preserva la inmunidadprotectora 24. Este enfoque complementa terapias celulares existentes, como las aplicaciones con células madre mesenquimales y la transferencia de Treg CD4+CD25+, proporcionando una mayor especificidad del tejido mucoso mediante mecanismos de homing mediadospor CD103 25.

La brecha crítica de conocimiento sobre los mecanismos regulatorios por los cuales las células T CD8+CD103+ pueden influir en la patogénesis del ojo seco representa una barrera significativa para desarrollar intervenciones inmunoterapéuticas dirigidas para esta condición debilitante. Además, la compleja interacción entre las poblaciones de células T reguladoras y efectoras en la inflamación de la superficie ocular requiere una investigación sistemática para identificar nuevos objetivos terapéuticos y optimizar estrategias de tratamiento. Este estudio tiene como objetivo caracterizar de forma exhaustiva la regulación mediada por células T CD8+CD103+ de procesos patógenos impulsados por células T CD4+ en un modelo murino bien establecido de enfermedad ocular seca. La innovación metodológica central implica el aislamiento secuencial de células reguladoras CD8+CD103+, seguido de la transferencia adoptiva y la evaluación exhaustiva de lecturas funcionales, histológicas y moleculares para establecer la eficacia terapéutica y esclarecer los mecanismos subyacentes. El objetivo final era mejorar nuestra comprensión de las respuestas inmunitarias en la superficie ocular y descubrir posibles estrategias de tratamiento para el manejo de la ED en humanos.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Protocolo

Todos los procedimientos experimentales con animales se llevaron a cabo en estricta conformidad con la Declaración ARVO sobre el Uso de Animales en la Investigación Oftalmológica y de la Visión y fueron aprobados por el Comité de Ética Experimental de Animales del Segundo Hospital Popular de Jinan. Se hicieron todos los esfuerzos para minimizar el sufrimiento animal y reducir el número de animales utilizados de acuerdo con el principio de las 3R (Reemplazo, Reducción y Refinamiento).

1. Preparación animal y diseño experimental

  1. Obtener ratones hembras C57BL/6 de entre 6 y 8 semanas en una instalación aprobada para animales de laboratorio (código de cepa: 027) con un estado de salud libre de patógenos específico.
  2. Animales domésticos en un entorno controlado, manteniendo ciclos de luz y oscuridad de 12 horas (luces encendidas de 06:00 a 18:00), temperatura de 22 ± 2 °C y humedad relativa del 50-60% mediante sistemas de monitorización ambiental.
  3. Permitir que los animales se aclimaten durante una semana antes de los procedimientos experimentales, proporcionando comida y agua de laboratorio estándar ad libitum.
  4. Aleatorizar 32 ratones en cuatro grupos experimentales (n = 8 por grupo) mediante aleatorización generada por ordenador: controles no estresados (NS), estrés desecante solo (DS), estrés desecante con control vehicular (DS + VC) y estrés desecante con tratamiento de células T CD8+CD103+ (DS + CD8+CD103+).
    NOTA: Vigila a los animales diariamente en busca de signos de malestar, como reducción de actividad o pérdida de peso superior al 10%.

2. Inducción de esfuerzos desecantes

  1. Preparar la solución de escopolamina hidrobromuro disolviendo 0,5 mg en 0,2 mL de solución fisiológica estéril tamponada con fosfato (PBS) inmediatamente antes de su uso, logrando una concentración final de 2,5 mg/mL.
  2. Administrar escopolamina por vía subcutánea a una dosis de 0,5 mg/kg de peso corporal (aproximadamente 0,04 mL por ratón de 20 g) cuatro veces al día a las 8:00, 12:00, 15:00 y 18:00 h durante cinco días consecutivos utilizando agujas de 27 G.
  3. Colocar ventiladores de velocidad variable para generar una corriente de aire continua con una velocidad estandarizada de 15 m/s medida a nivel de jaula mediante calibración de anemómetro digital.
  4. Mantener la humedad ambiente por debajo del 40% utilizando cámaras desecantes que contienen gel de sílice activada (malla grado 40, 6-12) mientras monitoriza continuamente las condiciones ambientales con higrómetros digitales (precisión ±2% HR).
  5. Mantener la temperatura en 22 ± 1 °C durante todo el periodo de exposición utilizando sistemas de control ambiental de precisión con monitorización continua.
  6. Vigila a los animales dos veces al día en busca de signos de deshidratación, pérdida de peso (>15% justifica exclusión) o conductas de estrés, incluyendo acicalado excesivo o menor actividad.

3. Aislamiento y purificación de células T CD8+CD103+

  1. Sacrificar ratones donantes previamente expuestos a estrés desecante mediante asfixia con CO₂, seguida de luxación cervical, según protocolos aprobados de eutanasia.
  2. Cosechar bazos y ganglios linfáticos cervicales superficiales en condiciones estériles utilizando instrumentos estériles en un armario de seguridad biológica, colocando tejidos en medio RPMI-1640 bien frío y suplementado con suero bovino fetal al 10%.
  3. Preparar suspensiones unicelulares alterando mecánicamente los tejidos mediante coladores de células de 70 μm usando émbolos de jeringuilla estériles, lavando las células dos veces con PBS que contenga un 2% de FBS y 1 mM de ácido etilendediaminetetraacético (EDTA).
  4. Aislar las células T CD8+ usando clasificación celular activada magnéticamente con microperlas magnéticas conjugadas con anticuerpos anti-CD8 según las instrucciones del fabricante.
  5. Evaluar la viabilidad celular utilizando el ensayo de exclusión de tripán azul (solución al 0,4%), contando células viables y no viables mediante un contador celular automatizado, procediendo solo con preparaciones que superen el 95% de viabilidad.
  6. Enriquecer para la expresión de CD103+ mediante incubación secuencial con anticuerpo anti-CD103-APC a 1:100 de dilución durante 30 minutos a 4 °C en la oscuridad.
  7. Realizar separación magnética secundaria utilizando microperlas anti-aloficocianina (anti-APC) con columnas LS para obtener células CD8+CD103+ doblemente positivas siguiendo los protocolos del fabricante.
  8. Validar la pureza celular mediante citometría de flujo teñiendo las alicuotas con anticuerpos anti-CD8-FITC y anti-CD103-APC, asegurando una población de>90% CD8+CD103+ células doblemente positivas antes de continuar.

4. Protocolo de transferencia adoptiva

  1. Preparar suspensiones de células T CD8+CD103+ a una concentración de 5 × 106 células/mL en solución salina estéril tamponada con fosfato, centrifugando las células a 300 × g durante 5 minutos y resuspendiéndolas en un volumen adecuado.
  2. Inyectar 1 × 106 células en 200 μL de PBS estéril intraperitonealmente en los días -2, 0 y +2 en relación con el inicio del estrés desecante, asegurando una mezcla suave antes de cada inyección.
  3. Administrar volúmenes equivalentes de PBS estéril a los grupos de control del vehículo utilizando un esquema y técnica de inyección idénticos para mantener la consistencia experimental.
  4. Mantener las preparaciones celulares sobre hielo y completar las transferencias en un plazo de 2 horas tras el aislamiento para preservar la viabilidad y función óptimas.
  5. Rotar los puntos de inyección entre la parte inferior izquierda y derecha del abdomen para minimizar la inflamación local y monitorizar a los animales durante 24 horas después de la inyección para detectar reacciones adversas.

5. Procedimiento de evaluación funcional

  1. Medición de la producción de lágrimas
    1. Realiza mediciones de forma constante a las 20:00 para tener en cuenta las variaciones circadianas en la producción de lágrimas.
    2. Sujeta suavemente al ratón usando dispositivos de sujeción adecuados sin anestesia para evitar interferencias con los mecanismos naturales de producción de lágrimas.
    3. Coloca hilo de algodón impregnado de rojo con fenol en el fórnix conjuntival inferior durante exactamente 15 segundos usando pinzas de punta fina.
    4. Mide inmediatamente la longitud de la rosca mojada usando calibradores digitales de precisión (precisión ± 0,01 mm) bajo condiciones de iluminación fluorescente estandarizada.
  2. Evaluación de la función de barreracorneal 26
    1. Anestesiar brevemente al ratón con inhalación de isoflurano al 2% durante la aplicación del trazador para asegurar una instillación precisa.
    2. Inyecte 0,5 μL de solución de 50 mg/mL de verde dextrano de Oregon sobre la superficie corneal central utilizando una micropipeta de precisión con puntas de desplazamiento positivo.
    3. Enjuaga las córneas a fondo con solución fisiológica estéril cinco veces tras 1 minuto de incubación para eliminar el exceso de trazadores, asegurando la eliminación completa de la fluorescencia superficial.
    4. Fotografía las córneas inmediatamente usando microscopía de fluorescencia con un conjunto de filtros de isotiocianato de fluoresceína (FITC) (excitación 490 nm, emisión 525 nm) y parámetros de exposición estandarizados.
    5. Cuantifiquen la intensidad de fluorescencia usando el software ImageJ con protocolos consistentes de selección de regiones de interés y resta de fondo.
      1. Convierta imágenes a escala de grises de 8 bits, defina una región circular de interés (ROI) estandarizada que cubra el diámetro central de 3 mm de la córnea.
      2. Mide el valor gris medio, resta la fluorescencia de fondo medida de una región no corneal adyacente y expresa los resultados como fluorescencia total corregida (CTF) calculada como: CTF = Densidad Integrada - (Área de ROI × Fluorescencia media de fondo)22.

6. Procesamiento y análisis histológico

  1. Retirar los ojos y las estructuras circundantes inmediatamente después de la eutanasia, luego fijar paraformaldehído al 4% durante 24 horas o inmerser en un compuesto a temperatura óptima de corte (OCT) para secciones congeladas, asegurando la orientación adecuada para la sección sagital.
  2. Prepara secciones sagitales seriadas (6 μm para congeladas, 5 μm para parafina) utilizando puntos anatómicos estandarizados (nervio óptico como punto de referencia) para planos de sección consistentes en todos los especímenes.
  3. Realizar tinción periódica de ácido Schiff (PAS) para la cuantificación de células caliciz utilizando protocolos estandarizados con controles positivos y negativos apropiados.
  4. Realizar tinción por inmunofluorescencia usando anticuerpos primarios: anti-MMP-3 (1:200), anti-MMP-9 (1:100), caspasa-3 antiactivada (1:300), caspasa-8 antiactivada (1:200) y anti-CD4 (1:100) con incubación nocturna a 4 °C.
  5. Cuantificar las células de cáliz por milímetro de longitud conjuntival utilizando métodos de muestreo sistemático, contando celdas en cinco campos de alta potencia no solapados por sección y promediando los resultados.

7. Análisis molecular

  1. Extraer ARN total de tejidos conjuntivales y corneales agrupados utilizando protocolos de extracciónvalidados 27.
  2. síntesis de ADNcDNA y PCR cuantitativa en tiemporeal 28
    1. Preparar mezclas de reacción de transcripción inversa que contengan 1 μg de ARN total, cebadores oligo-dT (50 μM), cebadores hexaméricos aleatorios (100 μM), enzima transcriptasa inversa, tampón de reacción y agua libre de nucleasa en un volumen final de 20 μL.
    2. Incubar mezclas de reacción en un termociclador a 37 °C durante 15 minutos para permitir la síntesis de ADNc de primera hebra.
    3. Inactiva la enzima transcriptasa inversa calentando a 85 °C durante 5 segundos, luego enfría a 4 °C y almacena el ADNc a -20 °C hasta su uso.
    4. Sintetizó ADN 1:10 diluido con agua libre de nucleasas para usarla como plantilla en reacciones PCR posteriores.
    5. Preparar mezclas de reacción PCR en tiempo real (volumen final de 20 μL) que contengan 1 μL de plantilla de ADNc diluido, cebadores directos y inversos (concentración final de 0,2 μM cada uno), mezcla maestra SYBR Green y agua libre de nucleasa.
    6. Las muestras se cargan en triplicado en placas de reacción ópticas de 96 pozos, incluyendo controles sin plantilla para cada par de cebadores.
    7. Programar el ciclador térmico con las siguientes condiciones: desnaturalización inicial a 95 °C durante 10 minutos, seguida de 40 ciclos de desnaturalización (95 °C durante 15 s), recocido (60 °C durante 30 s) y extensión (72 °C durante 30 s).
    8. Incluye una etapa de curva de disociación inmediatamente después de la amplificación: 95 °C durante 15 s, 60 °C durante 1 minuto, luego aumento gradual de temperatura a 95 °C a una tasa de 0,3 °C/s para verificar la amplificación de producto único.
    9. Analizar las curvas de amplificación y los valores del umbral de ciclo (Ct) utilizando software de instrumento, asegurando una eficiencia de amplificación entre el 90 y el 110% para todos los pares de cebadores.
    10. Normalizar la expresión génica objetivo (IL-17A, IFN-γ, IL-13, MMP-3 y MMP-9) al gen doméstico GAPDH usando el método 2-ΔΔCt .
    11. Utiliza secuencias cebadoras según lo especificado en la Tabla 1 para todos los genes objetivo y de referencia.
  3. Cuantifique los niveles de proteínas citocinas en extractos de tejido utilizando kits ELISA disponibles comercialmente con curvas estándar y controles de calidad apropiados.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Resultados

La implementación exitosa de este protocolo permite una mejora integral de la patología de la superficie ocular inducida por estrés desecante mediante inmunomodulación mediada por células T CD8+CD103+. Los resultados positivos demuestran una restauración significativa de la producción de lágrimas, logrando típicamente una recuperación del 60-80% en comparación con los controles sin estrés, mientras que los animales tratados con vehículos presentan déficit...

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Discusión

Esta investigación establece que las células T reguladoras CD8+CD103+ son potentes agentes terapéuticos que desecan la enfermedad ocular seca inducida por estrés mediante la modulación integral de respuestas patógenas mediadas por células T CD4+. Los hallazgos revelan que la transferencia adoptiva de células T CD8+CD103+ logra una protección multifacética de la integridad de la superficie ocular, abarcando la restauración funcional de la producción de lágrimas, la preservación de la arqu...

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Divulgaciones

Los autores declaran que no tienen intereses en competencia, ni financieros ni de otro tipo, que puedan influir inapropiadamente en la obra descrita en este manuscrito.

Agradecimientos

Agradecemos el apoyo técnico proporcionado por el personal de laboratorio del Hospital Popular Jinan 2 y por el personal de las instalaciones de cuidado animal que mantuvieron condiciones óptimas de alojamiento durante todo el periodo experimental.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Anticuerpo anti-CD103-APCBioleyendaClon 2E7Citometría de flujo y clasificación celular
Microperlas magnéticas anti-CD8Miltenyi Biotec-Separación de celdas magnéticas
Dextrano verde de Oregón cornealInvitrogenD7172Peso molecular 70.000
Kit ELISA IFN-& gamma;eBiocienciaBMS606Cuantificación de citocinas
ELISA kit IL-13eBiocienciaBMS6015Cuantificación de citocinas
ELISA kit IL-17AeBiocienciaBMS6001Cuantificación de citocinas
ImageJInstitutos Nacionales de SaludVersión 1.53k
Hilos de algodón rojo fenolZona rápida, Yokota-Medición de la producción de lágrimas
Escopolamina hidrobromuroMelonepharmaMB5860Antagonista muscarínico

Referencias

  1. Tang, Q., et al. Selective decrease of donor-reactive T(regs) after liver transplantation limits T(reg) therapy for promoting allograft tolerance in humans. Sci Transl Med. 14 (669), eabo2628(2022).
  2. Harrell, C. R., Feulner, L., Djonov, V., Pavlovic, D., Volarevic, V. The molecular mechanisms responsible for tear hyperosmolarity-induced pathological changes in the eyes of dry eye disease patients. Cells. 12 (23), 2755(2023).
  3. Britten-Jones, A. C., et al. Epidemiology and risk factors of dry eye disease: considerations for clinical management. Medicina (Kaunas). 60 (9), 1458(2024).
  4. Bhujbal, S., Rupenthal, I. D., Steven, P., Agarwal, P. Inflammation in dry eye disease-pathogenesis, preclinical animal models, and treatments. J Ocul Pharmacol Ther. 40 (10), 638-658 (2024).
  5. Nieto-Aristizabal, I., Mera, J. J., Giraldo, J. D., Lopez-Arevalo, H., Tobon, G. J. From ocular immune privilege to primary autoimmune diseases of the eye. Autoimmun Rev. 21 (8), 103122(2022).
  6. Sheppard, J., Shen Lee, B., Periman, L. M. Dry eye disease: identification and therapeutic strategies for primary care clinicians and clinical specialists. Ann Med. 55 (1), 241-252 (2023).
  7. Rolando, M., Merayo-Lloves, J. Management strategies for evaporative dry eye disease and future perspective. Curr Eye Res. 47 (6), 813-823 (2022).
  8. Vereertbrugghen, A., et al. CD4+ T cells drive corneal nerve damage but not epitheliopathy in an acute aqueous-deficient dry eye model. Proc Natl Acad Sci U S A. 121 (48), e2407648121(2024).
  9. Yaman, E., et al. Mouse corneal immune cell heterogeneity revealed by single-cell RNA sequencing. Invest Ophthalmol Vis Sci. 65 (12), 29(2024).
  10. Niederkorn, J. Y., et al. Desiccating stress induces T cell-mediated Sjogren's syndrome-like lacrimal keratoconjunctivitis. J Immunol. 176 (7), 3950-3957 (2006).
  11. Ogawa, Y., Takeuchi, T., Tsubota, K. Autoimmune epithelitis and chronic inflammation in Sjogren's syndrome-related dry eye disease. Int J Mol Sci. 22 (21), 11820(2021).
  12. Flippe, L., Bezie, S., Anegon, I., Guillonneau, C. Future prospects for CD8+ regulatory T cells in immune tolerance. Immunol Rev. 292 (1), 209-224 (2019).
  13. Olson, K. E., Mosley, R. L., Gendelman, H. E. The potential for Treg-enhancing therapies in nervous system pathologies. Clin Exp Immunol. 211 (2), 108-121 (2023).
  14. Boonpiyathad, T., Sozener, Z. C., Akdis, M., Akdis, C. A. The role of Treg cell subsets in allergic disease. Asian Pac J Allergy Immunol. 38 (3), 139-149 (2020).
  15. Xu, W., Bergsbaken, T., Edelblum, K. L. The multifunctional nature of CD103 (αEβ7 integrin) signaling in tissue-resident lymphocytes. Am J Physiol Cell Physiol. 323 (4), C1161-C1167 (2022).
  16. Zhang, X., et al. CD8+CD103+ iTregs inhibit chronic graft-versus-host disease with lupus nephritis by the increased expression of CD39. Mol Ther. 27 (11), 1963-1973 (2019).
  17. Liu, Y., et al. Phenotypic and functional characteristic of a newly identified CD8+ Foxp3- CD103+ regulatory T cells. J Mol Cell Biol. 6 (1), 81-92 (2014).
  18. Chen, Q., et al. CD8+ CD103+ iTregs protect against ischemia-reperfusion-induced acute kidney injury by inhibiting pyroptosis. Apoptosis. 29 (9-10), 1709-1722 (2024).
  19. Kaneko, N., et al. Cytotoxic CD8+ T cells may be drivers of tissue destruction in Sjogren's syndrome. Sci Rep. 12 (1), 15427(2022).
  20. Kudryavtsev, I., et al. Circulating CD8+ T cell subsets in primary Sjogren's syndrome. Biomedicines. 11 (10), 2778(2023).
  21. Heidari, M., Noorizadeh, F., Wu, K., Inomata, T., Mashaghi, A. Dry eye disease: emerging approaches to disease analysis and therapy. J Clin Med. 8 (9), 1439(2019).
  22. Ibiayo, A. G., Varinthra, P., Nagarajan, M., Liu, I. Y. Coniferaldehyde reverses 3-nitropropionic acid-induced Huntington's disease pathologies via PKM2 restoration and JAK2/STAT3 inhibition. Mol Med. 31 (1), 271(2025).
  23. Loi, J. K., et al. Corneal tissue-resident memory T cells form a unique immune compartment at the ocular surface. Cell Rep. 39 (8), 110852(2022).
  24. Kennedy-Batalla, R., et al. Treg in inborn errors of immunity: gaps, knowns and future perspectives. Front Immunol. 14, 1278759(2023).
  25. Suffia, I., Reckling, S. K., Salay, G., Belkaid, Y. A role for CD103 in the retention of CD4+CD25+ Treg and control of Leishmania major infection. J Immunol. 174 (9), 5444-5455 (2005).
  26. De Paiva, C. S., et al. IL-17 disrupts corneal barrier following desiccating stress. Mucosal Immunol. 2 (3), 243-253 (2009).
  27. Rio, D. C., Ares, M. Jr, Hannon, G. J., Nilsen, T. W. Purification of RNA using TRIzol (TRI reagent). Cold Spring Harb Protoc. 2010 (6), (2010).
  28. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(−ΔΔC(T)) method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  29. Zareh, H., et al. Doxycycline versus curcumin for inhibition of matrix metalloproteinase expression and activity following chemically induced inflammation in corneal cells. J Ophthalmic Vis Res. 19 (3), 273-283 (2024).
  30. Yang, X., et al. IFN-gamma facilitates corneal epithelial cell pyroptosis through the JAK2/STAT1 pathway in dry eye. Invest Ophthalmol Vis Sci. 64 (3), 34(2023).
  31. Lollett, I. V., Galor, A. Dry eye syndrome: developments and lifitegrast in perspective. Clin Ophthalmol. 2018, 125-139 (2018).
  32. Zhang, X., et al. CD8+ cells regulate the T helper-17 response in an experimental murine model of Sjogren syndrome. Mucosal Immunol. 7 (2), 417-427 (2014).
  33. Zhou, H., Yang, J., Tian, J., Wang, S. CD8+ T lymphocytes: crucial players in Sjogren's syndrome. Front Immunol. 11, 602823(2020).
  34. Lu, Z., et al. Rapid and quantitative detection of tear MMP-9 for dry eye patients using a novel silicon nanowire-based biosensor. Biosens Bioelectron. 214, 114498(2022).
  35. Burgalassi, S., et al. Functionalized hyaluronic acid for "in situ" matrix metalloproteinase inhibition: a bioactive material to treat the dry eye syndrome. ACS Macro Lett. 11 (10), 1190-1194 (2022).
  36. Chen, X., et al. Tc17/IL-17A up-regulated the expression of MMP-9 via NF-kappaB pathway in nasal epithelial cells of patients with chronic rhinosinusitis. Front Immunol. 9, 2121(2018).
  37. Alam, J., et al. IL-17 producing lymphocytes cause dry eye and corneal disease with aging in RXRalpha mutant mouse. Front Med (Lausanne). 9, 849990(2022).
  38. Flores-Pliego, A., et al. Matrix metalloproteinase-3 (MMP-3) is an endogenous activator of the MMP-9 secreted by placental leukocytes: implication in human labor. PLoS One. 10 (12), e0145366(2015).
  39. You, Y., et al. Investigation of conjunctival goblet cell and tear MUC5AC protein in patients with Graves' ophthalmopathy. Transl Vis Sci Technol. 12 (10), 19(2023).
  40. Tukler Henriksson, J., Coursey, T. G., Corry, D. B., De Paiva, C. S., Pflugfelder, S. C. IL-13 stimulates proliferation and expression of mucin and immunomodulatory genes in cultured conjunctival goblet cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (8), 4186-4197 (2015).
  41. Fang, Z., et al. Clinical ocular surface characteristics and expression of MUC5AC in diabetics: a population-based study. Eye (Lond). 38 (16), 3145-3152 (2024).
  42. Garcia-Posadas, L., et al. Interaction of IFN-gamma with cholinergic agonists to modulate rat and human goblet cell function. Mucosal Immunol. 9 (1), 206-217 (2016).
  43. Volpe, E. A., et al. Interferon-gamma deficiency protects against aging-related goblet cell loss. Oncotarget. 7 (40), 64605-64614 (2016).
  44. Gustafsson, J. K., Hansson, G. C. Immune regulation of goblet cell and mucus functions in health and disease. Annu Rev Immunol. 43 (1), 169-189 (2025).
  45. Lin, N., et al. Ectoine enhances mucin production via restoring IL-13/IFN-gamma balance in a murine dry eye model. Invest Ophthalmol Vis Sci. 65 (6), 39(2024).
  46. Ogawa, Y., Shimizu, E., Tsubota, K. Interferons and dry eye in Sjogren's syndrome. Int J Mol Sci. 19 (11), 3548(2018).
  47. Zhang, X., et al. Interferon-gamma exacerbates dry eye-induced apoptosis in conjunctiva through dual apoptotic pathways. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (9), 6279-6285 (2011).
  48. Hassan, M., Elzallat, M., Mohammed, D. M., Balata, M., El-Maadawy, W. H. Exploiting regulatory T cells (Tregs): cutting-edge therapy for autoimmune diseases. Int Immunopharmacol. 155, 114624(2025).

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Inflamaci n de la superficie ocularc lulas T reguladorastransferencia adoptivaclasificaci n celular magn ticaproducci n de l grimasintegridad de la barrera cornealc lulas T CD4modulaci n de citocinas
Video próximamente
Contáctenos
Recomendar a la biblioteca

Privacidad

Condiciones de uso

Políticas

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Todos los derechos reservados.