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Artículo de investigación
* These authors contributed equally
Este estudio estableció un modelo novedoso in vivo beagle de insuficiencia renal moderada crónica combinada con fibrilación auricular mediante embolización transcatéter de la arteria renal y estimulación rápida del auricular, y demostró que esta combinación deterioraba gravemente la función endotelial auricular izquierda, aumentaba la actividad procoagulante y aumentaba el riesgo de trombosis a través de vías inflamatorias y mediadas por RAAS.
La coocurrencia de fibrilación auricular (FA) e insuficiencia renal (IR) representa un fenómeno clínicamente complejo con alta prevalencia. Este estudio investigó el impacto de la IR moderada crónica combinada con FA en la función endotelial auricular izquierda en los beagles. La IR crónica se indujo mediante embolización por catéter de la rama principal de la arteria renal izquierda utilizando gránulos de esponja de gelatina, manteniendo a los animales durante 3 meses para permitir el desarrollo de daño parenquimatoso renal crónico. La FA, posteriormente, fue inducida por estimulación auricular rápida y continua (duración básica del ciclo, 60 ms; voltaje, 4 veces el umbral de estimulación diastólico; 180 min). Los cambios histológicos se evaluaron mediante tinción de hematoxilina y eosina. Se examinaron parámetros asociados con la función endotelial, la coagulación, la fibrinólisis, la inflamación y la actividad del sistema renina–angiotensina–aldosterona (RAAS) en el plasma y los tejidos cardíacos mediante ensayo inmunoenzimático vinculado, reacción en cadena cuantitativa en tiempo real de la polimerasa y Western bloting. Los resultados demostraron el establecimiento exitoso de un modelo de daño renal crónico con IR moderado, confirmado por un elevado significativo de la creatinina plasmática, el nitrógeno ureico y una reducción en la eliminación de la creatinina. La función endotelial auricular izquierda se vio significativamente afectada en beagles con IR y FA combinados, acompañada de efectos procoagulantes potenciados y disminución de la fibrinólisis. Los marcadores inflamatorios se elevaron tras el procedimiento de IR o la inducción de la FA y se intensificaron aún más en el grupo combinado IR+FA. Además, la actividad del RAAS, evidenciada por el aumento de los niveles de renina y aldosterona, se incrementó tras la IR y se incrementó aún más tras la combinación con la FA. En resumen, este estudio estableció con éxito un modelo animal in vivo de infertilidad crónica moderada combinada con FA en los beagles, demostrando que esta combinación alteró significativamente la función endotelial auricular izquierda y aumentó el riesgo trombótico.
La fibrilación auricular (FA), la forma más prevalente de arritmia cardíaca sostenida, está estrechamente relacionada con resultados clínicos desfavorables. Debido a las características fisiopatológicas sistémicas de la FA, esta arritmia frecuentemente presenta una interacción fisiopatológica compleja con una variedad de comorbilidades concomitantes, incluyendo deterioro cognitivo, depresión y emboliasistémica 1. La enfermedad renal crónica (ERC) ha sido identificada como un factor de riesgo independiente tanto para el desarrollo de FA como para la aparición de eventos tromboembólicos. Aproximadamente entre el 15% y el 20% de los pacientes diagnosticados con ERC se ven afectados por FA, mientras que la proporción de pacientes que reciben terapia de reemplazo renal que desarrollan FA oscila entre el 15% y el 40%. Mientras tanto, aproximadamente entre el 30% y el 60% de los pacientes diagnosticados con FA presentan simultáneamente insuficiencia renal (IR)3 de leve a moderada. Por lo tanto, la coocurrencia de FA e IR se ha convertido en un fenómeno clínico complejo con una alta prevalencia entre las poblaciones de pacientes. La relación bidireccional entre FA e IR aumenta severamente el riesgo de incidencia de FA y también agrava la progresión de la insuficiencia renal, contribuyendo finalmente a peores resultadosclínicos 4.
En estudios previos, a menudo se han utilizado ratas para establecer modelos de IR; sin embargo, su pequeño tamaño cardíaco los hace inadecuados para experimentos electrofisiológicos cardíacos. Los perros, en cambio, se emplean frecuentemente en modelos animales de tamaño medio y grande de insuficiencia renal, siendo la nefrectomía el método principalde modelización 5. No obstante, este enfoque se asocia a una tasa de éxito limitada en la modelización. Más importante aún, dado que la nefrectomía no induce directamente daño parénquimoso renal, no logra simular eficazmente los procesos patológicos de insuficiencia renal. Por lo tanto, es esencial establecer un modelo animal adecuado con RI y FA. Cabe destacar que Liang Z et al. establecieron con éxito un modelo de IR leve en beagles mediante embolización de pequeñas ramas de la arteria renal en el riñón izquierdo durante dos semanas usando gránulos de esponja de gelatina, que se asoció con AF6; sin embargo, un periodo de observación de dos semanas generalmente se considera insuficiente para simular la ERC clínica, ya que las características distintivas de la nefropatía crónica, incluyendo la glomerulosclerosis y la fibrosis tubulointersticial, requieren períodos prolongados de daño parenquimatal renal sostenido para desarrollarse plenamente en modelosanimales 7,8. Esto pone de manifiesto la necesidad de un modelo crónico con un periodo de observación más largo que recapitule de forma más fiel la naturaleza progresiva de la ERC clínica.
Por ello, el presente estudio pretendía establecer un modelo animal de IR moderada crónica combinada con FA mediante embolización por catéter del tronco principal de la arteria renal izquierda en beagles y manteniendo a los animales durante 3 meses para permitir el desarrollo de una patología renal crónica establecida. Además, exploramos la patogénesis de la disfunción endotelial auricular izquierda bajo estas condiciones patológicas, poniendo a prueba la hipótesis de que la combinación de una infección inflamatoria moderada crónica y la FA afectaría sinérgicamente la función endotelial auricular izquierda mediante una inflamación aumentada y activación del RAAS, incrementando así el riesgo de trombosis más allá de cualquiera de las dos condiciones por sí solas. Estos hallazgos pueden aportar una mayor comprensión de la IR crónica combinada con FA y sentar las bases para futuras investigaciones sobre los beneficios de la terapia anticoagulante en pacientes con FA e IR.
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Este estudio se llevó a cabo en estricta conformidad con las recomendaciones de la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio de los Institutos Nacionales de Salud (Publicación nº 85-23, revisada en 1996). El protocolo del estudio fue aprobado por el Comité de Cuidado y Uso Institucional de Animales del Hospital Anzhen de Pekín (Aprobación nº 81700293). El protocolo del estudio fue revisado y aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de nuestra institución. Se hicieron todos los esfuerzos para minimizar el sufrimiento animal y reducir el número de animales utilizados en el estudio. Los reactivos y el equipo utilizado se enumeran en la Tabla de Materiales.
1. Modelo animal y diseño experimental
2. Embolización de la arteria renal para la inducción de una IR crónica moderada
Se introdujo un catéter multipropósito 5F a través de la vaina arterial y se avanzó bajo guía fluoroscópica de brazo C hacia la aorta abdominal. Se realizó una canulación selectiva de la arteria renal izquierda y se realizó una angiografía basal de la arteria renal inyectando entre 5 y 8 mL de medio de contraste yodado no iónico a una velocidad de 3 mL/s para visualizar el árbol arterial renal completo. La colocación exitosa del catéter se verificó mediante la demostración de toda la arteria renal izquierda y sus ramas en las imágenes angiográfadas.
Posteriormente, la IR se indujo mediante embolización transcatéter de la rama principal de la arteria renal izquierda utilizando gránulos de esponja de gelatina absorbibles (diámetro de 50 mg). Los gránulos de esponja de gelatina se prepararon como una suspensión mezclando aproximadamente 50 mg de gránulos con una mezcla 1:1 de medio de contraste y solución fisiológica normal hasta un volumen total de aproximadamente 2–3 mL. La suspensión de embolización se inyectó lentamente mediante inyección manual a través del catéter durante aproximadamente 2–3 minutos bajo monitorización fluoroscópica continua. La embolización exitosa se confirmó mediante una angiografía repetida de la arteria renal izquierda, que demostró la ausencia de opacación arterial distal en las ramas embolizadas. Tras la confirmación angiográfica, se retiró el catéter y la vaina, y se reparó la arteria femoral con una sutura de polipropileno 6-0. La herida quirúrgica se cerró en capas y se permitió que los animales se recuperaran bajo una vigilancia estrecha.
Para el grupo de control y el grupo FA (procedimiento simulado), se realizó el mismo proceso de cateterismo y se inyectó un volumen igual (2–3 mL) de solución salina normal en la arteria renal izquierda a través del catéter multipropósito tras la angiografía de la arteria renal.
3. Inducción de la FA mediante estimulación auricular rápida
Tres meses después del procedimiento de IR (o procedimiento simulado), la FA se indujo en el grupo de FA y en el grupo de IR+FA. La FA se indujo en un total de 12 beagles (n = 6 en el grupo FA y n = 6 en el grupo RI+AF). Tras la reanestesiación y el acceso vascular como se ha descrito anteriormente, se canuló la vena femoral derecha para la inserción de un catéter. Se avanzó un catéter cuadripolar 6F (véase Tabla de Materiales) bajo guía fluoroscópica y se posicionó en la pared lateral de la aurícula derecha. La correcta colocación del catéter se confirmó mediante el registro de electrogramas auriculares característicos en el canal intracardíaco, mostrando desviaciones auriculares claras y agudas. El umbral de estimulación diastólica se determinó disminuyendo progresivamente el voltaje de salida del estimulador en decrementos de 0,1 V desde 5 V hasta que se observó la pérdida de captura auricular; El voltaje más bajo que lograba una captura auricular consistente 1:1 se registró como el umbral de estimulación diastólica. El estimulación auricular rápida (duración básica del ciclo, 60 ms, correspondiente a una frecuencia de 1000 latidos por minuto; ancho de pulso de salida, 2 ms; voltaje, 4 veces el umbral de estimulación diastólico, típicamente equivalente a 2–4 V) se administró de forma continua durante 180 minutos usando un estimulador cardíaco para inducir la FA, como se describióanteriormente 9. La inducción exitosa de la FA se confirmó por la aparición de intervalos R-R irregulares sostenidos en el ECG superficial y potenciales auriculares rápidos y desorganizados en el electrograma intracardíaco que persistieron al menos 1 minuto tras una breve suspensión del estimulante. Los 12 beagles (100%) lograron una FA sostenida al completar el protocolo de estimulación. La duración media de la FA sostenida tras el cese del ritmo de estimulación osciló entre 3 y 8 minutos antes de la cardioversión espontánea hasta el ritmo paranasal.
Es importante señalar que, a diferencia de los protocolos de estimulación por ráfagas (típicamente ráfagas de 3–10 s) usados para evaluar la susceptibilidad a la FA, el enfoque continuo de estimulación auricular rápida de 180 minutos empleado en este estudio fue diseñado específicamente para modelar la FA sostenida y provocar una remodelación molecular temprana. Este protocolo ha sido bien establecido y ampliamente validado en la investigación de la FAcanina 9,10.
4. Diseño experimental y asignación en grupo
Los animales experimentales se asignaron aleatoriamente a cuatro grupos (n = 6 por grupo): grupo control, grupo RI, grupo FA y grupo RI combinado con FA (RI+FA). Los Beagles del grupo RI y del grupo RI+FA se sometieron al procedimiento de embolización de IR al inicio, y los beagles del grupo Control y del grupo FA recibieron la inyección simulada de solución salina normal en la arteria renal. Tres meses después, la FA se indujo en los grupos de FA e IR+FA, como se describió anteriormente. En la Figura 1 se presenta una visión esquemática de todo el diseño experimental y la cronología.
5. Determinación de la eliminación de creatinina
La aclaración de creatinina (CCr) se determinó mediante el método de eliminación endógena decreatinina de 30 minutos 11. Brevemente, tras la anestesia, se insertó un catéter de Foley en la vejiga urinaria en condiciones asépticas y la vejiga se vació por completo. Se inició entonces el periodo de recogida de orina de 30 minutos, durante el cual toda la producción de orina se recogía mediante el catéter en un recipiente calibrado. Al final del periodo de recogida de 30 minutos, la vejiga se vaciaba de nuevo para asegurar la recuperación completa de la orina. Simultáneamente, se extrajo una muestra de sangre en el punto medio de la vena yugular para determinar la creatinina plasmática. La CCr se calculó usando la fórmula estándar: CCr (mL/min/kg) = (concentración de creatinina en la orina × volumen urinario) / (concentración plasmática de creatinina × tiempo de recolección), normalizado al peso corporal.
6. Recogida de tejidos y muestras de sangre
Se recogieron muestras de sangre de la vena yugular al inicio y antes de sacrificarlas en tubos separados de sueroanticoagulado con EDTA y suero simple 11. Finalmente, todos los beagles fueron eutanasiados con una inyección intravenosa de una dosis letal de pentobarbital sódico a una dosis de 150 mg/kg antes de la recuperación de la anestesia. Se extrajeron riñones para el examen histológico. Se extrajeron corazones y el apéndice auricular izquierdo (LAA) fue cuidadosamente disecado, congelado rápidamente en nitrógeno líquido en menos de 5 minutos tras la escisión y almacenado a −80 °C hasta el análisis molecular. La LAA fue seleccionada para análisis tisular porque es el lugar más común de formación de trombos en pacientes con FA y, por tanto, representa la ubicación anatómica clínicamente relevante para evaluar la función endotelial y el riesgo de trombosis.
7. Observación histológica
Los tejidos renales se fijaron con paraformaldehído neutral amortiguado al 10% durante 24 horas, se deshidrataron mediante una serie de etanol graduado (70%, 80%, 90%, 95% y 100% etanol, 1 hora cada uno), se limpiaron con xileno (dos cambios, 30 min cada uno), se incrustaron en parafina y se cortaron en rodajas de 5 μm de grosor usando un microtomo rotatorio. Posteriormente, las cortes se teñían con HE para observar cambios histopatológicos. Específicamente, las secciones se desparafinizaron en xileno (dos cambios, cada 10 minutos), se rehidrataron mediante una serie descendente de etanol, se tiñeron con solución de hematoxilina durante 5 minutos, se diferenciaron en ácido clorhídrico–etanol al 1% durante 30 segundos, se enjuagaron con agua del grifo corriente durante 10 minutos, se contra-tintaron con solución de eosina durante 2 minutos, se deshidrataron, se limpiaron y se montaron con bálsamo neutro. Las secciones se examinaron bajo un microscopio óptico con aumentos de 100× y 400×.
8. Ensayo inmunoenzimático ligado a enzimas (ELISA)
Las muestras de sangre se centrifugaron a 3000 × g a 4 °C durante 20 minutos, y luego se recogió el sobrenadante (plasma) y se almacenó a −80 °C hasta el análisis. Se examinaron los niveles plasmáticos de creatinina, nitrógeno ureático, factor de Von Willebrand (vWF), trombomodulina (TM), dimetilarginina asimétrica (ADMA), óxido nítrico (NO), inhibidor activador de plasminógeno-1 (PAI-1), activador de plasminógeno tisular (t-PA), factor de necrosis tumoral α (TNF-α), proteína C-reactiva de alta sensibilidad (hs-CRP), interleucina-6 (IL-6), renina y aldosterona (ALD) utilizando kits comerciales de ELISA según las instrucciones del fabricante. Brevemente, se añadieron 100 μL de muestra o estándar de plasma a microplacas de 96 pozos recubiertas con anticuerpos, incubados a 37 °C durante 2 horas, lavados cuatro veces con tampón de lavado, incubados con anticuerpo de detección biotinilado durante 1 hora a 37 °C, lavados de nuevo, incubados con conjugado estreptavidina-HRP durante 30 minutos a 37 °C, seguidos del desarrollo del sustrato TMB durante 15–20 minutos en la oscuridad. La reacción se detuvo con 50 μL de solución de parada y la absorbancia se midió a 450 nm usando un lector de microplacas. Todas las muestras se analizaron en duplicado.
9. PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR)
La extracción del ARN total de los tejidos LAA se realizó utilizando reactivo TRIzol, seguida de la detección de la pureza y concentración del ARN mediante un espectrofotómetro a proporciones de absorbancia de 260/280 nm (rango aceptable 1,8–2,0). Un total de 1 μg de ARN se transcribió inversamente en ADN complementario (cDNA) utilizando un kit de reactivos RT de PrimeScript. La reacción de transcripción inversa se realizó a 37 °C durante 15 minutos, seguida de la inactivación a 85 °C durante 5 segundos. Posteriormente se realizó PCR cuantitativa en tiempo real en el sistema de PCR utilizando SYBR Green Master Mix. El programa de ciclos térmicos consistía en una desnaturalización inicial a 95 °C durante 5 minutos, seguida de 40 ciclos de desnaturalización a 95 °C durante 10 s y recocido/extensión a 60 °C durante 30 s. La señal de fluorescencia se detectaba al final de cada paso de extensión utilizando el canal SYBR Green. Los valores del ciclo umbral (Ct) se determinaban automáticamente por el software del instrumento. Los cambios en el pliegue de los niveles de ARNm se determinaron mediante el método 2−ΔΔCt . β-actina actuaba como control interno. Todas las muestras se analizaron en triplicado.
10. Manchado occidental
La proteína total se extrajo de los tejidos LAA mediante un tampón de lisis con ensayo de radioinmunoprecipitación (RIPA) (compuesto por 50 mM de Tris-HCl, pH 7,4, 150 mM de NaCl, 1% NP-40, 0,5% desoxicolato de sodio y 0,1% SDS, suplementado con cóctel de inhibidores de proteasa y fosfatasa; véase Tabla de Materiales). Los tejidos se homogeneizaron sobre hielo y centrifugaron a 12.000 × g a 4 °C durante 15 minutos, y se recogió el sobrenadante. La concentración de proteínas se cuantificó utilizando un kit de análisis de proteínas BCA. Posteriormente, se sometieron cantidades iguales de proteína (30 μg por carril) a un 12% de SDS-PAGE para separación a 80 V durante 30 minutos (gel de apilamiento), seguido de 120 V durante aproximadamente 60 minutos (gel de resolución) y después se transfirieron a membranas de fluoruro de polivinilideno (PVDF) a 300 mA durante 90 minutos en tampón de transferencia (25 mM Tris, 192 mM glicina, 20% metanol). Las membranas se bloquearon con leche desnatada al 5% disuelta en TBST (solución fisiológica con 0,1% Tween-20) a temperatura ambiente durante 2 horas, y luego se sondearon con anticuerpos primarios (véase la Tabla de materiales para fuentes de anticuerpos, números de catálogo y diluciones) a 4 °C durante la noche. Al día siguiente, las membranas se lavaron tres veces con TBST (10 min cada una) e incubaron con el anticuerpo secundario conjugado con HRP correspondiente (véase Tabla de Materiales) durante 2 horas a temperatura ambiente. Tras tres lavados adicionales de TBST (10 min cada uno), se visualizaron los blots con un kit de quimioluminiscencia mejorada (ECL) utilizando un sistema de imagen quimioluminiscencia. La gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) actuó como control interno. Se realizó un análisis densitométrico utilizando el software ImageJ, y los niveles relativos de expresión proteica se normalizaron a GAPDH. Los pesos moleculares aproximados de las proteínas detectadas fueron los siguientes: vWF (~260 kDa), TM (~60 kDa), sintasa endotelial de óxido nítrico (eNOS, ~130 kDa), sintasa inducible de óxido nítrico (iNOS, ~130 kDa), PAI-1 (~45 kDa), t-PA (~70 kDa) y GAPDH (~36 kDa). Imágenes de Western blot de cuerpo entero y sin recortar se proporcionan en la Figura Suplementaria 1 y la Figura Suplementaria 2.
11. Análisis estadístico
Todos los valores se analizaron mediante un software estadístico y de gráficos y se presentan como media ± desviación estándar (SD). La normalidad de la distribución de los datos se evaluó utilizando la prueba de Shapiro-Wilk antes del análisis paramétrico. La homogeneidad de la varianza se evaluó mediante la prueba de Levene. Para los datos que cumplían con las suposiciones de normalidad y homogeneidad de la varianza, se realizó una comparación de diferencias empleando ANOVA unidireccional seguida de la prueba post hoc de Dunnett para comparaciones múltiples con el grupo de control. Para los datos que no cumplían la suposición de normalidad, se aplicó la prueba de Kruskal-Wallis no paramétrica seguida de la prueba post hoc de Dunn. En este estudio, todas las variables cumplieron las suposiciones de normalidad e igualdad de varianza; por lo tanto, se aplicaron análisis paramétricos en todo el proceso. En el software de análisis, los datos se introdujeron en tablas de datos agrupadas, se seleccionó ANOVA unidireccional desde el menú de Análisis en Columnas, se eligió la prueba de Dunnett para comparaciones post hoc y el umbral de significación se estableció en p < 0,05.
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Modelo animal de IR y FA crónicas moderadas
Una visión general esquemática del diseño experimental y la cronología se presenta en la Figura 1. Las imágenes representativas de la angiografía de la arteria renal izquierda antes y después de la embolización por catéter, mostradas en la Figura 2A,B, revelaron que las pequeñas ramas de la arteria renal quedaron con éxito o...
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El presente estudio estableció un modelo animal in vivo de RI moderada combinada con FA y exploró la patogénesis de la disfunción endotelial del auricular izquierdo bajo estas condiciones patológicas. Los principales hallazgos de este estudio son los siguientes: en primer lugar, la embolización de la arteria renal principal izquierda durante 3 meses en beagles indujo con éxito una infección inflamatoria moderada. En segundo lugar, un modelo AF se estableció efectivamente en los ...
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Los autores no declaran intereses en competencia.
Este trabajo fue apoyado por el Proyecto Mayor de Ciencia y Tecnología Nacional de Enfermedades Crónicas No Transmisibles (Nº 2024ZD052500, Nº 2024ZD0521504), la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Subvenciones Nº 81700293 y Nº 81970272) y la Financiación de Investigación de Alto Nivel del Hospital Anzhen de Pekín (Proyecto de Financiación Nº 2025AZB5005).
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 6-0 Sutura de polipropileno | Ethicon (Johnson & Johnson) | 8706H | Para reparación de arteria femoral |
| Catéter multiusos 5F | Cordis (Cardinal Health) | 521-550S | Para canulación y embolización de la arteria renal |
| Catéter con electrodo cuadripolar de 6F | St. Jude Medical | 401443 | Para estimulación del aurículo derecho |
| Vaina introductoria vascular de 6F | Terumo | RS*A60K10SQ | Para acceso a la arteria femoral |
| Sistema de PCR en tiempo real ABI 7500 | Applied Biosystems (Thermo Fisher Scientific) | 4351105 | Para ciclos térmicos y detección de fluorescencia en qRT-PCR |
| Granulos de esponja de gelatina absorbible (50 mg de diámetro) | Jinling Pharmaceutical | — | Para embolización transcatéter de la arteria renal; preparado como suspensión con medio de contraste y solución salina (1:1) |
| Kit de ELISA para ADMA (canino) | Cusabio | CSB-E09297c | Para medición de arginina dimetilasimétrica asimétrica en plasma |
| Kit de ELISA para aldosterona (canino) | Cusabio | CSB-E08014c | Para medición de aldosterona en plasma |
| Kit de ensayo de proteínas BCA | Thermo Fisher Scientific | 23225 | Para cuantificación de concentración de proteínas |
| Beagles (macho, 4–5 años, 10–12 kg) | Shanghai Jiao Tong University Agricultural Experimental Animal Farm Co., Ltd. | — | Beagles machos sanos; alojados individualmente en condiciones estándar |
| Sistema de fluoroscopia de brazo C | GE Healthcare | OEC 9900 Elite | Para guía fluoroscópica durante cateterización y angiografía |
| Sistema de imagen por quimioluminiscencia | Bio-Rad | ChemiDoc XRS+ | Para visualización de bandas en Western blot |
| Kit de ELISA para creatinina (canino) | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | C011-2-1 | Para medición de creatinina en plasma |
| Tubo endotraqueal con manguito (ID 7.0–8.0 mm) | Covidien (Medtronic) | 86449 | Para intubación endotraqueal y ventilación mecánica |
| Estimulador cardíaco DF-5A | Suzhou Dongfang Electronic Technology Research Institute | DF-5A | Para estimulación auricular rápida; configuración: BCL 60 ms, ancho de pulso 2 ms, voltaje 4× umbral |
| Sustrato para Western Blotting por ECL | Thermo Fisher Scientific | 32106 | Kit de quimioluminiscencia mejorada para visualización en blot |
| Tubos anticoagulantes con EDTA | BD Vacutainer | 367835 | Para recolección de sangre (separación de plasma) |
| Anticuerpo primario para eNOS (conejo) | Cell Signaling Technology | 32027 | Diluición 1:1000; para Western blotting (~130 kDa) |
| Solución de eosina Y (acuosa) | Solarbio | G1100 | Para contracoloración H&E (2 min) |
| Catéter urinario Foley (8 Fr) | C.R. Bard | 0165SI08 | Para recolección de orina cronometrada durante la determinación de CCr |
| Anticuerpo primario para GAPDH (conejo) | Cell Signaling Technology | 5174 | Diluición 1:1000; control interno para Western blotting (~36 kDa) |
| GraphPad Prism (versión 8.0) | GraphPad Software | — | https://www.graphpad.com; para análisis estadístico (ANOVA de una vía, prueba de Dunnett) |
| Solución de hematoxilina (Harris) | Solarbio | G1140 | Para tinción nuclear H&E (5 min) |
| Inyección de heparina sódica (no fraccionada) | Changzhou Qianhong Biopharma | H32022088 | 4000 UI diluidas en 10 mL de solución salina normal; para anticoagulación durante cateterización |
| Anticuerpo secundario conjugado con HRP para IgG de cabra anti-ratón | Cell Signaling Technology | 7076 | Diluición 1:5000; para Western blotting |
| Anticuerpo secundario conjugado con HRP para IgG de cabra anti-conejo | Cell Signaling Technology | 7074 | Diluición 1:5000; para Western blotting |
| Kit de ELISA para hs-CRP (canino) | Cusabio | CSB-E08557c | Para medición de proteína C-reactiva de alta sensibilidad en plasma |
| Kit de ELISA para IL-6 (canino) | R&D Systems | CA6000 | Para medición de interleucina-6 en plasma |
| Software ImageJ (versión 1.53) | National Institutes of Health | — | https://imagej.nih.gov/ij/; para análisis densitométrico de Western blot |
| Anticuerpo primario para iNOS (conejo) | Abcam | ab178945 | Diluición 1:1000; para Western blotting (~130 kDa) |
| Solución de Ringer con lactato | Baxter | 2B2324 | Fluido intravenoso; infundido a 5–10 mL/kg/h durante los procedimientos |
| Microscopio de luz | Olympus | BX53 | Para examen histológico de secciones renales teñidas con HE |
| Ventilador mecánico (veterinario) | Midmark | Matrx Model 3000 | Volumen corriente 15 mL/kg; frecuencia respiratoria 12–15 respiraciones/min |
| Lector de microplacas | BioTek | Synergy HTX | Para medición de absorbancia en ELISA a 450 nm |
| Paraformaldehído tamponado neutro (10%) | Solarbio | P1110 | Para fijación de tejido renal (24 h) |
| Kit de ELISA para NO (canino) | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A012-1-2 | Para medición de óxido nítrico en plasma |
| Medio de contraste yodado no iónico (Iohexol) | GE Healthcare | Omnipaque 350 | 5–8 mL por inyección a 3 mL/s para angiografía de la arteria renal |
| Kit de ELISA para PAI-1 (canino) | Cusabio | CSB-E13043c | Para medición de inhibidor del activador del plasminógeno-1 en plasma |
| Anticuerpo primario para PAI-1 (conejo) | Abcam | ab66705 | Diluición 1:1000; para Western blotting (~45 kDa) |
| Cera de parafina | Leica Biosystems | 39601006 | Para inclusión en tejido |
| Kit de reactivo PrimeScript RT | Takara Bio | RR037A | Para la retrotranscripcion de ARN a ADNc |
| Cocktail de inhibidores de proteasa y fosfatasa | Thermo Fisher Scientific | 78440 | Añadido al tampón RIPA para la extracción de proteínas |