La electroestimulación auricular combinada y la decocción Sunshi Dingtong alivian la dismenorrea primaria con estancamiento del qi y estasis sanguíneo en ratas

Resumen

La electroestimulación auricular transcutánea combinada con la decocción Sunshi Dingtong alivió la lesión patológica uterina y los cambios relacionados con la inflamación en un modelo de rata de dismenorrea primaria con estancamiento del qi y estasis sanguínea, acompañados de alteración en la expresión de ARNm de PPAR-γ2 y COX-2.

Resumen

La dismenorrea primaria con estancamiento del qi y patrón de estasis sanguíneo está asociada a inflamación y dolor uterino, y las terapias farmacológicas actuales pueden causar efectos adversos. Este estudio evaluó los efectos terapéuticos combinados de la electroestimulación auricular transcutánea (TEAP) y la decocción Sunshi Dingtong (SDD) en un modelo en ratas de estancamiento del qi y estasis sanguíneo (dismenorrea primaria). Treinta y seis hembras de rata Sprague–Dawley fueron asignadas aleatoriamente a los grupos en blanco, modelo, SDD, TEAP, TEAP más SDD e ibuprofeno. El modelo se indujo mediante sensibilización con benzoato de estradiol, estimulación combinada por estrés con clorhidrato de epinefrina y administración de oxitocina. Las ratas recibieron solución fisiológica normal, SDD, ibuprofeno o TEAP en puntos auriculares definidos durante siete días. La morfología uterina fue examinada mediante tinción de hematoxilina y eosina. Los niveles uterinos de IL-1β, IL-6, TNF-α, PGF2α y PGE2 fueron medidos por ELISA, y la expresión de ARNm de PPAR-γ2 y COX-2 en el útero se cuantificó mediante PCR en tiempo real. Las ratas modelo mostraron degeneración epitelial uterina, infiltración de neutrófilos, aumento de la expresión de ARNm de IL-1β, IL-6, TNF-α, PGF2α y COX-2, y disminución de la expresión de ARNm de PGE2 y PPAR-γ2. TEAP o SDD por sí solos revirtieron parcialmente estos cambios patológicos y moleculares, mientras que la combinación de TEAP más SDD produjo mejoras más pronunciadas, con efectos comparables a los observados en el grupo del ibuprofeno. Estos hallazgos sugieren que la TEAP combinada con la SDD alivia la lesión patológica uterina y los cambios relacionados con la inflamación en la estancación del qi y la estasis sanguínea en ratas de dismenorrea primaria (QSBSPD), y que estos efectos están asociados con la regulación de la expresión de ARNm de PPAR-γ2 y COX-2.

Introducción

La dismenorrea primaria (EP), también llamada dolor menstrual funcional, se caracteriza por la aparición de dismenorrea sin ninguna patología orgánica identificable en los órganos^{reproductores 1}. Las pacientes mujeres que experimentan dismenorrea grave frecuentemente se encuentran incapaces de realizar tareas diarias, lo que afecta significativamente a su calidad de vida y requiere intervención farmacológica para aliviar los^{síntomas 2}. La literatura existente indica que está asociada a diversos factores, incluyendo prostaglandinas (PG), estrógenos, progesterona, vasopresina, oxitocina (OT), el sistema inmunitario, efectos neuroendocrinos y alteraciones en los niveles de calcio^{de microelementos 3}. Simultáneamente, factores inflamatorios, como el factor de necrosis tumoral (TNF) y la interleucina-6 (IL-6), pueden inducir la síntesis o secreción de PGs. Este proceso provoca la hipercontracción de los músculos uterinos, lo que resulta posteriormente en dolor isquémico y^{EP 4}. Actualmente, el manejo de la MP en la medicina contemporánea se categoriza principalmente en tratamiento general, tratamiento farmacológico e intervención quirúrgica. Entre las opciones farmacológicas, se utilizan con frecuencia antiinflamatorios no esteroideos (AINEs) como el ibuprofeno. No obstante, el uso de AINEs está correlacionado con efectos secundarios gastrointestinales significativos, y el uso prolongado o intenso puede provocar complicaciones como úlceras pépticas y sangrado gastrointestinal^{superior 5}. Por tanto, identificar y desarrollar estrategias más seguras y eficaces para el tratamiento de la EP es imprescindible y necesario.

Cada vez hay más evidencias que sugieren que la dismenorrea primaria se asocia frecuentemente con un patrón excesivo en la medicina tradicional china, entre los cuales la estancación del qi y la estasis sanguínea se observan^{clínicamente 6}. En este patrón, se considera que el deterioro del movimiento del qi y la circulación sanguínea contribuyen a la estasis uterina, la contracción excesiva y el dolor. Por ello, se utilizan comúnmente estrategias terapéuticas que regulan el qi, activan la circulación sanguínea, calientan los meridianos y alivian el dolor para esta condición. La terapia puntual auricular es una intervención no farmacológica importante en la medicina tradicional china. Es sencillo de aplicar y se ha utilizado para aliviar el dolor modulando las vías analgésicas neuroendocrinas y^{endógenas 7}. La decocción Sunshi Dingtong (SDD), una fórmula basada en la experiencia clínica desarrollada por el Departamento de Ginecología del Hospital de Medicina Tradicional China de Fuzhou, se ha utilizado para la dismenorrea caracterizada por estancamiento del qi y estancamiento sanguíneo. La fórmula se basa en el principio terapéutico de regular el qi y la sangre, promover la circulación sanguínea, calentar los meridianos y aliviar el dolor menstrual. SDD contiene Shixiao San, que consiste en polen tifo (Puhuang) y heces Trogopterori (Wulingzhi), junto con Rhizoma Cyperi (Xiangfu), Mirra (Moyao), Ramulus cinnamomi (Guizhi), Radix et Rhizoma Clematidis Chinensis (Weilingxian), Herba Salivae Chinensis (Shijianchuan), Rhizoma Corydalis Yanhusuo (Yanhusuo), Radix Angelicae Sinensis (Danggui), Herba Artemisiae Anomalae (Liujinu) y Fructus foeniculi (Xiaohuixiang). Sin embargo, la eficacia experimental de la SDD, especialmente cuando se combina con electroestimulación transcutánea en puntos auriculares, no ha sido evaluada sistemáticamente en un modelo animal controlado de estancamiento del qi y estasis sanguíneo (dismenorrea primaria).

Los receptores activados por proliferadores de peroxisomas (PPAR), pertenecientes a la familia de los receptores hormonales nucleares, son receptores activados por ligandos y fundamentales para la regulación de numerosos procesos metabólicos intracelulares. Existen tres subtipos distintos de PPAR, conocidos como PPAR-α, PPAR-β/δ y PPAR-γ⁸. Hallazgos recientes indican que el PPAR-γ2 se expresa en una amplia variedad de tejidos y presenta una asociación significativa con procesos^{inflamatorios 9}. Según el informe, el PPAR-γ suprime la expresión de IL-6, ciclooxigenasa-2 (COX-2), endotelina-1, sintasa de óxido nítrico, metaloproteinasa matricial-9, gelatinasa y adherencia mediante la inactivación del factor nuclear κB, la proteína activada-1 y el transductor de señal y activador de las vías de señalización de la transcripción, inhibiendo así la respuesta^{inflamatoria 10}. Además, Huang et ^al.11 indican que COX-2 y PPAR-γ2 pueden ser objetivos críticos implicados en la fisiopatología de los trastornos de estancamiento del qi y estasis sanguínea (QSBS).

Por ello, este estudio investigó los efectos terapéuticos de la electroestimulación de punto auricular transcutáneo (TEAP), SDD y su aplicación combinada en un modelo de ratas de estancamiento del qi y estasis sanguíneo (dismenorrea primaria). Mediante la integración de histopatología uterina, perfilado de mediadores inflamatorios, medición de prostaglandinas y análisis de ARNm relacionado con PPAR-γ2/COX-2, este estudio tuvo como objetivo evaluar si la terapia combinada interna y externa basada en la medicina tradicional china podría proporcionar una mayor protección contra la inflamación uterina asociada a la dismenorrea. La novedad de este trabajo radica en la evaluación experimental de TEAP combinada con una fórmula de SDD basada en la experiencia clínica en un modelo controlado de dismenorrea primaria de estancamiento del qi y estasis sanguíneo (QSBSPD) y en la exploración de su posible asociación con el eje regulador inflamatorio PPAR-γ2/COX-2.

Protocolo

Declaración ética

Todos los procedimientos en animales fueron revisados y aprobados por el Comité de Ética de Animales del Laboratorio de Biotecnología Fujian Ambry número de aprobación: IACUC FJABR2024031202). Realizar todos los experimentos con animales de acuerdo con el protocolo institucional aprobado de cuidado y uso animal.

Preparación de SDD e ibuprofeno

SDD está formado por Shixiao San (9 g), Xiangfu (9 g), Moyao (6 g), Guizhi (9 g), Weilingxian (12 g), Shijianchuan (20 g), Yanhusuo (12 g), Danggui (9 g), Liujinu (15 g) y Xiaohuixiang (5 g). Shixiao San está formado por Puhuang (4,5 g) y Wulingzhi (4,5 g). Todos los componentes herbales se usaban como gránulos concentrados y se enumeran en la Tabla de Materiales. Preparar la SDD disolviendo 106 g de gránulos concentrados en 200 mL de agua hirviendo para obtener una concentración final de 0,53 g/mL equivalente a un fármaco crudo. Mezclar bien hasta que los gránulos estén completamente disueltos, dejar que la solución se enfríe a temperatura ambiente y administrarla por gavage intragástrico a 2,5 mL/kg por administración. Prepara la suspensión de ibuprofeno según la concentración requerida para la gavage intragástrica. Administrar ibuprofeno a 0,02 g/kg como tratamiento de control positivo.

Animales y agrupación

Utilizar 36 ratas Sprague-Dawley adultas sanas de grado específico libre de patógenos, de 2 a 3 meses y con un peso de 200 ± 20 g, sin antecedentes de embarazo o apareamiento. Mantén a las ratas bajo un ciclo de 12 horas y 12 horas de luz/oscuridad a 22 ± 2 °C y una humedad relativa del 50%–70%, con acceso libre a comida y agua potable estándar. Tras una semana de aclimatación, asigna aleatoriamente a las ratas en seis grupos (n = 6 por grupo): blank, modelo, SDD, TEAP, SDD + TEAP y grupos de ibuprofeno.

Preparación y administración del modelo QSBSPD

En este experimento, se empleó el modelo ampliamente aceptado de dismenorrea inducida por OT. En resumen, los ciclos estroses de ratas se evaluaron mediante citologías vaginales. Se consideró que las ratas eran elegibles para su inclusión en el estudio si se determinaba que su duración del ciclo estro era de 4–5 días.

Con la excepción del grupo en blanco, a las ratas de los grupos experimentales se les administró inyección subcutánea diaria de estradiol benzoato y cloruro de epinefrina durante 10 días. Tras la inyección de cloruro de epinefrina a una dosis diaria de 0,9 mg/kg, las ratas estuvieron expuestas a diversas estimulaciones combinadas (A: Estimulación acústica: las ratas estuvieron expuestas a estímulos acústicos (90 dB, 1 kHz) durante 5 min/vez, 3–4 veces al día, con un intervalo de 2 horas entre cada vez. B: Estimulación de la luz: las ratas estuvieron expuestas a estímulos de luz intermitente durante 5 minutos/vez, 3–4 veces al día, con un intervalo de 2 horas entre cada vez. C: Estimulación eléctrica: las ratas fueron sometidas a estimulación eléctrica (pulsos bifásicos de onda cuadrada) a 30–35 V, aplicándose corriente alterna durante 0,3 s cada 2 s. Esta estimulación se administró durante 5 minutos cada 2 horas, 2–4 veces al día. D: Contención: las ratas se colocaban en una jaula de sujeción construida con alambre de púas, de aproximadamente 25 cm de longitud y 5 cm de diámetro. Una vez dentro de la jaula, los extremos se sujetaban para inmovilizar a las ratas y restringir su movimiento durante 2 horas, una vez al día). Además, en los días 1 y 10, se inyectó subcutáneamente 5,0 mg/kg/día de benzoato de estradiol, y en los días 2–9 recibieron 2,5 mg/kg/día.

A partir del quinto día de inyección de benzoato de estradiol, las ratas recibieron administración intragástrica de diferentes fármacos durante 7 días, dos veces al día a las 10:00 a.m. y a las 4:00 p.m., excepto el grupo de ibuprofeno, que recibió una vez diaria a las 10:00 a.m. En los grupos en blanco, modelo y TEAP, a las ratas se les administraron 2,5 mL/kg de solución fisiológica normal. En los grupos SDD y TEAP+SDD, las ratas recibieron 2,5 mL/kg de SDD (preparados como 106 g de fármaco bruto disueltos en 200 mL de agua, 0,53 g/mL); Esta dosis se convirtió a partir de la dosis clínica diaria adulta de 106 g basada en la equivalencia de área superficial corporal, resultando en una dosis equivalente a rata. En el grupo de ibuprofeno, las ratas recibieron 0,02 g/kg de suspensión de ibuprofeno. En los grupos TEAP y TEAP+SDD, las ratas recibieron estimulación TEAP a partir del quinto día tras la inyección de benzoato de estradiol. Colocar los electrodos en los puntos auriculares bilaterales Jiaogan, Shenmen, Neishengzhiji y Neifenmi, según la definición de un estándar previamente reportado para la localización de puntos de acupuntura^{en ratas 12}. Estos puntos se sitúan en la cavidad conchal bilateral del oído, inervados por el nervio vago. Los electrodos estaban conectados a un instrumento electrónico de terapia con agujas, que emitía una onda continua durante 20 minutos (frecuencia: 20 Hz; intensidad: 1 mA), una vez al día. Las ratas del grupo TEAP+SDD se sometieron a TEAP tras el primer ciclo de SDD cada día. La estimulación final del TEAP se realizó antes de la inyección intraperitoneal de OT.

A las 24 horas de la última inyección de benzoato de estradiol, es decir, al día 11, y 1 hora después de la última administración intragástrica, excepto en los grupos en blanco y TEAP, las ratas de otros grupos recibieron 2 U de OT por rata con inyección intraperitoneal. Las ratas del grupo TEAP recibieron una inyección intraperitoneal de OT a una dosis de 2 U por rata tras la estimulación final del TEAP. Las ratas del grupo en blanco no recibieron inyección de OT. Este protocolo estableció con éxito un modelo rat de QSBSPD. La selección general del animal, la preparación del modelo, el calendario de administración del medicamento, los parámetros de estimulación del TEAP y la localización de los puntos auriculares se resumen en la Figura 1.

Tinción Wright-Giemsa

El ciclo estro se determinó mediante la tinción de Wright-Giemsa de las frotas vaginales. Se humedeció un hisopo de algodón estéril con una solución de cloruro sódico al 0,9% e insertó suavemente entre 0,5 y 1,0 cm en el canal vaginal. El hisopo se rotó 1 o 2 veces para recoger células exfoliadas vaginales, y la muestra se extendió uniformemente sobre una lámina de vidrio limpia en una dirección. La mancha se secó al aire a temperatura ambiente. Se añadió una solución de tinción Wright-Giemsa para cubrir la mancha y se incubó durante 5 minutos. Luego se añadió un volumen igual de solución salina tamponada con fosfato a la solución teñidora, y se continuó la tinción durante otros 5 minutos. El portaobjetos se enjuagó suavemente tres veces con agua ultrapura, se secó al aire y se examinó bajo un microscopio óptico. La etapa del ciclo estro se identificó según los tipos celulares dominantes, incluyendo células epiteliales nucleadas, células epiteliales cornificadas y leucocitos.

Recogida de muestras

Las ratas fueron colocadas en una caja de inducción de anestesia con concentración de isoflurano ajustada entre el 3% y el 5%. Después de que las ratas perdieron el conocimiento, fueron trasladadas a la mesa de operaciones y mantenidas bajo anestesia con una mascarilla puesta. La concentración se redujo al 1,5% al 2,5%. El pelaje abdominal de la rata se recortó con tijeras y posteriormente se desinfectó con una aplicación tópica de alcohol. Se realizó una incisión de 2–3 cm a lo largo de la línea abdominal media. Un lado del útero, junto con sus ligamentos, fue exteriorizado y se extirpó el tejido adiposo adherido a la superficie uterina. El tejido uterino fue cuidadosamente aislado. Si la rata sigue viva tras la muestra, eutanasia mediante asfixia con CO₂.

Tinción de hematoxilina y eosina (HE)

Los tejidos uterinos se fijaron, incrustaron en parafina y se seccionaron con un grosor de 5 μm. Las secciones se desenceraron en xileno dos veces durante 10 minutos cada una. Las secciones se rehidrataron secuencialmente en etanol absoluto dos veces durante 5 minutos cada una, seguidas de etanol al 95%, 90%, 80% y 70% durante 5 minutos cada una. Las secciones se enjuagaron con agua ultrapura. Se realizó la tinción con hematoxilina durante 5 minutos y las secciones se enjuagaron con agua hasta que no quedó un exceso de tinte. Las secciones se sumergieron en solución salina tamponada con fosfato durante 5 minutos para el azulado. Las secciones se teñieron con eosina durante 1 minuto y se enjuagaron con agua. Posteriormente, las secciones se deshidrataron con etanol al 95% durante 10 minutos y etanol absoluto durante 10 minutos, se limpiaron en xileno durante 10 minutos y se montaron con resina neutra. Las imágenes representativas se obtuvieron utilizando un microscopio óptico o un escáner digital de portaobjetos.

Ensayo inmunoenzimático ligado a enzimas (ELISA)

Los tejidos uterinos frescos se enjuagaban con solución salina previamente refrigerada y protegida con fosfato para eliminar la sangre residual. Cada muestra de tejido fue pesada, cortada en pequeños trozos y homogeneizada en solución salina preenfriada con fosfato tamponado con una proporción tejido-tampón de 1:9. El homogenado se centrifugó a 5000 × g durante 5–10 minutos a 4 °C, y el sobrenadante se recogió para su posterior análisis. Los niveles de IL-1β, IL-6, TNF-α, PGF2α y PGE2 se midieron utilizando kits ELISA de rata según las instrucciones del fabricante. Todos los reactivos y las tiras de microplacas se equilibraban a temperatura ambiente antes de su uso. Se añadían estándares o muestras (50 μL) a los pozos designados. Se añadió anticuerpo de detección conjugado con peroxidasa de rábano picante (100 μL) a cada pozo excepto a los pozos en blanco, y la placa se selló e incubó a 37 °C durante 60 minutos. El líquido se descartaba y cada pozo se lavaba cinco veces con un tampón de lavado diluido. Posteriormente, se añadieron 50 μL de sustrato A y 50 μL de sustrato B a cada pozo, seguidos de incubación a 37 °C en la oscuridad durante 15 minutos. Luego se añadió solución de parada (50 μL) a cada pozo, y la densidad óptica se midió en 450 nm en 15 minutos. Las concentraciones de la muestra se calcularon a partir de las curvas estándar.

PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR)

El ARN total se extrajo de los tejidos uterinos utilizando un reactivo de extracción total de ARN según las instrucciones del fabricante. Brevemente, el tejido se molía en nitrógeno líquido y se añadió 1 mL de reactivo de extracción de ARN. El lisado se incubó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Luego se añadió cloroformo (200 μL), la mezcla se agitó vigorosamente durante 15 s, incubó a temperatura ambiente durante 5 minutos y centrifugó a 12.000 × g durante 12 minutos a 4 °C. La fase acuosa se transfirió a un nuevo tubo, se mezcló suavemente con un volumen igual de isopropanol e incubó a −20 °C durante 15 minutos. Las muestras se centrifugaron a 12.000 × g durante 10 minutos a 4 °C, se descartó el sobrenadante y el pellet de ARN se lavó con etanol al 75%. El pellet se secó al aire y se disolvió en agua libre de RNasa. La concentración y pureza del ARN se determinaron mediante un espectrofotómetro de microvolumen. Se extrajo ADN genómico y se sintetizó el cDNA según las instrucciones del reactivo de transcripción inversa. Para la extracción genómica de ADN, se incubó ARN total con el reactivo genómico para eliminar ADN a 42 °C durante 5 minutos y luego se colocó sobre hielo. La transcripción inversa se realizó a 50 °C durante 15 minutos, seguida de 75 °C durante 5 minutos para terminar la reacción.

La PCR en tiempo real se realizó utilizando una mezcla qPCR basada en SYBR Green. Cada reacción de 20 μL contenía 2 μL de ADNc, 0,4 μL de cebador directo, 0,4 μL de cebador inverso, 10 μL de 2× mezcla SYBR qPCR y 7,2 μL de agua libre de nucleasa. La qPCR se realizó utilizando el siguiente programa de ciclismo: 95 °C durante 1 minuto; 40 ciclos de 95 °C durante 20 s, 56 °C durante 20 s y 72 °C durante 38 s; seguido de análisis de curvas de fusión. Se utilizó GAPDH como control interno, y la expresión relativa de ARNm se calculó mediante el método 2^−ΔΔCt . Cada muestra biológica se midió en triplicado técnico. El valor medio de Ct de los triplicados técnicos se utilizó para calcular la expresión de ΔCt y de ARNm relativa para cada réplica biológica. Las secuencias cebadoras son las siguientes: PPAR-γ2, hacia adelante 5′-CGGAAGCCCTTTGGTGACTT-3′ y hacia atrás 5′-CTCGATGGGCTTCACGTTCA-3′; COX-2, hacia adelante 5′-AACCAGGTGAACTTCGTCTATTAG-3′ y hacia atrás 5′-GGTCGTTTTTGATGTCACTGTA-3′; GAPDH, hacia adelante 5′-GGTTGTCCCCTGCGACTTCA-3′ y hacia atrás 5′-GGTGGTCCAGGGTCTCTTACTC-3′.

Análisis estadístico

Los datos se analizaron mediante software estadístico. Todos los datos cuantitativos se presentaron como la desviación media ± estándar. Para el análisis qRT-PCR, primero se promediaron triplicados técnicos para cada réplica biológica y se realizó un análisis estadístico utilizando los valores de la réplica biológica. Las comparaciones entre múltiples grupos se realizaron mediante análisis unidireccional de la varianza, seguido de pruebas post hoc de Bonferroni cuando los datos cumplían con las suposiciones de normalidad y homogeneidad de la varianza. La significación estadística se definió como P < 0,05.

Resultados

Cribado del ciclo estroso en ratas

Los resultados de la tinción de Wright-Giemsa mostraron que las manchas vaginales en el preoestro presentaban predominantemente células epiteliales nucleadas, con una pequeña cantidad de queratinocitos. Los núcleos de estas células epiteliales parecían ligeramente teñidos, agrandados y mostraban signos de disolución. En el estro, los frotos se caracterizaban por una predominancia de grandes células epiteliale...

Discusión

La DP es el dolor abdominal inferior que se manifiesta antes y durante la menstruación sin ningún daño orgánico identificable en las regiones genitales o^{pélvicas 1}. Según la encuesta, aproximadamente entre el 45% y el 90% de las mujeres a nivel mundial experimentan dismenorrea, y entre el 10% y el 25% padecen dismenorrea^{grave 13}. Por tanto, es imprescindible identificar intervenciones más seguras y efectivas para la EP y dilucidar aún más s...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
0.9% solución de cloruro de sodio	Heilongjiang Qiqin Animal Health Products Co., Ltd.	240314A03	Lavado de tejidos y preparación de muestras
1× solución salina tamponada con fosfato (PBS)	Biosharp	BL601A	Lavado de tejidos, homogeneización ELISA y procedimientos de tinción
Sistema de estimulación acústica y luminosa	Construido a medida en instalaciones para animales	Construido a medida	Estimulación de estrés combinada durante la construcción del modelo QSBSPD
Diapositivas de microscopio adhesivas	Jiangsu Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd.	80312-3161	Preparación de secciones de parafina y frotis vaginales
Escáner digital de diapositivas automatizado	Guangzhou Guangying Cell Technology Co., Ltd.	GCell-60	Imagen digital de secciones teñidas con HE
Deshidratador de tejidos automático	Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd.	KH-TS	Deshidratación de tejidos antes de la inclusión en parafina
Microscopio biológico	Nikon	E200MV	Observación de frotis vaginales y secciones de tejido teñidos
Cilindro de gas CO2 y cámara de eutanasia	Centro de Animales del Hospital de Medicina Tradicional China de Fuzhou	Sistema institucional de CO2	Eutanasia de animales
Placa fría para estación de inclusión	Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd.	KH-BL	Incluir en parafina
Molino criogénico	Shanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd.	TISS-24	Homogeneización de tejidos
Danggui (Radix Angelicae Sinensis)	Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd.	A1070343	Ingrediente SDD; gránulos concentrados
Agua tratada con DEPC	Meilunbio	MA0018	Reactivo qRT-PCR
Instrumento de tratamiento de acupuntura electrónico	Suzhou Medical Appliance Factory Co., Ltd.	SDZ-II	Estimulación TEAP y estimulación eléctrica
Balanza analítica electrónica	Sartorius Balance Beijing Co., Ltd.	BS 224S	Pesado de muestras y reactivos
Eosina	Epredia	7111	Tinción HE
Clorhidrato de epinefrina	TargetMol	119091	Construcción del modelo QSBSPD
Benzoato de estradiol	Sigma-Aldrich	E8515	Construcción del modelo QSBSPD
Etanol	Xilong Scientific Co., Ltd.	240403A1	Procesamiento y deshidratación de tejidos
Guizhi (Ramulus Cinnamomi)	Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd.	A2060533	Ingrediente SDD; gránulos concentrados
Hematoxilina	Epredia	7211	Tinción HE
Suspensión de ibuprofeno	Shanghai Johnson & Johnson Pharmaceutical Co., Ltd.	H20000359	Medicamento de control positivo; 20 mg/mL
Liujinu (Herba Artemisiae Anomalae)	Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd.	A210A413	Ingrediente SDD; gránulos concentrados
Centrífuga mini de baja velocidad	Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.	WTL-4K	Preparación de muestras
Centrífuga microrefrigerada	Beckman Coulter	Microfuge 22R	Extracción de ARN y preparación de homogeneizado de tejidos
Lector de microplacas	Guangdong Danli Technology Co., Ltd.	K3	Medición de absorbancia ELISA a 450 nm
Cubiertas para microscopios	Jiangsu Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd.	80340-1630	Preparación de diapositivas para microscopios
Incubadora de moldes	Shanghai Lichen Bangxi Instrument Technology Co., Ltd.	W0704	Incubación durante los procedimientos de tinción o ensayo
Moyao (Myrrh)	Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd.	1107853	Ingrediente SDD; gránulos concentrados
Bálsamo neutro	Meilunbio	MB9899	Montaje de secciones de tejido teñidas
NovoScript Plus All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix	Novoprotein	E047-01A	Transcripción inversa
NovoStart SYBR qPCR SuperMix Plus	Novoprotein	E096-01B	Amplificación qRT-PCR
Inyección de oxitocina	Anhui Fengyuan Pharmaceutical Co., Ltd.	220906-4	Inducción del modelo QSBSPD
Cera de parafina	Hualing	20220918	Incluir en parafina
Sistema PCR	Bio-Rad	PTC-100	Procedimientos relacionados con PCR
Puhuang (Pollen Typhae)	Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd.	A2092143	Ingrediente SDD; gránulos concentrados; componente de Shixiao San
Primers de qRT-PCR para PPAR-γ2, COX-2 y GAPDH	Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.	Síntesis a medida	Primers de qRT-PCR
Kit ELISA para IL-1β de rata	Meimian Biotechnology	MM-0047R2	Kit ELISA
Kit ELISA para IL-6 de rata	Meimian Biotechnology	MM-0190R2	Kit ELISA
Kit ELISA para PGE2 de rata	Meimian Biotechnology	MM-0068R2	Kit ELISA
Kit ELISA para PGF2α de rata	Meimian Biotechnology	MM-0230R2	Kit ELISA
Jaula de restricción para ratas	Construido a medida en instalaciones para animales	Construido a medida	Estrés de restricción durante la construcción del modelo QSBSPD
Kit ELISA para TNF-α de rata	Meimian Biotechnology	MM-0180R2	Kit ELISA
Sistema de PCR en tiempo real	Applied Biosystems	7300	Análisis qRT-PCR
RNAiso Plus	TaKaRa	9109	Extracción de ARN total
Microtomo rotatorio	Thermo Fisher Scientific	HM325	Cortar secciones de parafina
Shijianchuan (Herba Salviae Chinensis)	Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd.	A3052113	Ingrediente SDD; gránulos concentrados
Ratas Sprague–Dawley	Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.	SCXK (Jing) 2019-0010	Construcción de modelos animales
Cápsula para inclusión de tejidos	Jiangsu Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd.	23033	Consumible para corte de parafina
Máquina para inclusión de tejidos	Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology