Artículo de investigación

Cuantificación por PCR en tiempo real del ADN bacteriano del complejo rojo y el estado periodontal en portadores de dentaduras parciales removibles

DOI:

10.3791/69774

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2 de enero de 2026

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1Department of Prosthodontics, Dental School, Faculty of Medicine, University of Prishtina, 2Department of Reconstructive Dentistry and Gerodontology, School of Dental Medicine, University of Bern, 3Oral Implantology Research Institute, 4School of Dental Medicine, University of Zagreb

En este artículo

Resumen

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Se utilizó la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (PCR) para cuantificar el ADN de bacterias del complejo rojo en portadores de dentaduras parciales removibles (DPR). Este estudio promete un enfoque novedoso para futuras estrategias de tratamiento con prótesis implantales para estos pacientes, considerando el papel de estas bacterias en el desarrollo de la periimplantitis.

Resumen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La inserción de dentaduras parciales extraíbles (DPR) en la cavidad oral está asociada con cambios en la microflora oral a lo largo del tiempo. Sin embargo, existe una escasez de literatura que examine la presencia de bacterias del complejo rojo (CCR) en estos pacientes. Dado el papel consolidado de RCB en el desarrollo de periodontitis, periimplantitis y diversas enfermedades sistémicas, es fundamental investigar el impacto de las DPR en estas bacterias. Este estudio tiene como objetivo cuantificar la carga subgingival de los dientes de estribo de RCB-Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia y Treponema denticola-in en los dientes del estribo de pacientes parcialmente edentulosos rehabilitados con DPR, utilizando la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR). Un objetivo secundario fue evaluar el estado periodontal de los dientes de pilar y no estribos y determinar las correlaciones entre la carga microbiana y los índices periodontales clínicos.

Se inscribieron treinta participantes que requerían RPD. El ácido desoxirribonucleico (ADN) se aisló de muestras bacterianas obtenidas de los dientes del estribo antes de (T0) y 3 meses después de la inserción (T3). La cuantificación de RCB se realizó mediante RT-PCR y se expresó como "Lg (equivalentes genómicos/muestra)". Se registraron parámetros clínicos —índice de placa (PI), índice gingival (GI), profundidad de sondeo (PD) y movilidad dental (TM)— para dientes de pilar y no pilar en ambos momentos.

Los dientes del estribo demostraron aumentos estadísticamente significativos en las cargas de RCB en las tres especies objetivo desde T0 hasta T3: P. gingivalis (1,99 ± 2,01 frente a 3,64 ± 2,21, p = 0,00003), T. forsythia (2,20 ± 2,17 frente a 3,56 ± 2,33, p = 0,00009) y T. denticola (0,82 ± 1,41 frente a 2,35 ± 2,21, p = 0,0001). Aunque los parámetros periodontales se elevaron en dientes con pilar frente a los que no tenían pilar tras el tratamiento, las diferencias no alcanzaron significación estadística. Entre los patógenos, T. forsythia mostró la correlación positiva más fuerte con los índices periodontales.

El uso a corto plazo de las DPR se asocia con un aumento significativo en la colonización de los dientes del estribo por RCB, lo que sugiere cambios microbianos e inflamatorios tempranos que pueden preceder a una degradación periodontal clínicamente evidente.

Introducción

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La cavidad oral alberga un microbioma dinámico cuyo equilibrio ecológico es fundamental para mantener la saludperiodontal 1. La alteración de esta homeostasis microbiana, debido a factores endógenos y exógenos, puede alterar la homeostasis microbiana, creando condiciones favorables para el crecimiento de bacterias patógenas, incluyendo patógenos periodontales como Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsitia y Treponema denticola, denominadas colectivamente bacterias del complejo rojo (RCB)2. Estos patógenos son fundamentales en la patogénesis de la periodontitis y la periimplantitis, actuando en sinergia para evadir las defensas del huésped, promover la inflamación y facilitar la destrucción de los tejidos periodontales, lo que frecuentemente conduce a la pérdida dedientes 3,4. La pérdida de dientes afecta negativamente la capacidad de una persona para comer y hablar, y contribuye a una disminución de la confianza y el bienestar, aumentando así la necesidad de compensación protésica. Entre los métodos más habituales empleados, especialmente en la población mayor debido a diversas condiciones locales y generales, se encuentra el tratamiento protésico con dentaduras parciales removibles (DPR). Sin embargo, con el tiempo, las RPD5 pueden provocar una variedad de problemas.

Evidencia sólida sugiere que el uso de DPR puede provocar acumulación de placa dental y el desarrollo de inflamación de la encía y los tejidos periodontales, especialmente en los dientes delestribo 6,7,8,9,10. Sin embargo, la aparición de estos trastornos orales también depende del compromiso del paciente con la higiene bucal, así como del cuidado y mantenimiento de la dentadura 11,12,13,14. Bassi et al. enfatizaron en su investigación la importancia de controlar la placa dental. Examinaron pacientes que habían llevado DPR durante un periodo de 6 a 12 años y encontraron que la condición periodontal de los dientes de estribo era similar a la de los dientes sin estribos en casos con higiene oral regular. En cambio, la condición periodontal empeoró en el grupo de pacientes que no dieron importancia al seguimiento y mantenimiento de la higienebucal 13.

A pesar de las ventajas funcionales de las DPR, su inserción en la cavidad oral dificulta el libre flujo de saliva, predisponiendo la formación de una capa de película en la superficie de la prótesis que puede conducir a la colonización bacteriana. Se han identificado diferentes tipos de bacterias nocivas en pacientes conTPPR 15. Estudios recientes han demostrado que los niveles de patógenos que causan infecciones asociados a la caries dental, como Streptococcusmutans 16, así como los de Staphylococcus aureus17, pueden aumentar significativamente tras la colocación de dentaduras postizas. Además de funcionar como indicador del estado de la mucosa oral, los cambios en el nivel de bacterias derivados del uso de DPR también pueden provocar el desarrollo de enfermedades dentales en los dientesrestantes 18. Así, si los pacientes descuidan adecuadamente sus DPR, pueden desarrollarse condiciones anaeróbias bajo la base de la dentadura, lo que puede provocar un crecimiento excesivo de bacterias patógenas. Ciertos tipos de patógenos periodontales pueden entrar en la circulación sanguínea general a través del portal orofaríngeo, representando un factor de riesgo considerable para el desarrollo de diversas enfermedadessistémicas 19,20.

Sin embargo, todavía hay escasez de estudios sobre cambios microbiológicos en el surco gingival de los dientes del estribo en pacientes conDPR 21,22,23,24. Entre los pocos estudios sobre este tema, se han utilizado métodos convencionales para la detección de patógenos periodontales, incluyendo la prueba BANA-ZymeTM y el método de cultivo. Teniendo en cuenta que la mayoría de los patógenos periodontales son anaerobios facultativos, el uso de tales métodos puede resultar en dificultades en su cultivo, ya que en este contexto se requieren condiciones de alta intensidad reductora y para las cuales el oxígeno es tóxico25. Además, la literatura dental disponible aún no ha abordado satisfactoriamente la relación entre estos patógenos y los diferentes índices periodonales desde esta perspectiva.

Por ello, para superar las limitaciones del cultivo microbiano convencional y mejorar la precisión diagnóstica, este estudio empleó la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR) para cuantificar las cargas bacterianas del complejo rojo (RCB) en los dientes de los estribos de los portadores de RPD. Paralelamente, se evaluó el estado periodontal tanto de los dientes de estribo como de los no estribos utilizando índices clínicos estandarizados. El estudio investigó además las correlaciones entre la carga bacteriana y los parámetros periodontales para dilucidar mejor la interacción biológica entre el uso de prótesis y la disbiosis microbiana.

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Protocolo

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Este estudio incluyó a 30 pacientes parcialmente edentulos que buscaron atención prostóntica en la Clínica de Prótesis Dentales, Centro Clínico de Odontología Universitaria de Kosovo, entre septiembre de 2021 y marzo de 2022. Se obtuvo la aprobación ética del comité de revisión institucional (Aprobación nº 378/19) y todos los procedimientos se ajustaron a los principios de la Declaración de Helsinki. Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de todos los participantes.

El tamaño de la muestra se determinó en base a investigaciones previas, lo que indica que entre 11 y 30 participantes son suficientes para obtener resultados significativos en parámetros microbianos y periodontales entre quienes portanDPR 21,23. Suponiendo una prueba t emparejada de dos colas con un nivel alfa de 0,05, el análisis de potencia indicó que un tamaño de muestra de 28 participantes proporcionaría un 80% de potencia para detectar una diferencia estadísticamente significativa de esta magnitud. Para tener en cuenta posibles abandonos, inscribimos a 30 participantes. Además, un periodo de seguimiento de tres meses fue suficiente para observar un aumento de la carga bacteriana en estospacientes 24.

Los pacientes elegibles eran usuarios primerizos de dispositivos protésicos, presentándose tanto con dentición natural adyacente como antagónica. Los criterios de exclusión incluyeron: profundidades de sondeo >4 mm, estado inmunodeprimido (por ejemplo, quimioterapia), uso de antibióticos en los últimos 90 días, tabaquismo excesivo (>25 cigarrillos al día) y deterioro cognitivo que dificulta la comprensión de los procedimientos de la DPR.

Todos los participantes recibieron DPR con cierre de cierre fabricados con una estructura metálica de cobalto-cromo y resina acrílica (polimetilmetacrilato). El diseño de cada RPD se personalizó en función de la clasificación del edentulismo, la calidad de la dorsal residual y consideraciones biomecánicas.

Procedimiento de recogida de muestras

La recogida de muestras se realizó exclusivamente en los dientes del estribo de dentaduras parciales extraíbles (DPR) entre los puntos temporales T0 y T3. Primero se pidió a los participantes que hicieran gárgaras minuciosamente con agua para eliminar cualquier resto de comida. Antes de la recogida de la muestra, el diente del estribo seleccionado se aislaba usando rollos de algodón para mantener un ambiente de trabajo seco. Se insertaron dos puntas estériles de papel (nº 35; 04 afiladas) en el surco gingival en las partes mesial y distal de la superficie bucal del diente y se dejaron en su lugar durante 1 minuto. Las puntas de papel se transferían luego a un microtubo estéril que contenía 1,5 mL de solución salina normal y se transportaban a un laboratorio microbiológico designado. Las muestras se almacenaron a -20°C hasta el proceso de aislamiento del ADN.

Preparación y amplificación del ADN bacteriano:

Se empleó la prueba de parodontoscreen (Tabla de Materiales) para identificar T. denticola, T. forsitia y P. gingivalis medianteRT-PCR 26. La prueba consiste en: preparación de ADN; amplificación por PCR en tiempo real usando reactivos específicos (una mezcla para amplificación bacteriana universal, otra para amplificación bacteriana oportunista y otra para amplificación genómica humana); y la grabación e interpretación de los resultados de amplificación.

La extracción de ADN se realizó utilizando un kit de extracción de ADN (Tabla de Materiales), siguiendo las directrices del fabricante para garantizar una calidad óptima del ADN. La prueba utiliza análisis cualitativo por PCR en tiempo real con una mezcla PCR sellada con parafina. Esta mezcla incluye un Control Interno para verificar la validez de la PCR y un Control de Toma de Muestras (SIC) para evaluar la calidad de la extracción y confirmar suficiente ADN para una amplificación precisa.

La amplificación por PCR se realizó utilizando tiras y condensadores especializados, con reactivos que incluían solución de Taq-polimerasa, mezcla maestra bajo capa de parafina, muestra de ADN y aceite mineral. El programa de PCR es el siguiente: (i) desnaturalización inicial a 80 °C durante 30 s, (ii) desnaturalización a 94 °C durante 1 min 30 s, (iii) 5 ciclos de 30 s a 94 °C (desnaturalización), 15 s a 64 °C (unión y elongación de cebadores, detección de fluorescencia), (iv) 45 ciclos de 10 s a 94 °C (desnaturalización), 15 s a 64°C (unión y alargamiento del cebador, detección de fluorescencia), (v) 5 s a 94 °C (desnaturalización final).

La detección de fluorescencia se realizó en los canales de detección Fam y Hex, excepto en el tubo nº5, que contenía el marcador (donde se detectaba fluorescencia en los canales Fam y Rox). El proceso de amplificación se realizó utilizando cicladores térmicos en tiempo real (Tabla de Materiales). El Software RealTime del instrumento (versión 7.9) se utilizó para el registro automático, la interpretación y el análisis cuantitativo de los datos de amplificación por PCR, permitiendo una estimación precisa de la carga de patógenos.

Las cargas microbianas se representaron como "Lg (equivalentes genómicos/muestra)". Los resultados se presentaron en tres rangos en el informe de la prueba Parodontoscreen para cada paciente, basados en los niveles de carga bacteriana de la siguiente manera: P. gingivalis (normal <5,0; moderado ≥5,0; grave >6,0); T. forsitia (normal <5,0; moderada ≥5,0; grave >5,5); y T. denticola (normal <3,5; moderada ≥3,5; grave >5,0).

Examen clínico

El examen clínico incluyó un examen detallado de la condición periodontal de dientes de estribo y no estribos en T0 y T3. El índice de placa (PI) se evaluó mediante una sonda dental según los criterios de Silness-Loe (0-3)27. La condición gingival se evaluó en seis puntos de la superficie del diente utilizando el índice gingival (IG) según los siguientes criterios: 0, sin inflamación; 1, inflamación leve; 2, inflamación con sangrado gingival durante la sondación; 3, inflamación severa con posible sangrado gingivalespontáneo 28.

La profundidad de sondeo (PD) se midió utilizando la sonda Williams desde el margen gingival hasta el final dela profundidad 29 del bolsillo clínico. La movilidad dental (TM) se determinó por palpación bimanual en las direcciones horizontal y vertical, según el criterio30 de Miller.

Todos los participantes recibieron un tratamiento periodontal no quirúrgico adecuado antes del examen clínico, incluyendo la eliminación de la placa dental y el cálculo mediante desincrustación ultrasónica. También se instruyó a los sujetos en procedimientos de higiene bucal, como cepillarse los dientes y limpiar dentaduras postizas, así como recibir asesoramiento sobre cómo retirar dentaduras por la noche.

Análisis estadístico

Los datos se analizaron utilizando Microsoft Excel e IBM SPSS Statistics para Windows. Se calcularon estadísticas descriptivas (media, desviación estándar y rango) para la edad, las cargas microbianas y los índices periodontales, incluyendo PI, IG, DP y TM. Se evaluaron cambios en los parámetros clínicos y microbiológicos entre antes de (T0) y 3 meses después de la inserción (T3) utilizando la prueba de rango de signos de Wilcoxon para datos no paramétricos emparejados. La prueba exacta de Fisher (simulación de Monte Carlo, bilateral) se utilizó para evaluar datos categóricos relacionados con la clasificación de la carga microbiana. El coeficiente de correlación de rangos (ρ) de Spearman se empleó para evaluar las asociaciones entre las cargas microbianas y los parámetros periodontales. Se consideró estadísticamente significativo un valor p < 0,05 para todos los análisis.

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Resultados

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Demografía de los participantes

La Tabla 1 presenta la distribución de los parámetros demográficos. De los 30 participantes, 16 eran hombres (53,3%) y 14 mujeres (46,7%). La edad media de los participantes era de 64,6 años, con un rango de 48 a 76 años. Detalles adicionales sobre la demografía social se proporcionan en la Tabla 1.

Examen clínico

La tabla 2

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Discusión

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Mantener una higiene bucal óptima se vuelve cada vez más complicado con la edad, debido a la disminución de la respuesta inmunitaria y a las limitaciones mecánicas impuestas por los aparatos protésicos como los DPR con cierre de presión. Estas condiciones favorecen la acumulación de biopelículas patógenas, especialmente alrededor de los dientes de los estribos, que actúan como estructuras portadoras críticas pero también son vulnerables al deterioro periodontal. Este estudio buscó aborda...

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Divulgaciones

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Los autores no tienen conflictos de interés que declarar.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Tubos microcentrífugas de 1,5 mL con bloqueo de seguridadBiotekMT1.5/100
Pinzas dentalesBader17/4021-1
Cicladores térmicos en tiempo real DTprimeADN-TecnologíaCicladores térmicos en tiempo real
IBM SPSS IBM CorpVersión 21.0 
Microsoft Excel Microsoft Office 2010
Puntos en papel (n.º 35; 04 afilados)DiaDentMP210-602
Kit de detección de PCR en tiempo real de ParodontoScreenADN-TecnologíaR1-P808-S3/5EU
Sonda periodontalMEDESIA548/9PT
PREP-GS PLUSADN-TecnologíaP-003/2EUkit de extracción de ADN y nbsp;
Software en tiempo realADN-TecnologíaVersión 7.9
Cloruro de sodio 0,9%VIOSER

Referencias

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