Este artículo describe un estudio sobre la regulación de la fibrosis de fibroblastos pulmonares mediante la decocción Wenyang Dingchuan mediante la inhibición de la polarización de los macrófagos M2.
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Artículo de investigación
Este artículo describe un estudio sobre la regulación de la fibrosis de fibroblastos pulmonares mediante la decocción Wenyang Dingchuan mediante la inhibición de la polarización de los macrófagos M2.
Estudiar los efectos de Wen Yang Ding Chuan Tang (WYDCT) sobre la función de los fibroblastos, la remodelación de las vías respiratorias en el asma y el mecanismo subyacente. Se utilizó IL-4 para inducir la polarización M2 de los macrófagos RAW264.7, y los macrófagos polarizados se trataron con WYDCT para investigar su efecto sobre los fibroblastos pulmonares de ratón. Las células polarizadas RAW264.7 fueron sometidas a diferentes tratamientos y luego co-cultivadas con fibroblastos. Se evaluaron los niveles de marcadores M1 y M2, la morfología celular y la concentración de IL-6. Se analizó el nivel de proteína STAT3. Se analizaron la viabilidad, proliferación, formación de colonias, expresión de PCNA y expresión de fibronectina, COL1A1 y α-SMA utilizando diversos ensayos, incluyendo PCR en tiempo real, Western blot, CCK-8, Edu, inmunofluorescencia y formación de colonias. La WYDCT revirtió los cambios morfológicos inducidos por IL-4 en las células RAW264.7, redujo los niveles de marcadores M2 (Arg-1, CD206) e IL-6, y disminuyó la expresión de STAT3 en las células RAW264.7, mientras que la suplementación con IL-6 restauró el efecto de la WYDCT sobre los marcadores M2. Además, la WYDCT inhibía la viabilidad y proliferación de fibroblastos, reducía la expresión de PCNA y disminuía los marcadores de fibrosis (fibronectina, COL1A1, α-SMA), lo que sugiere que la WYDCT inhibe la viabilidad, proliferación y fibrosis de los fibroblastos pulmonares al suprimir la polarización de los macrófagos M2, en la que la vía de señalización IL-6/STAT3 puede desempeñar un papel clave.
El asma, también conocido como asma bronquial, es una condición inflamatoria persistente de las víasrespiratorias. Frecuentemente relacionada con la exposición a alérgenos, bajas temperaturas y irritantes tanto físicos como químicos, esta condición se caracteriza por la infiltración de células inflamatorias, la constricción reversible de las vías respiratorias, la secreción de moco y elbroncoespasmo 2. Actualmente, hay al menos 300 millones de pacientes con asma en todo el mundo, y la prevalencia está aumentando año trastercer año. En 2015, 400.000 personas murieron de asma, lo que lo convierte en un grave problema de saludglobal 4,5. China también se enfrenta al mismo problema, con estudios que muestran una tasa de prevalencia de asma del 4,2%, que representa aproximadamente 45,7 millones de pacientes adultos, con tasas de control más bajas en comparación conlos países desarrollados (6,7). El bienestar de las personas afectadas por esta dolencia se ve gravemente comprometido, lo que supone una considerable carga económica para las familias.
La remodelación de las vías respiratorias se considera un factor crucial en el tratamiento del asma que es difícilde controlar. Por ello, el tratamiento del asma crónica persistente se convierte en un punto clave. La práctica clínica suele implicar el uso de corticosteroides inhalados en combinación con broncodilatadores, que pueden aliviar eficazmente los síntomas enlos pacientes 9. Sin embargo, estos tratamientos tienen ciertos efectos secundarios y pueden ser menos efectivos para mejorar los síntomas en algunos pacientes. Además, el asma tiende a reaparecer tras dejar de tomar medicación. Las investigaciones han demostrado que la activación de fibroblastos pulmonares está relacionada con la remodelación de las vías respiratorias durante la progresión delasma 10. Al activarse, los fibroblastos pulmonares sufren una transformación fenotípica y secretan proteínas clave para impulsar la deposición de la matriz extracelular (MEC), la característica patológica central de la remodelación de las vías respiratorias. Concretamente, la fibronectina sirve como un andamiaje temprano para el montaje de ECM, promoviendo el reclutamiento y la adhesión de otros componentes de la matriz; COL1A1 (cadena α1 de colágeno tipo I) es la principal proteína estructural de la ECM, y su acumulación excesiva provoca engrosamiento y rigidez de la pared de las vías respiratorias; α-SMA (actina α-liso-muscular) marca la transformación de fibroblastos en miofibroblastos con fuertes capacidades contráctiles y secretoras, acelerando aún más la deposición de ECM y la fibrosis de las vías respiratorias.
La IL-6 es el factor de señalización citoplasmática más importante para la activación de lavía STAT3 11. Un IL-6 elevado activa la vía STAT3. En el tejido pulmonar de ratón asmático, la expresión de STAT3 y ARNm y proteínas fosforiladas aumentan significativamente. La vía de señalización IL-6/STAT3 es uno de los objetivos para el tratamiento del asma. Los estudios han confirmado que la activación de la vía de señalización IL-6/STAT3 está asociada con la inflamación de las vías respiratorias en el asma, y que inhibir esta vía puede reducir la inflamaciónde las vías respiratorias 12,13. IL-6/STAT3 también está asociada con la polarización M2 de los macrófagos. Estudios extranjeros han demostrado que la expresión de IL-6 reduce significativamente la activación posterior de STAT3, lo que se correlaciona con una reducción en el número de superficies tumorales, disminución de la proliferación y disminución de los macrófagos M2 en elhígado 14.
Las células inmunitarias conocidas como macrófagos pueden categorizarse en fenotipos distintos, a saber, activación clásica (M1) y activación alternativa (M2), cada una cumpliendo funcionesúnicas 15. Los macrófagos M1 pueden inducir reacciones inflamatorias y daño tisular, mientras que los macrófagos M2 promueven la proliferación celular y facilitan la cicatrización de heridas y la reparación de tejidos. Las investigaciones han demostrado que la remodelación de las vías respiratorias en el asma está asociada con los macrófagosM2 16. Experimentos in vitro han demostrado que inducir la polarización M2 de macrófagos con IL-4 mejora significativamente la capacidad de proliferación de células α-SMA-positivas17. Inhibir la polarización de los macrófagos M2 es un enfoque eficaz para tratar la remodelación de las vías respiratorias en el asma.
El asma pertenece a la categoría de "Xiao Bing" en la medicina tradicional china. Los factores patológicos de Xiao Bing involucran principalmente flema. La producción de flema resulta de un desequilibrio entre el Yin y el Yang en las vísceras, combinado con factores externos como patógenos exógenos, la dieta y las condiciones posteriores a la enfermedad, que afectan al movimiento de fluidos corporales, provocando estancamiento y acumulación. Con la continua exploración de los mecanismos de la medicina tradicional china en el tratamiento del asma, cada vez más estudios han demostrado que la medicina tradicional china tiene efectos significativos en el alivio de la inflamación de las vías respiratorias, la reducción de la secreción excesiva de moco e inhibición de la remodelación de las víasrespiratorias 18,19. En Xiao Bing, el pulmón se ve afectado principalmente, seguido por el bazo y los riñones. Los pacientes con Xiao Bing presentan deficiencia de qi pulmonar y una defensa débil contra patógenos externos, lo que provoca pérdida de difusión del qi pulmonar y daño repetido y prolongado del yang qi, lo que resulta en deficiencia pulmonar de yang. La deficiencia de yang provoca la circulación anormal de fluidos corporales, que se condensan en flema. En los ataques prolongados, el flema frío afecta al yang del bazo y los riñones, lo que provoca un patrón de deficiencia de yang pulmón-bazo y riñón, desequilibrio de yin y yang, preponderancia o deficiencia excesiva de la constitución y circulación anormal de fluidos corporales. El pulmón no puede dispersar líquidos, el bazo no puede transformar agua y esencia, y los riñones no pueden vaporizar ni transformar fluidos, lo que conduce a la condensación de flema y a la formación de estasis, que se manifiesta como asma. Por lo tanto, la deficiencia de yang es la causa raíz de Xiao Bing, y la estasis de flema es su característica. Wen Yang Ding Chuan Tang está compuesto por 12 hierbas medicinales chinas, incluyendo Epimedium (15 g), Ephedra (procesada) (10 g), ginseng (15 g), astrágalo (15 g), Ginkgo biloba (15 g), Flos Farfarae (15 g), grano amargo de albaricoque (15 g), Pinellia ternata (procesada) (10 g), Schisandra chinensis (10 g), lombriz de tierra (10 g), Persica (10 g) y regaliz (procesado) (10 g). Esta fórmula herbal deriva de la modificación del Ding Chuan Tang en el libro "She Sheng Zhong Miao Fang" y tiene los efectos de calentar el yang, reforzar el qi, resolver la flema, promover la circulación sanguínea y aliviar la tos y el asma. Se ha establecido la eficacia clínica de este tratamiento, lo que ha impulsado investigaciones experimentales actuales sobre su mecanismo para abordar la remodelación de las vías respiratorias en el asma.
En comparación con las terapias farmacológicas actuales para el asma, como corticosteroides inhalados, agonistas β2 y biológicos monoclonales basados en anticuerpos dirigidos a IgE o IL-5, Wen Yang Ding Chuan Tang (WYDCT) ofrece una estrategia terapéutica potencial multi-objetivo y más segura. Los corticosteroides convencionales alivian eficazmente la inflamación de las vías respiratorias, pero a menudo se asocian con efectos secundarios como inmunosupresión, desequilibrio hormonal y recaídas tras la abstinencia. Los agentes biológicos, aunque más específicos, son costosos y están limitados a fenotipos específicos del asma. En contraste, la WYDCT, derivada de la teoría de la medicina tradicional china de "calentamiento del yang y resolución de flema", ejerce efectos integrales en la regulación del equilibrio inmunitario, la reducción de la inflamación de las vías respiratorias y la supresión de la remodelación de las vías respiratorias, como se demostró en estudios clínicos yexperimentales 20. Su composición multicomponente puede modular simultáneamente la polarización de los macrófagos, la activación de fibroblastos y la liberación de citocinas, proporcionando una mejora más amplia y potencialmente más sostenible en la patología del asma.
En este estudio, el extracto de agua de Wen Yang Ding Chuan Tang (WYDCT) se preparó a partir de doce hierbas en una proporción tradicional fija, se concentró en una solución final de 1 g/mL (equivalente a fármaco crudo) y se filtró para su uso en cultivo celular. El extracto se aplicó a concentraciones de 50, 100 y 200 μg/mL, que se seleccionaron en base a ensayos preliminares de viabilidad celular para asegurar la no citotoxicidad manteniendo la actividad farmacológica. El modelo in vitro implicó la polarización M2 inducida por IL-4 de los macrófagos RAW264.7 y el cocultivo con fibroblastos pulmonares de ratón (células L929), lo que nos permitió evaluar los efectos paracrinos de los macrófagos sobre la activación de fibroblastos y las respuestas relacionadas con la fibrosis. Estos detalles proporcionan un marco reproducible para futuros estudios que investiguen las características dosis-respuesta y las vías mecanicistas de la WYDCT en la remodelación de las vías respiratorias.
Basándonos en los hallazgos anteriores, especulamos que Wen Yang Ding Chuan Tang ejerce sus efectos anti-remodelación de las vías respiratorias en el asma inhibiendo la polarización M2 de los macrófagos y suprimiendo la activación de fibroblastos.
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Este estudio se llevó a cabo siguiendo directrices internacionales, nacionales e institucionales para el trato humano de animales y en cumplimiento de la legislación aplicable. En concreto, todos los procedimientos que involucran ratones fueron aprobados por el Comité de Cuidado Ético Animal del Tercer Hospital Afiliado del Colegio Médico Qiqihar (AECC-2022-009). Los ratones se alojaban en condiciones estándar de laboratorio con acceso a comida y agua de forma improvisada, y se hacían todos los esfuerzos para minimizar el sufrimiento. Se establecieron y monitorizaron criterios humanos a lo largo del estudio.
1. Preparación del extracto de WYDCT
Las 12 hierbas de Wen Yang Ding Chuan Tang se pesaron según la proporción tradicional: Epimedium (15 g), Efedra procesada (10 g), Ginseng (15 g), Astrágalo (15 g), Ginkgo biloba (15 g), Flos Farfarae (15 g), Gran de albaricoque amargo (15 g), Pinellia ternata procesada (10 g), Schisandra chinensis (10 g), Lombriz de tierra (10 g), Persica (10 g), y regaliz procesado (10 g).
Se añadió diez veces el volumen de agua destilada y la mezcla se hervía durante 30 minutos. La extracción se repitió dos veces y los filtrados se combinaron. El extracto combinado se concentró bajo presión reducida hasta una concentración equivalente a un fármaco crudo de 1 g/mL. El extracto se filtraba a través de una membrana de 0,22 μm, se alicotaba y se almacenaba a −20 °C. Las concentraciones de trabajo (50, 100 y 200 μg/mL) se preparaban por dilución inmediatamente antes de su uso.
2. Cultivo celular y polarización M2
Las células RAW264,7 (ATCC, EE. UU.) fueron descongeladas y sembradas a una densidad de 1 × 10⁶ células por plato de 10 cm en 10 mL de DMEM suplementado con suero bovino fetal al 10%, 100 U/mL de penicilina y 100 μg/mL de estreptomicina. Las células fueron incubadas a 37 °C en una atmósfera humidificada que contenía un 5% de CO₂ durante 24 horas hasta alcanzar una confluencia del 80%-90%.
El medio de cultivo fue reemplazado por DMEM fresco que contenía 20 ng/mL de IL-4, y las células fueron incubadas durante 24 horas adicionales para inducir la polarización M2. Tras la incubación, las células se lavaron dos veces con PBS y posteriormente se trataron con extracto de WYDCT (solución de 10 mg/mL diluida a las concentraciones finales indicadas) durante 24 horas. Para los experimentos de suplementación con IL-6, se añadieron 50 ng/mL de IL-6 durante el tratamiento con WYDCT.
Las células tratadas con DMSO al 0,1% sirvieron como control negativo. Se examinó la morfología celular bajo un microscopio invertido y se capturaron imágenes representativas.
3. Aislamiento y cultivo de fibroblastos pulmonares de ratón
Los ratones fueron sacrificados conforme a los protocolos éticos aprobados. Se recogían lóbulos pulmonares y se colocaban en la solución salina equilibrada de Hanks fría. Se extrajeron vasos sanguíneos visibles y tejido conectivo, y el tejido pulmonar se trituró en pequeños fragmentos (~1 mm3).
Los fragmentos de tejido se digerieron en tripsina al 0,25% durante 40 minutos a 37 °C con agitación suave, seguidos de una segunda digestión con tripsina al 0,25% durante 30 minutos. La suspensión de la célula se centrifugó a 300 × g durante 5 minutos, se descartó el sobrenadante y el pellet se resuspendió en DMEM suplementado con suero bovino fetal al 10%.
La suspensión se incubó durante 100 minutos para permitir la adhirencia de los fibroblastos, tras lo cual las células se centrifugaron de nuevo a 300 × g durante 5 minutos para mejorar la purificación. Los fibroblastos purificados se sembraron en placas de cultivo adecuadas e incubados a 37 °C en una atmósfera humidificada con un 5% de CO₂ hasta alcanzar aproximadamente el 80% de confluencia.
4. Cocultivo de fibroblastos con medio acondicionado
El sobrenadante se recogió de células RAW264,7 tratadas y centrifugado a 3000 × g durante 10 minutos a 4 °C. El medio de cultivo de fibroblastos fue reemplazado por el medio recogido y condicionado por macrófagos. Los fibroblastos se incubaron durante 24 horas a 37 °C en una atmósfera humidificada con un 5% de CO₂ antes de los ensayos funcionales. Tras la incubación, se extrajeron fibroblastos para la extracción de ARN y proteínas para posteriores análisis qRT-PCR y Western blot.
5. Viabilidad de la célula (ensayo CCK-8)
Los fibroblastos se sembraron a una densidad de 5 × 10³ por pozo en placas de 96 pozos que contenían 100 μL de medio de cultivo. Las células fueron sometidas a los tratamientos indicados durante 24 horas. Posteriormente, se añadieron 10 μL de reactivo CCK-8 a cada pozo, y las placas se incubaron durante 2 horas a 37 °C. La densidad óptica (OD) se midió a 450 nm usando un lector de microplacas. La viabilidad celular se calculó como (OD_treated / OD_control) × 100%. Todos los experimentos se realizaron con tres réplicas biológicas.
6. Ensayo de formación de colonias
Las células se sembraron a una densidad de 1 × 10³ por pozo en placas de 6 pozos, con tres pozos replicados por condición. Las placas se incubaron durante 10-14 días hasta que se formaron colonias visibles. Las colonias se teñieron con un violeta cristalino al 0,1% durante 10 minutos a temperatura ambiente. Tras teñir, las colonias se lavaban y fotografiaban. El tinte unido se disolvió en ácido acético al 30% durante 15 minutos, y la densidad óptica se midió en 590 nm. Se realizaron tres experimentos independientes.
7. Ensayo de proliferación de EdU
Las células se trataron según lo indicado durante 24 horas. Posteriormente, se añadieron 100 μL de 50 μM de EdU a cada pozo, y las células se incubaron durante 2 horas a 37 °C. Las células se fijaron en paraformaldehído al 4% durante 30 minutos y se templaron con 2 mg/mL de glicina durante 5 minutos. Las células fueron permeabilizadas con 0,5% de Triton X-100 en PBS, lavadas e incubadas con solución de tinción Apollo durante 30 minutos. Los núcleos se contra-tintieran con Hoechst 33342 (1×) durante 30 minutos. Se observaron e imaginaron células EdU positivas utilizando un microscopio de fluorescencia.
8. ELISA para IL-6
El sobrenadante de la célula RAW264.7 fue centrifugado a 3000 × g durante 15 minutos a 4 °C. Los niveles de IL-6 se midieron utilizando un kit Beyotime ELISA según las instrucciones del fabricante. La absorbancia se midió usando un lector de microplacas y las concentraciones de IL-6 se calcularon según una curva estándar.
9. Inmunofluorescencia
Los fibroblastos se fijaron en acetona preenfriada durante 10 minutos y se lavaron tres veces con PBS. Las células se permeabilizaron con Triton X-100 al 0,1% durante 10 minutos y se bloquearon con 1% de BSA en PBS durante 30 minutos. Las células se incubaron con un anticuerpo primario contra PCNA (1:100) durante la noche a 4 °C. Tras lavarse tres veces con PBS, las células fueron incubadas con un anticuerpo secundario conjugado con FIC (1:200) durante 1 hora a temperatura ambiente. Los núcleos se contrateñieron con DAPI, se lavaron e imaginaron usando un microscopio de fluorescencia.
10. qRT-PCR
El ARN total se extrajo utilizando reactivo Trizol (Beyotime, China) según el protocolo del fabricante. La transcripción inversa se realizó con el Kit de Síntesis de ADNc utilizando 2 μg de ARN y cebadores aleatorios. Las reacciones PCR se prepararon en un volumen de 20 μL que contenía 10 μL de SYBR Green Master Mix, 0,5 μL de cada cebador específico de cada gen (concentración final 0,5 μM) y 1 μL de plantilla de ADNc. Los cebadores utilizados incluían CD16, iNOS, Arg-1, CD206, fibronectina, COL1A1, α-SMA y GAPDH (secuencias proporcionadas).
Las condiciones de ciclo térmico consistieron en una desnaturalización inicial a 95 °C durante 5 minutos, seguida de 40 ciclos de 95 °C durante 30 s, 60 °C durante 30 s y 72 °C durante 30 s. Se realizó un análisis de curva de fusión de 60 °C a 95 °C en incrementos de 0,5 °C para verificar la especificidad de la amplificación.
Análisis de datos: La expresión relativa se calculó usando el método 2^−ΔΔCT y se normalizó a GAPDH. Los cebadores eran los siguientes: CD16 (ratón): 5′- AGGAGCTGAGGAGGAGGAGGAGG-3′ y 5′- TGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGG-3′, iNOS (ratón): 5′-TGCTCCCCAGGAGATGTTGT-3′ y 5′-TGGTCTGGTAGGCTGTACGG-3′, Arg-1 (ratón): 5′- GCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTG-3′ y 5′- GGTGGCTTTGCTGGTGTGTGTC-3′ ��, CD206 (ratón): 5′- GGCTTCTATGAGCTGGGTGA-3′ y 5′- CTGGCCTTCTGTGTGTTGTT-3′, fibronectina (ratón): 5'-CGTGTGAAGGTGTCTCTGC-3' y 5'-GAGGTCACAGTGTCTTGCT-3', COL1A1 (ratón): 5'-CCCTGGACACCTGGCTTTT-3' y 5'-GCGGGTCCCCTTCTCTCTC-3', α-SMA (ratón): 5'-CTGGAACCACAGCTTCTC-3' y 5'-GGGATATAGCACAGCTTCTC-3', GAPDH (ratón): 5′-TGTGTCCGTCGTGGATCTGA -3′ y 5′- CCTGCTTCACCTTCTTGAT-3′.
11. Western blot
Las células se lisaron utilizando inhibidores de proteasas que contenían un tampón RIPA. Las concentraciones de proteínas se determinaron mediante un ensayo de BCA. Para SDS-PAGE, se cargaban 60 μg de proteína en cada vía de un gel de poliacrilamida al 10% y se separaban a 120 V durante 1,5-2 horas. Las proteínas se transfirieron a una membrana PVDF mediante un método de transferencia húmeda a 100 V durante 1 hora. Tras bloquear con leche desnatada al 5% en TBS-T durante 1 hora a temperatura ambiente, la membrana se incubó con anticuerpos primarios (dilución 1:1000) durante la noche a 4 °C. Tras lavados con TBS-T, la membrana fue incubada con anticuerpos secundarios conjugados con HRP (dilución 1:5000) durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras lavados adicionales, las bandas proteicas se detectaron utilizando un reactivo de quimioluminiscencia ECL y se fotografiaron con un sistema de imagen quimioluminiscencia. Las intensidades de las bandas se cuantificaron usando el software ImageJ, y los niveles de proteínas se normalizaron a GAPDH como control interno.
12. Análisis estadístico
Los datos se analizaron utilizando SPSS 17.0. Las variables continuas se expresaron como media ± desviación estándar (DS). Las comparaciones entre dos grupos se realizaron utilizando una prueba t no emparejada, mientras que las comparaciones entre varios grupos se realizaron con ANOVA unidireccional seguida de la prueba post hoc de LSD. Se consideró estadísticamente significativo un valor p inferior a 0,05.
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Efectos de la WYDCT sobre la polarización M2 de las células RAW264.7 de los macrófagos
Observamos la morfología celular de RAW264.7 usando un microscopio óptico. Como se muestra en la Figura 1A, la estimulación de IL-4 provocó que las células se alargaran, resultando en una forma más alargada y similar a un huso en comparación con las células no tratadas. Además, las células estimuladas por IL-4 mostraron una mayor granularidad citoplasmática y un...
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El objetivo de este estudio fue explorar el impacto de la WYDCT en la actividad de fibroblastos y la remodelación de las vías respiratorias en el asma, así como los mecanismos subyacentes. Los hallazgos actuales demuestran que la WYDCT puede inhibir la polarización M2 de los macrófagos RAW264.7, lo que posteriormente afecta la viabilidad, proliferación y fibrosis de fibroblastos pulmonares de ratón. Además, la vía de señalización IL-6/STAT3 desempeñó un papel clave en la mediación de est...
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Agradecemos sinceramente a todos los socios que contribuyeron a este proyecto de investigación. Este trabajo fue apoyado por los Gastos Operativos de Investigación Científica Básica de la Universidad en la provincia de Heilongjiang en 2022 (N.º 2022-KYYWF-0827), por lo que estamos agradecidos.
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Reactivo de hibridación del Apolo 643 | Guangzhou RiboBio Co., Ltd. | C10371-2 | |
| Arginasa-1 (E4U1I) ratón mAb | Tecnología de Señalización Celular, Inc. | 43933T | |
| Kit de determinación de concentración de proteínas BCA | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | P0012 | |
| BeyoBlot HRP Conijo Anti-Conejo Nativo IgG (H+L) | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | A0210 | |
| Incubadora de dióxido de carbono | Shanghai Lishen Scientific Equipment Co., Ltd. | HF240 | |
| CD206/MRC1 (E6T5J) XP® Conejo mAb | Tecnología de Señalización Celular, Inc. | 24595T | |
| Kit de Conteo de Células-8 | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | C0037 | |
| COL1A1 (E8F4L) XP Rabbit mAb | Tecnología de Señalización Celular, Inc. | 72026T | |
| Dimetilsulfóxido | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | ST038-100ml | |
| Medio DMEM con alto contenido de azúcar | Compañía Biológica de Grand Island | 11965092 | |
| EDU | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | ST067-250mg | |
| Fcγ RIII/CD16 (F6K6G) Conejo mAb | Tecnología de Señalización Celular, Inc. | 71345T | |
| Suero fetal para terneros | Compañía Biológica de Grand Island | A5256701 | |
| Fibronectina/Anticuerpo FN1 y nbsp; | Tecnología de Señalización Celular, Inc | 63779S | |
| IgG Anti-Ratón Conjugado con FITC (H+L) | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | A0568 | |
| Instrumento de PCR cuantitativa de fluorescencia | Yarui Biotechnology Co., Ltd. | MA-6000 | |
| Hoechst 33342 Solución de tinción de células vivas (100X) | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | C1029 | |
| iNOS (E1W4J) Rabbit mAb | Tecnología de Señalización Celular, Inc. | 70706SF | |
| Microscopio invertido | Guangzhou Mingmei Optoelectronics Technology Co., Ltd. | MI52-N | |
| LRRK2 T1348N mut RAW 264.7 | ATCC | SC-6005 | |
| Amortiguador de permeabilización con mmunotinción (con Triton X-100) | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | P0096-100ml | |
| Kit ELISA IL-6 para ratón | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | PI326 | |
| Células fibroblastas pulmonares de ratón | Wuhan Procell Life Technology Co., Ltd. | CP-M006 | |
| Ratón PCNA (PC10) mAb | Tecnología de Señalización Celular, Inc. | 2586T | |
| Penicilina-estreptomicina | Compañía Biológica de Grand Island | 15140148 | |
| Murina recombinante IL-4 | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | P5916-5 y mu; g | |
| Murina recombinante IL-6 | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | P5925-10 y mu; g | |
| Instrumento de etiquetado enzimático Redu | Rayto Ciencias de la Vida | RT-6100 | |
| Stat3 (124H6) Mouse mAb | Tecnología de Señalización Celular, Inc. | 9139T | |
| Banco superlimpio | Jinan BioBase Biotech Co., Ltd. | BBS-SDC | |
| SynGAP-& alpha; 2 conejos mAb | Tecnología de Señalización Celular, Inc. | 56927T | |
| Thermo Fisher Scientific Lysis y Extraction Buffer de Ripa | ThermoFisher | 89901 | |
| Trizol (reactivo de extracción de ARN total) | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | R0016 | |
| Anticuerpo β-Actin | Tecnología de Señalización Celular, Inc. | 4967S |
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