Este protocolo de estudio fue diseñado para investigar sistemáticamente los posibles efectos condroprotectores del extracto de Fructus Xanthii en la osteoartritis mediante análisis multiómicos integrados y experimentos in vivo .
Artículo de investigación
* These authors contributed equally
Este protocolo de estudio fue diseñado para investigar sistemáticamente los posibles efectos condroprotectores del extracto de Fructus Xanthii en la osteoartritis mediante análisis multiómicos integrados y experimentos in vivo .
La osteoartritis (OA) es un trastorno articular degenerativo progresivo para el que las intervenciones farmacológicas y quirúrgicas actuales alivian principalmente los síntomas en lugar de revertir los cambios patológicos subyacentes, lo que pone de manifiesto la urgente necesidad de nuevos agentes terapéuticos. Este protocolo tenía como objetivo investigar los posibles efectos condroprotectores del extracto de Fructus Xanthii contra la OA. En primer lugar, se realizó un perfilado metabolómico no dirigido utilizando cromatografía líquida de ultra alto rendimiento junto con espectrometría de masas tándem de alta resolución (UHPLC-HRMS/MS) para caracterizar los componentes químicos del extracto. Se aplicó entonces una estrategia integrada que combinaba farmacología de redes y minería transcriptómica para identificar componentes bioactivos y posibles objetivos del extracto, seguida de un análisis cruzado con genes desregulados relacionados con la AA para obtener genes objetivo centrales. Se realizaron análisis de enriquecimiento de la Ontología Génica (GO) y la Enciclopedia de Genes y Genomas de Kioto (KEGG) para anotar los principales procesos biológicos y vías de señalización moduladas por el extracto. Para la validación in vivo , se utilizaron modelos de lesión cartilaginosa de pez cebra y modelos de OA en ratones para evaluar los efectos condroprotectores del extracto. La secuenciación de ARN (RNA-seq) se adoptó además para analizar alteraciones transcriptómicas en condrocitos tras el tratamiento, centrándose en las vías asociadas a la OA y los perfiles de expresión génica; Posteriormente se realizó un ensayo inmunoabsorbente enzimático (ELISA) para verificar los niveles de expresión de proteínas/receptores clave cribados por RNA-seq, con el fin de confirmar aún más los efectos reguladores del extracto de Fructus Xanthii sobre los objetivos principales de la AA. Este protocolo multiómico integrado y experimental proporciona un enfoque sistemático para explorar el potencial del extracto de Fructus Xanthii como candidato botánico prometedor para la intervención en la OA.
La osteoartritis (OA) es un trastorno degenerativo de las articulaciones caracterizado por la degradación progresiva del cartílago articular, esclerosis ósea subcondral, inflamación sinovial y formación deosteófitos 1. Según el estudio Global Burden of Disease (GBD), la prevalencia de la OA ha aumentado de forma constante en 204 países y territorios entre 1990 y 20202, con esta tendencia esperada para acelerarse junto con el envejecimiento demográficoglobal 3. Las estimaciones actuales indican que más de 250 millones de personas en todo el mundo se ven afectadas, lo que supone una presión significativa sobre el bienestar individual, los sistemas sanitarios y las estructurassocioeconómicas. Los tratamientos actuales están principalmente orientados al alivio sintomático, siendo los antiinflamatorios no esteroideos (AINEs) y la viscosuplementación intraarticular con ácido hialurónico (HA) las intervenciones más comunes. Sin embargo, estos enfoques ofrecen un beneficio clínico limitado y están asociados a efectos adversos considerables 5,6. Esto pone de manifiesto la necesidad crítica de fármacos efectivos para la osteoartritis modificadora de la enfermedad (DMOADs).
La Medicina Tradicional China (MTC) se ha utilizado durante mucho tiempo en el manejo de la artrosis, basada en el concepto de "bi ósea", un subtipo del "síndrome bi". En este contexto, la patogénesis de la AAO se atribuye principalmente a una deficiencia de esencia hepática y renal, insuficiencia de qi y sangre, y posterior invasión por viento, frío yhumedad 8. En consecuencia, las estrategias terapéuticas se centran en disipar la humedad del viento, dispersar el frío y desbloquear los factorescolaterales. Los tratamientos de la MTC se destacan por sus efectos multi-objetivo, perfiles favorables de efectos secundarios y eficacia clínicamentesignificativa 10. Formulaciones destacadas como la cápsula Buqi Tongluo (BQTL) y la Decocción Fuzi (FZD) han mostrado claros efectos anti-OA en la práctica clínica, mientras que Du Huo Ji Sheng Tang (DHJST) alivia los síntomas de la OA suprimiendo la vía inflammasoma NLRP3, respaldada por siglos de uso empírico. De manera similar, la mezcla Shenjinhuoxue (SHM) atenúa el dolor y la degeneración del cartílago mediante la regulación a la baja de mediadores proinflamatorios como IL-1β y TNF-α 11,12,13. A nivel de monómeros, se ha reportado que compuestos como la icariína (cianosido A, CyA) y la erianina, derivados de plantas medicinales, promueven la proliferación de condrocitos, inhiben la liberación de citocinas inflamatorias y mantienen la homeostasisarticular 14,15. En conjunto, la MTC ofrece un enfoque terapéutico integral con propiedades antiinflamatorias, condroprotectoras y aliviadoras de síntomas. Sin embargo, la complejidad de sus mecanismos y los problemas relacionados con la estandarización requieren una investigación continua y rigurosa.
Se ha documentado que los frutos secos y maduros de Fructus Xanthii (Compositae), comúnmente conocidos como "Cang-Er-Zi", exhiben una amplia gama de actividades farmacológicas, incluyendo efectos antimicrobianos, antiinflamatorios, antioxidantes, analgésicos, antineoplásicos einmunomoduladores 16. Los ácidos fenólicos aislados de Fructus Xanthii reducen eficazmente la hiperplasia sinovial en la artritis reumatoide (AR)17. Entre ellos, el ácido clorogénico (CGA), un derivado representativo del ácido cafeoilquínico, ha demostrado estimular la proliferación y diferenciación de osteoblastos mientras inhibe la osteoclastogénesis mediada por RANKL, manteniendo así la homeostasisesquelética 18. Otros ácidos fenólicos identificados en el mismo extracto, como el ácido neoclorogénico (5-CQA), el ácido criptoclorogénico (CCA) y el ácido protocatechiqui, también presentan propiedades antimicrobianas, antiinflamatorias, antitumorales yantioxidantes 19,20,21. Además de los ácidos fenólicos, una variedad de metabolitos secundarios presentes en Cang-Er-Zi contribuyen a estas bioactividades 16,20,22,23,24,25. Sin embargo, el papel preciso y los mecanismos subyacentes del extracto de Fructus Xanthii en la AO siguen siendo en gran medida inexplorados.
Cromatografía líquida no dirigida-Espectrometría de Masas en tándem (LC-MS/MS) La metabolómica se caracteriza por capacidades libres de hipótesis, alto rendimiento y cobertura global. Permite la detección simultánea de miles de características del metabolito, proporcionando una visión panorámica de las redes metabólicas, y permite el descubrimiento sistemático de nuevos biomarcadores y vías metabólicas aberrantes sin preespecificación previadel objetivo 26,27. Combinado con tecnología de espectrometría de masas de alta resolución, este enfoque es adecuado para el análisis exhaustivo de diversos tipos de muestras biológicas (por ejemplo, suero, líquido sinovial, orina, tejido cartílago, etc.) y ha demostrado ventajas significativas en la investigación de la osteoartritis (OA). Por un lado, puede detectar de forma exhaustiva metabolitos diferenciales estrechamente asociados con la progresión patológica de la OA (como las distintas clases de metabolitos identificadas en el líquido sinovial y el tejido sinovial) y mapearlos a vías clave, incluyendo el metabolismo energético, la reparación del cartílago, la osteogénesis y el metabolismo lipídico, profundizando así en la comprensión de la patogénesis de la OA. Por otro lado, integrar datos multiómicos como la transcriptómica y la proteómica ayuda a revelar el papel de la reprogramación metabólica en la degeneración del cartílago, las respuestas inflamatorias y el daño a la estructura articular, proporcionando evidencia clave para identificar biomarcadores diagnósticos tempranos, evaluar la progresión de la enfermedad y desarrollar estrategias metabólicas dirigidas (por ejemplo, regular el metabolismo de ácidos biliares, triptófano o ácidos grasos), destacando su potencial traslacional en investigación sobre la tipificación de precisión de la OA y el tratamiento personalizado.
El pez cebra sirve como un excelente organismo modelo debido a múltiples ventajas: su genoma está altamente conservado con el humano, compartiendo homología con aproximadamente el 70% de los genes codificadores de proteínashumanos 28,29. Presenta características clave que incluyen un desarrollo rápido, fertilización in vitro, embriones transparentes que permiten una imagen in vivo conveniente, alta fecundidad y bajos costes de mantenimiento 30,31,32,33. En la investigación esquelética, el pez cebra permite una visualización clara de la formación ósea, los procesos de mineralización y la capacidad de regeneración, y puede utilizarse para simular condiciones patológicas como la osteoporosis y el daño al cartílago. Sin embargo, en el estudio de la osteoartritis (OA), un trastorno complejo de toda la articulación caracterizado por degeneración del cartílago articular, inflamación sinovial y alteraciones óseas subcondrales, la aplicación del modelo del pez cebra sigue siendo relativamente limitada.
Este artículo presenta un protocolo que integra metabolómica no dirigida basada en UHPLC-HRMS/MS, farmacología de redes, minería transcriptómica y validación experimental in vivo para explorar el potencial del extracto de Xanthium sibiricum como candidato viable a planta para la intervención en la AO. El objetivo no es solo identificar los componentes bioactivos, posibles objetivos y vías regulatorias centrales del extracto de Xanthium sibiricum relacionadas con la OA mediante integración multi-ómica y análisis computacional, sino también verificar su efecto condroprotector sobre la OA mediante modelos in vivo y aclarar aún más su mecanismo regulador sobre el transcriptoma de condrocitos.
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Todos los experimentos que involucraron muestras clínicas y ratones se llevaron a cabo de acuerdo con el protocolo aprobado por el Comité de Revisión Ética del Centro Provincial de Investigación en Biotecnología Médica de Shandong. Los reactivos y el equipo utilizado se enumeran en la Tabla de Materiales.
1. Aislamiento y cultivo de condrocitos articulares humanos
Se obtuvieron muestras de cartílago articular humano de pacientes sometidos a cirugía artroscópica o artroplastia total en el Primer Hospital Afiliado de la Primera Universidad Médica de Shandong. Las rebanadas de cartílago se transportaron al laboratorio sobre hielo en menos de 30 minutos tras la escisión quirúrgica. El tejido se lavó minuciosamente con solución salina de Dulbecco tamponada con fosfato (DPBS; 3–5 lavados), y luego se picó finamente hasta obtener aproximadamente 1mm 3 con tijeras quirúrgicas estériles. Se realizó una digestión enzimática secuencial, comenzando con la predigestión utilizando tripsina-EDTA al 0,25% durante 30 minutos a 37 °C. El proceso de digestión se monitorizaba hasta que los fragmentos de cartílago se diluían, reducían de tamaño y eran translúcidos, tras lo cual los fragmentos de cartílago se recogían mediante centrifugación (200 × g, 5 minutos) a temperatura ambiente. A esto le siguió una digestión nocturna (8 h, 37 °C) con 0,2% de colagénasa tipo II bajo agitación suave continua. El proceso digestivo se monitorizaba hasta que todos los fragmentos de cartílago visibles macroscópicamente se disolvían por completo. Las células liberadas se recogieron mediante centrifugación (200 × g, 5 min) a temperatura ambiente, se resuspendieron en DMEM completo suplementado con suero bovino fetal al 10%, 100 U/mL de penicilina y 100 μg/mL de estreptomicina, y se sembraron en2 matrazas de cultivo de 75 cm. Las células se mantuvieron a 37 °C en una atmósfera humidificada que contenía un 5% deCO2. Los condrocitos adherentes se desprendieron usando tripsina-EDTA al 0,25%, y las células se subcultivaron en una proporción de 1:3 cuando las células adherentes alcanzaron el 80% de confluencia de la superficie del matraz de cultivo.
2. Preparación del extracto de Fructus Xanthii
Los frutos secos maduros de Xanthium strumarium L. (Fructus Xanthii) fueron recogidos de poblaciones naturales en el norte de China y autenticados por un farmacólogo senior. El espécimen fue depositado en el herbario de la Primera Universidad Médica de Shandong. Se colocaron 20 g de Fructus Xanthii en polvo fino en un dedal de extracción, y se realizó una extracción exhaustiva con Soxhlet usando etanol al 95% (aproximadamente 250 mL) hasta completar entre siete y ocho ciclos de sifón. El extracto etanol se filtraba y el filtrado se concentraba hasta la sequedad bajo presión reducida a 45 °C mediante un evaporador rotatorio. El residuo resultante se resuspendió en 60 mL de agua destilada doble y se particionó sucesivamente con 60 mL de acetato de etilo en un embudo separador. La mezcla se agitaba vigorosamente y se dejaba someterse a la separación de fases a 4 °C durante 24 horas. La capa acuosa se recogía, liofilizaba y almacenaba a −80 °C hasta su uso posterior.
3. Flujo de trabajo estandarizado para metabolómica LC-MS/MS no dirigida
4. Análisis de farmacología de redes
5. Determinación de la concentración máxima tolerada (MTC) en el pez cebra
Las larvas transgénicas de pez cebra (Tg col2a1a:EGFP) a los 2 días de la fertilización (2 dpf) se distribuyeron aleatoriamente en placas de 6 pozos con una densidad de 30 larvas por pozo. Cada pozo fue suplementado con 3 mL de medio de exposición que contenía extracto de Fructus Xanthii diluido en serie. Las larvas moribudas o fallecidas se extraían diariamente. Las larvas estuvieron expuestas de forma continua a 28 °C durante 72 horas, tras lo cual se determinó que la concentración máxima tolerada (MTC) era la máxima en la que la mortalidad larvaria no superaba el 10%.
6. Establecimiento del modelo de lesión óssea del pez cebra
Tg col2a1a:Las larvas de pez cebra de EGFP a los 2 días de la fertilización (2 dpf) se asignaron a cuatro grupos: control, modelo, control positivo sulfato de condroitina (CS) y tratamiento con extracto de Fructus Xanthii . Todos los grupos excepto el grupo control estuvieron expuestos a Staphylococcus aureus (OD600 = 0,8, 1 × 108 UFC/mL) durante 24 horas para inducir lesión ósea. El establecimiento exitoso del modelo se confirmó verificando una reducción de al menos el 50% en la intensidad de fluorescencia verde específica del cartílago en la región craneofacial en relación con el grupo de control bajo un microscopio de epifluorescencia.
7. Evaluación cuantitativa de la fluorescencia específica del cartílago en larvas de pez cebra
Las larvas estuvieron expuestas continuamente a concentraciones graduadas de extracto de Fructus Xanthii o a 1.000 μg/mL de condroitina sulfato A de sodio (control positivo) a 28 °C durante 72 horas. Posteriormente, se seleccionaron al azar 10 larvas de cada réplica de 6 pozos (n = 30 por grupo). Las larvas seleccionadas fueron anestesiadas usando tricaína al 0,016% y posicionadas lateralmente sobre almohadillas de agarosa con baja fusión al 1%. Las imágenes de fluorescencia se obtuvieron con una magnificación de 2× (excitación 488 nm, emisión 525/50 nm) utilizando un estereomicroscopio equipado con una cámara de fluorescencia. La intensidad específica del cartílago en la región craneofacial, incluyendo el ceratohial y el cartílago de Meckel, se cuantificó mediante software de análisis de imágenes. Se realizó corrección de antecedentes sobre los valores de densidad integrados, y los valores corregidos se normalizaron al grupo de control para el análisis estadístico de la eficacia condroprotectora.
8. Inducción de OA en ratones C57BL/6J
Los ratones machos C57BL/6J (6–8 semanas, 20–22 g) fueron alojados bajo condiciones específicas libres de patógenos (SPF) a 22 °C ± 2 °C con un ciclo claro/oscuro de 12 horas. Se permitió que los ratones se aclimataran durante una semana y luego se les asignó aleatoriamente en tres grupos (n = 8 por grupo) usando una tabla de números aleatorios: (1) control operado por simulación, (2) OA inducida por ACLT (ACLT) y (3) intervención con ACLT más extracto de Fructus Xanthii (ACLT + extracto de Fructus Xanthii ). Todos los procedimientos quirúrgicos se realizaron en condiciones estériles conforme a un protocolo previamente validado.
Los ratones fueron anestesiados con pentobarbital sódico intraperitoneal (50 mg/kg) (siguiendo protocolos institucionalmente aprobados), y se realizó una incisión parapatelariana medial para exponer la cápsula articular de la rodilla derecha. El ligamento cruzado anterior fue transseccionado bajo un microscopio quirúrgico para inducir inestabilidad articular, tras lo cual la cápsula articular y la piel se cerraron en capas mediante suturas absorbibles 6-0. Los ratones operados por simulación se sometieron a procedimientos de artrotomía idénticos sin tranción de ligamentos. Se evaluó la estabilidad articular y se confirmó el establecimiento exitoso del modelo mediante la prueba del cajón o evaluando el grado de lesión articular en secciones histológicas de ratones del grupo modelo.
Se administró analgesia postoperatoria con buprenorfina (0,1 mg/kg, inyección subcutánea) durante tres días consecutivos. Los agentes de tratamiento se administraban una vez al día mediante gavage. El grupo del extracto ACLT + Fructus Xanthii recibió 100 μL de extracto de Fructus Xanthii diluido en solución fisiológica normal con 100 μL de extracto de Fructus Xanthii , mientras que los otros dos grupos recibieron 100 μL de solución fisiológica normal como control del vehículo. A las 8 semanas de la cirugía, los ratones fueron eutanasiados por asfixia por CO2 seguida de luxación cervical, y se extrajeron las articulaciones de la rodilla para análisis histológicos.
9. Tinción histopatológica
10. Secuenciación de ARN (RNA-seq)
Los condrocitos articulares humanos primarios (conductos 2–3) se sembraron en placas de 6 pozos con una densidad de 5 × 10 células5 por pozo. Las células fueron inutilizadas en suero durante 24 horas y luego se distribuyeron en dos grupos (n = 3 por grupo): (1) Grupo de control: las células trataron solo con vehículo (0,1% DMSO); (2) Grupo extracto de Fructus Xanthii : las células fueron tratadas con extracto de Fructus Xanthii disuelto en DMSO a 1.000 μg/mL.
Las células fueron tratadas durante 24 horas, tras lo cual se extrajo ARN total usando el reactivo TRIzol según el protocolo del fabricante. La integridad y concentración de ARN (RIN ≥7,0) se evaluaron utilizando un analizador de ARN. Las bibliotecas de ADNc específicas para cadena se prepararon utilizando un kit de preparación de biblioteca de secuenciación de ARN y se secuenciaron en una plataforma de secuenciación de próxima generación (NGS) de alto rendimiento en modo de extremo emparejado a 150 bp (PE150). El control de calidad de los archivos FASTQ en bruto se realizaba usando FastQC, seguido de adaptadores y recortes de calidad usando Trimmomatic antes del análisis posterior.
11. Procesamiento de datos RNA-seq
Genes expresados diferencialmente a la baja por extracto de Fructus Xanthii (frente al grupo control; p < 0,05 y logFC < −0,5) se extrajeron del conjunto de datos RNA-seq y se intersectaron con los 10 principales objetivos centrales. Los objetivos principales resultantes asociados al extracto de Fructus Xanthii y la osteoartritis se visualizaron utilizando el paquete ggvenn.
12. ELISA
Los condrocitos articulares humanos primarios en los conductos 2–3 se sembraron en placas de 6 pozos con una densidad de 5 × 10 células5 por pozo. Las células se incubaron en un medio libre de suero durante 24 horas para inducir la quietud. Las celdas se dividieron posteriormente en los siguientes tres grupos (n = 3 por grupo):
(1) Control en blanco: las células se trataron solo con vehículo (0,1% DMSO); (2) Control positivo: se indujo inflamación celular con IL-1β, seguida de tratamiento con vehículo (DMSO 0,1%); (3) Grupo extracto de Fructus Xanthii : se indujo inflamación celular con IL-1β, seguida de tratamiento con extracto de Fructus Xanthii de 1000 μg/mL disuelto en DMSO al 0,1%. Los supernadantes de cultivo celular se recogían tras 24 horas de incubación y se almacenaban a −80 °C hasta su uso. Los niveles de MMP1 y PGR en los supernadantes de cultivo se determinaron utilizando kits comerciales de inmunoabsorción enzimática (ELISA) específicos para MMP1 y PGR humanos, respectivamente. Los ensayos se realizaron según las instrucciones del fabricante.
13. Análisis estadístico
Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando software de análisis estadístico y gráficos, y los datos se presentaron como media ± desviación estándar (DS). La normalidad de los datos se evaluó utilizando la prueba de Shapiro–Wilk, y la homocedasticidad se evaluó mediante la prueba de Levene. Se realizaron comparaciones entre grupos utilizando análisis de varianza unidireccional o bidireccional (ANOVA), seguidos de pruebas post-hoc de Tukey o Šidák, según correspondá. Se realizaron comparaciones por pares utilizando una prueba t de Student de dos colas. Los datos no paramétricos se analizaron utilizando la prueba U de Mann–Whitney. Se consideró estadísticamente significativo un valor P bilateral < 0,05.
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Evaluación de calidad y panorama metabólico de datos no dirigidos de LC-MS/MS
Las muestras de control de calidad demostraron una excelente reproducibilidad, como lo indica la alta superposición de los cromatogramas TIC tanto en modos positivos como negativos, manteniendo la deriva de tiempo de retención por debajo de 0,05 min en todo el lote analítico. Los datos en bruto pasaban por preprocesamiento basado en XCMS, que incluía detección de picos, integración y alineación en ti...
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La artrosi es un trastorno degenerativo articular prevalente y una de las principales causas de discapacidad en todo elmundo. Su patogénesis es compleja y multifactorial, implicando cambios bioquímicos, celulares y moleculares en los tejidos articulares. Antes considerado un simple fenómeno de "desgaste" del cartílago articular, la OA es ahora ampliamente reconocida como una enfermedad crónica de toda la articulación caracterizada por la degradación del cartílago,...
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Los autores declaran que no se conocen intereses financieros en competencia ni relaciones personales que pudieran haber influido en el trabajo reportado en este artículo.
Esta investigación fue financiada por la subvención del Proyecto de Superficie del Fondo de Naturaleza de la Provincia de Shandong (Nº ZR2024MH088), el Proyecto de Tecnología de Medicina Tradicional China de la Provincia de Shandong (Nº 2020M070), y el Fondo de Cultivo del Primer Hospital Afiliado de la Universidad Médica Primera de Shandong y el Hospital Provincial Qianfoshan de Shandong (Grant No. QYPY2022NSFC0601)".
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 4% PFA | Biosharp, China | BL539A | pH 7.4, estéril |
| C57BL/6 Mice | Vital River Laboratory Animal Technology Co.,Ltd, China | N/A | Macho, 8-10 semanas de edad, 20-25g |
| Condroitín sulfato | MCE, América | HY-B2162 | Pureza ≥98% |
| ClusterProfiler (Paquete R) | Bioconductor | Acceso gratuito | Integrado en R v4.2.2 |
| Collagenasa, Tipo II, polvo | Gibco, América | 17101015 | ≥125 U/mg |
| Cytoscape | Consorcio Cytoscape | Acceso gratuito (https://cytoscape.org/) | v3.9.1 (con CytoHubba) |
| Cytoscape | Consorcio Cytoscape | Acceso gratuito | Versión 3.9.1 |
| DESeq2 (Paquete R) | Bioconductor | Acceso gratuito | Integrado en R v4.2.2 |
| DMEM, glucosa alta | Gibco, América | 11965092 | Medio estéril |
| Etanol | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd, China | 10009218 | Grado analítico, 95% |
| Acetato de etilo | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd, China | 10009418 | Grado analítico |
| Suero bovino fetal (FBS) | Cellmax, China | SA102.02 | Inactivado por calor |
| Microscopio de fluorescencia | Nikon, Japón | Eclipse Ti2-U | Equipado con filtro GFP (excitación 488nm) & cámara digital |
| Base de datos GEO | NCBI | https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/geo2r | Herramienta de análisis GEO2R |
| GraphPad Prism | GraphPad Software, LLC, América | Comercial | Versión 9.5.1 |
| Kit de tinción Hematoxilina-Eosina(HE) | Solarbio, China | G1120 | Kit listo para usar |
| Base de datos HERB | Academia China de Ciencias | http://herb.ac.cn/ | V2.0 |
| Kit ELISA de MMP-1 humano | Yamei Biotechnology, China | HJ088 | Para humano, placa de 96 pocillos |
| Kit ELISA del receptor de progesterona humana (PR) | Shanghai Enzyme-Linked Biotechnology Co., Ltd., China | ml05997 | Para humano, placa de 96 pocillos |
| ImageJ | Institutos Nacionales de Salud (NIH) | Acceso gratuito | Versión 1.53t |
| Microscopio óptico | Olympus, Japón | BX53 | Objetivos 10×/20× & cámara digital |
| Liofilizador | Christ, Alemania | Alpha 1-4 LDplus | Sistema de liofilización |
| Kit de tinción Saffron-O modificado y verde rápido | Solarbio, China | G1371 | Para tinción de hueso/cartílago |
| Bálsamo neutro | Solarbio, China | G8590 | Medio de montaje |
| Penicilina-estreptomicina | Gibco, América | 15070063 | 100×, estéril |
| Solución salina tamponada con fosfato (PBS) | Sparkjade, China | CR0013-500ML | pH 7.2-7.4, estéril |
| Software R | Fundación R para la Computación Estadística | Acceso gratuito (https://www.r-project.org/) | v4.4.1 (con ggvenn) |
| Medio de congelación celular libre de suero | Biosharp, China | BL203B | Estéril |
| Staphylococcus aureus | Colección Americana de Cultivos de Tipo (ATCC) | ATCC 25923 | Cepa estándar |
| Base de datos STRING | Consorcio STRING | https://string-db.org/ | Análisis de interacción de proteínas |
| Base de datos TCMID | Centro de Innovación Colaborativa de Qinling Qiyao de Shaanxi | https://www.tcmsp-e.com/tcmspsearch.php | V3.0 |
| Zebrafish Tg(col2a1a:EGFP) | Centro Internacional de Recursos de Zebrafish (ZIRC) | N/A | Larvas (2 dpf), cepa AB |
| Reactivo TRIzol | Thermo Fisher, América | 15596018CN | Para extracción de ARN total |
| Tripsina-EDTA (0.25%), rojo fenol | Gibco, América | 25200056 | Solución estéril |
| Cromatografía líquida de ultra alto rendimiento (UHPLC) | Thermo Fisher, América | Q Exactive Focus | Acoplado con HRMS/MS |
| XCMS-online | Instituto de Investigación Scripps | Acceso gratuito | Plataforma basada en web |
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