Artículo de investigación

La electroacupuntura orquesta la remodelación de la flora intestinal: un paso adelante para aliviar la vasculopatía inducida por sales

DOI:

10.3791/69783

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13 de enero de 2026

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1Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

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Este estudio investigó el efecto de la electroacupuntura (EA) en la disfunción vascular inducida por alto contenido de sal. La AA revirtió el daño vascular y la disbiosis intestinal, posiblemente modulando microbios intestinales específicos.

Resumen

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Este estudio tiene como objetivo investigar el potencial terapéutico y los mecanismos de la electroacupuntura (EA) para aliviar la disfunción vascular causada por dietas ricas en sales, con especial atención a la modulación de la microbiota intestinal. Dividimos aleatoriamente a 21 ratas en grupos de Control Normal, Modelo de Alto Contenido de Sal e Intervención EA (n = 7 por grupo). El modelo de "síndrome de estasis sanguínea alta en sal" en ratas Wistar fue inducido por perfusión intragástrica del 12% de NaCl. Los tratamientos se realizaron entre las 17:00 y las 19:00 hora de Pekín: las ratas fueron sujetadas con un paño suave, seguidas de estimulación EA de 20 minutos en BL23 y KI3. Tras el experimento, se recogieron sangre de rata, vasos sanguíneos y muestras fecales. Los efectos vasculares se evaluaron mediante pruebas de función coagulante, análisis hemorheológico e evaluación histopatológica arterial. La secuenciación de ADNr16S se utilizó para analizar los cambios en la composición y abundancia de la microbiota intestinal. Los hallazgos revelaron que la ingesta crónica alta de sal alteraba la viscosidad sanguínea, dañaba la integridad endotelial vascular y causaba disbiosis microbiana intestinal. De forma sorprendente, el tratamiento con EA revirtió eficazmente estos cambios patológicos. El análisis de correlación identificó además microbiotas intestinales específicas (por ejemplo, Lachnospiraceae y Ruminococcaceae) que se correlacionaban fuertemente con parámetros alterados de viscosidad sanguínea (P < 0,05). Por lo tanto, el presente estudio concluye que la vasculopatía inducida por dietas con alto contenido de sal puede revertirse mediante el tratamiento de EA, lo que puede atribuirse a la capacidad de EA para regular la microbiota intestinal implicada en el metabolismo de ácidos biliares y la síntesis de ácidos grasos de cadena corta.

Introducción

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La sal dietética desempeña un papel crucial en el mantenimiento del equilibrio de líquidos y la homeostasis celular, aunque el consumo excesivo representa un factor de riesgo bien establecido para las enfermedades cardiovascularesy cerebrovasculares 1. La Organización Mundial de la Salud recomienda limitar la ingesta diaria de sodio a menos de 5 gramos para adultossanos 2. Las investigaciones han demostrado que una dieta alta en sal (HSD) perjudica la función vascular y que las enfermedades cardiovasculares (ECV), la más prevalente en el mundo, suelen ir acompañadas devasculopatía 3. Estos hallazgos subrayan que reparar el daño endotelial vascular causado por la HSD constituye una estrategia crítica para prevenir la progresión de las ECV. El "síndrome de estasis sanguínea" (caracterizado por la circulación sanguínea estancada y la acumulación interna de sangre) se alinea con la disfunción cuantificable de la coagulación en la medicina moderna. Los biomarcadores clave de validación incluyen un tiempo de protrombina (PT) significativamente acortado y un tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT), así como un aumento notable del fibrinógeno (FIB) y del tiempo de trombina (TT). Estos indicadores reflejan un estado hipercoagulable, que corresponde directamente a las características patológicas de la estasis sanguínea.

La microbiota intestinal, que reside en todo el tracto gastrointestinal, actúa como reguladores clave de los procesos inmunometabólicos y la homeostasis intestinal, influyendo en diversas vías fisiológicas ypatológicas 4. La evidencia emergente indica que el consumo excesivo de sal induce disbiosis intestinal y desequilibrio nutricional, desencadenando activación inmunitaria proinflamatoria que se manifiesta como inflamación localizada mientras promueve daño microcirculatorio, remodelación vascular y disfunción endotelialsistémica 1,5. Se ha reportado que el HSD crónico causa un aumento relativo en los niveles de Bacteroides intestinalis, Aspergillus y Prevotella spp. en ratones, y se ha asociado con contribución al desarrollo de hipertensión e inflamaciónvascular 6.

La acupuntura, una piedra angular de la Medicina Tradicional China (MTC), utiliza la inserción precisa de agujas en puntos específicos como una terapia complementaria y alternativa basada en la evidencia en la práctica clínica. Los Institutos Nacionales de Salud (NIH) y la Organización Mundial de la Salud (OMS) reconocen la acupuntura como una intervención clínicamente validada para múltiples condiciones patológicas. La evidencia emergente demuestra que la acupuntura tiene un mecanismo terapéuticodual 7,8, modulando la composición de la microbiota intestinal mientras suprime los mediadores inflamatorios vasculares, mitigando colectivamente la progresión patológica en trastornos relacionados. Es importante destacar que la acupuntura es eficaz para reducir la presión arterial y restaurar la función endotelial en los vasos sanguíneosdañados.

Se eligió la EA frente a la acupuntura manual por sus parámetros de estimulación estandarizados y cuantificables, que reducen la variabilidad dependiente del operador y mejoran la reproducibilidad de los resultados. Por ello, investigamos el efecto del tratamiento con EA en la microbiota intestinal en ratas con el modelo de síndrome de estasis sanguínea alta en sal (HSBS) y evaluamos la eficacia de EA en la vasculopatía inducida por sales elevadas mediante reología sanguínea y cambios histopatológicos vasculares. Para comprender mejor el papel de la microbiota intestinal en la mejora de las lesiones vasculares mediante la terapia con EA, realizamos un análisis de correlación entre diferentes géneros de microbiota intestinal y la tasa de corte de sangre total y la sedimentación sanguínea.

Por ello, planteamos la hipótesis de que la EAE alivia la vasculopatía inducida por el HSD al restaurar la homeostasis de la microbiota intestinal. Para comprobar esto, nuestro objetivo: (i) cuantificar los efectos protectores de la EA sobre la función y estructura vascular, y (ii) identificar los taxones microbianos intestinales específicos modulados por EA que se correlacionan con estas mejoras. Además, el análisis de correlación de Pearson identificó relaciones significativas microbiota-vascular, particularmente entre fluctuaciones diferencialmente abundantes de géneros y anomalías hemorológicas. Hasta donde sabemos, este es el primer estudio que explora los mecanismos protectores de la EA en la mejora de la vasculopatía inducida por dietas ricas en sales desde la perspectiva de la microbiota intestinal. El diseño experimental de este estudio se muestra en la Figura 1.

Figura 1
Figura 1: Diagrama técnico experimental. Por favor, haga clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.

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Protocolo

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Todo el experimento se llevó a cabo en el Centro Experimental de la Escuela de Medicina Básica de la Universidad de Medicina Tradicional China de Chengdu. Todos los procedimientos de bienestar animal y experimentales fueron aprobados por el Comité de Ética en Bienestar Animal de Laboratorio de la Universidad de Medicina Tradicional China de Chengdu (Ética nº 2024078). Los experimentos se realizaron siguiendo estrictamente la Guía del NIH para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (revisión de 1986, Publicación 86-23).

Animales y dieta
Las ratas Wistar libres de patógenos específicos (SPF) machos y hembras, de entre 6 y 8 semanas, pesaban 200 ± 20 g. Todas las ratas se alojaban en habitaciones bien ventiladas con un ciclo de 12 horas de luz a oscuridad y tenían acceso libre a comida y agua.

Modelos y grupos
Los modelos animales se inducieron con referencia a la experiencia previa deinvestigación 10. Tras un periodo de aclimatación de 7 días, 21 ratas Wistar (50% de distribución macho/hembras) fueron asignadas aleatoriamente a tres grupos experimentales (n = 7/grupo) utilizando el generador de números aleatorios en Excel, manteniendo aproximadamente el equilibrio entre ratas macho y hembra en cada grupo para minimizar el impacto del género en losresultados. Control normal (NC): Recibió una dosis gástrica diaria (1 mL/100 g) de agua purificada. Modelo de alta sal (HS) e intervención de EA (EA): Administradas soluciones de NaCl al 12% (1 mL/100 g) mediante gavage diario. Todas las intervenciones se mantuvieron durante 30 días consecutivos.

Tratamiento de EA
El tratamiento se inició al día siguiente de la modelización exitosa. Se eligió la EA frente a la acupuntura manual por sus parámetros de estimulación estandarizados y cuantificables, que reducen la variabilidad dependiente del operador y mejoran la reproducibilidad de los resultados. Las ubicaciones de BL23 (Shenshu, meridiano de vejiga) y KI3 (Taixi, meridiano renal) se determinaron en base a los criterios de localización de puntos de acupuntura en ratas de la Sociedad China de Acupuntura yMoxibustión 12. BL23 está situada a 6 mm lateral a la línea media dorsal, inferior a la segunda vértebra lumbar. KI3 se localizó en la depresión media entre el punto más alto del maléolo medial y el borde posterior del tendón de Aquiles. El vello local en los puntos de acupuntura fue retirado y esterilizado. Se usaron agujas estériles desechables de acupuntura (0,18 mm × 13 mm) para perforar verticalmente los puntos de acupuntura, con profundidades de inserción de 4-6 mm para BL23 y 3-5 mm para KI3. El clip positivo del electrodo del dispositivo de electroacupuntura estaba conectado al mango de la aguja de la aguja en BL23 por un lado, y el clip negativo del electrodo al de KI3 en el mismo lado. Parámetros del dispositivo de electroacupuntura: Forma de onda: Onda densa-dispersa (10/50 Hz); Frecuencia: 5 s para onda dispersa, 10 s para onda densa; Intensidad: 1-2 mA, ajustada según las respuestas convulsivas y dolorosas de las ratas (gritos, comportamientos de resistencia); Ancho de pulso: ≤ 1 MS. Protocolo de estimulación: La intervención se realizó diariamente de 17:00 a 19:00 (hora de Pekín), con una duración de 20 minutos cada vez. Ciclo: Un ciclo de tratamiento consistía en 7 días, con un total de 4 ciclos y 1 día de descanso entre cada ciclo. El proceso específico se muestra en la Figura 2 (Creado con BioGDP.com13).

Figura 2
Figura 2: Cronología experimental. Por favor, haz clic aquí para ver una versión ampliada de esta figura.

Recogida y preparación de muestras
Un mes después de la intervención de la aguja, se recogió sangre venosa orbitaria de ratas antes de la intervención de la EA. Las muestras de plasma se extrajeron por centrifugación a 1.000 × g durante 15 minutos a 4 °C. Al finalizar el tratamiento, se recogieron heces frescas de cada grupo de ratas. Las ratas fueron anestesiadas con isoflurano emulsionado al 10% (30 mg/kg) y eutanasiadas. Se abrió la cavidad abdominal y se recogieron aproximadamente 5 mL de sangre de la aorta abdominal para medir la viscosidad de la tasa de cizalladura de sangre total (WBSRV) en un plazo de 4 horas. Se recogieron tejidos de la aorta abdominal para análisis histopatológico. Todas las muestras se almacenaban a -80 °C para su uso posterior.

Prueba WBSRV
Tras completar la modelización, se recogieron aproximadamente 4-5 mL de sangre total de la aorta abdominal de ratas utilizando una aguja de extracción de sangre y se introdujeron en tubos anticoagulantes de heparina sódica. Los tubos se agitaron suavemente para asegurar una mezcla exhaustiva de las muestras de sangre con el anticoagulante. En menos de 4 horas, se midieron el WBSRV y la tasa de sedimentación de eritrocitos (VES) utilizando un analizador hemorológico totalmente automatizado.

Histopatología vascular
Los tejidos vasculares se fijaron en solución de paraformaldehído al 4% durante al menos 24 horas y se seccionaron a un grosor de 3 μm para la tinción de hematoxilina-eosina (HE). Las imágenes se capturaron con aumentos del 100× y 400×.

Secuenciación de ADNr16S
Se extrajo ADN genómico de muestras fecales de cada grupo. Las secuencias cebadoras V3-V4 (341F: 5'-CCTACGGGNGGCWGCAG-3'; 805R: 5'-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3') se utilizaron para la amplificación por PCR del ADN total. El programa de amplificación por PCR fue el siguiente: predesnaturalización a 98 °C durante 30 s, desnaturalización a 98 °C durante 10 s, recocido a 54 °C durante 30 s y extensión a 72 °C durante 45 s, con un total de 32 ciclos, seguida de una extensión final a 72 °C durante 10 min. Los productos de PCR se purificaron y cuantificaron. La secuenciación de extremos emparejados (2×250 bp) se realizó en la plataforma de secuenciación NovaSeq 6000. Las lecturas de extremo emparejado se fusionaron y filtraron para obtener datos de alta calidad. Usando el plugin DADA2 en QIIME 2, se realizaron filtros de longitud y reducción de ruido. Este proceso generó variantes de secuencia de amplicones (ASVs) y tablas de abundancia de ASV, seguidas de la eliminación de los ASV singleton. Se realizaron anotaciones taxonómicas y perfiles de abundancia basándose en el archivo de secuencias ASV utilizando la base de datos SILVA para investigar diferencias de especies y la composición de comunidades entre muestras. La diversidad de especies y los cambios en la abundancia relativa se evaluaron mediante análisis de diversidad α y diversidad β, y se realizó visualización de datos en este sitio web (https://www.omicstudio.cn/home).

Análisis estadísticos
Se realizaron análisis estadísticos utilizando SPSS 26.0. Se consideró estadísticamente significativo un valor de P < 0,05. Para datos con varianzas homogéneas, se utilizó ANOVA unidireccional para comparaciones entre grupos, seguida de pruebas de diferencia mínima significativa (LSD) post-hoc si se encontraron diferencias significativas. Para datos con varianzas heterogéneas, se utilizó la ANOVA unidireccional no paramétrica de Kruskal-Wallis por rangos. Se aplicó el análisis de prueba Mann-Whitney U para evaluar cambios en la composición de la microbiota intestinal y la estructura de la comunidad. Se utilizó el análisis de correlación de rangos de Pearson para evaluar las correlaciones entre bacterias intestinales diferencial abundantes y otros indicadores. Se empleó el análisis de correlación de Pearson porque los datos cumplían con las suposiciones de normalidad y linealidad, que fueron validadas por la prueba de Shapiro-Wilk y la prueba de Durbin-Watson. Se generaron gráficos estadísticos y mapas de calor usando GraphPad Prism 10.

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Resultados

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Validación del modelo animal
Los cuatro parámetros de coagulación desempeñan un papel fundamental en la investigación de lesiones vasculares al monitorizar anomalías en la función de coagulación estrechamente vinculadas a cambios patológicos vasculares. La evaluación posterior a la modelización de la sangre del plexo venoso retroorbitario demostró alteraciones significativas en los parámetros de coagulación (PT, APTT, FIB, TT) entre los grupos HS/EA frente a controles NC (Figura 3...

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Discusión

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Las lesiones vasculares son un factor crítico en el desarrollo y manifestaciones patológicas de diversas ECV y trastornos metabólicos. Sus efectos perjudiciales incluyen disfunción vascular, coagulación sanguínea anormal, deposición lipídica y formación de placa, que pueden provocar elevación de la presión arterial, trombosis y formación de placa arterial, resultando finalmente en variasECV 14,15,16.<...

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Divulgaciones

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Los autores no declaran conflictos de interés.

Agradecimientos

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Esta investigación fue financiada por el Departamento Provincial de Ciencia y Tecnología de Sichuan (Subvención nº 2024NSFSC0717). Gracias a Figdraw por la ayuda prestada en la preparación de la figura.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Agujas de acupunturaSuzhou Medical Supplies Factory Co., Ltd.2420590,18 y veces; 13 mm
Kit de ensayo de tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) (método de coagulación)Beijing Succeeder Technology Inc.R21D24C4
Cuentas AMPure XPBeckman Coulter GenómicaA63881
Analizador automático de coagulaciónBeijing Succeeder Technology Inc.SF-8050
Kit de ensayo de fibrinógeno (FIB) (método de coagulación)Beijing Succeeder Technology Inc.R31D24D2
Comprobador de Reología Sanguínea totalmente automáticoBeijing Succeeder Technology Inc.SA-5600
GraphPad Prism 10GraphPad Software, Inc.
H& Solución de tinción con EWuhan Saiweier Biotechnology Co., LtdG1005
Kit de cuantificación de bibliotecas IlluminaKapa Biosciences7960166001
IsofluranoCiencias de la Vida RWDR510-22-10100 mL
Kit de extracción de ADN genómico de heces a base de perlas magnéticasBiotekAU46111-96
Microscopio vertical de luz blanca Nikon Eclipse Ci-LNikon
QIIME 2https://qiime2.org/
Dispositivo electrónico de acupuntura SDZ-II HuatuoSuzhou Medical Supplies Factory Co., Ltd.SDZ-II
Base de datos SILVAVersión 138, https://www.arb-silva.de/
Cloruro de sodioChengdu Jinshan Chemical Reagents Co., Ltd.20231008500 g
Ratas Wistar con SPFSPF (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SCXK (Pekín) 2024-0001
Kit de ensayo Trombo Time (TT) (Método de coagulación)Beijing Succeeder Technology Inc.R4D24E1

Referencias

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