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Establecimiento de un protocolo estandarizado de manipulación por pellizco espinal para un modelo de rata de asma pediátrica

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DOI:

10.3791/70623

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1 de octubre de 2026

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1College of Acupuncture and Massage, Nanjing University of Chinese Medicine

En este artículo

Resumen

Este artículo presenta un protocolo estandarizado para la manipulación mediante pellizco de la columna vertebral (SP) en un modelo de rata joven con asma. Este protocolo atenuó la inflamación de las vías respiratorias, la hiperreactividad y la remodelación en un modelo de asma inducido por OVA. El estudio podría sentar las bases para la exploración mecanicista y la traducción clínica.

Resumen

El asma es la enfermedad inflamatoria crónica de las vías respiratorias más prevalente en niños y se caracteriza por inflamación crónica de las vías respiratorias, hiperreactividad de las vías respiratorias (AHR) y remodelación de las vías respiratorias. En la medicina tradicional china (TCM), la manipulación de pellizco de la columna (SP) es una técnica de masaje pediátrico ampliamente utilizada para el manejo del asma y otras enfermedades infantiles. A pesar de una historia clínica de uso que abarca más de 1.000 años, la SP sigue siendo poco conocida fuera de China. Además, los mecanismos subyacentes a la SP no están suficientemente caracterizados. Este artículo describe un protocolo factible y estandarizado para la SP que replica los procedimientos esenciales utilizados en la práctica clínica. La aplicación del protocolo mejoró la inflamación de las vías respiratorias, la AHR y la remodelación de las vías respiratorias en un modelo de rata juvenil de asma. Para mejorar la reproducibilidad, se estandarizaron parámetros clave del procedimiento, incluyendo la presión digital, la frecuencia de manipulación, el número de repeticiones y la duración de la intervención. El protocolo estandarizado en este estudio puede servir como referencia para investigaciones futuras sobre la estandarización de la SP y sus mecanismos subyacentes en el asma pediátrica experimental.

Introducción

El asma pediátrico se caracteriza por inflamación crónica de las vías respiratorias, hiperreactividad de las vías respiratorias (AHR) y remodelación de las vías respiratorias1,2. A menudo comienza en la primera infancia y es la enfermedad crónica más común entre los niños en edad escolar. Los tratamientos convencionales actuales incluyen corticosteroides inhalados, agonistas del receptor β₂, antagonistas de los receptores de leucotrienos y terapias biológicas3,4. Sin embargo, solo el 44,1 % de los niños y el 55,4 % de los adolescentes con asma logran un control adecuado de la enfermedad en todo el mundo5. Además, la administración repetida de corticosteroides sistémicos o inhalados puede contribuir al retraso del crecimiento en niños con asma mal controlado6.

Como terapia externa tradicional, el masaje (también conocido como tuina en China) es rentable, bien tolerado y generalmente considerado seguro para los niños. El masaje se ha utilizado desde hace mucho tiempo tanto en China como en países occidentales para la prevención y el tratamiento del asma pediátrico7. Revisiones sistemáticas y metaanálisis han informado resultados favorables del tratamiento con masaje en el manejo del asma pediátrico7,8. La manipulación mediante pellizco de la columna (SP) es una técnica clásica y ampliamente practicada en el masaje pediátrico tradicional chino. De acuerdo con la teoría de la medicina tradicional china (MTC), la estimulación del vaso Gobernador (GV) y de los meridianos de la Vejiga (BL) a lo largo de la espalda modula la función de los órganos Zang-Fu, manteniendo así la homeostasis sistémica y previniendo o tratando enfermedades9,10,11. Estudios previos han demostrado que SP no solo mejora los síntomas y signos atópicos en niños, sino que también reduce la inflamación crónica de las vías respiratorias en un modelo de rata joven con asma12,13,14. Además de su uso clínico, SP se practica comúnmente como intervención de atención médica en el hogar11,15. A pesar de una historia clínica que abarca más de mil años, SP sigue siendo relativamente desconocido fuera de China, y sus mecanismos subyacentes no han sido ampliamente investigados. Por lo tanto, modelos animales estandarizados son esenciales para elucidar los mecanismos de SP y apoyar su evaluación y aplicación científica más amplia.

Varios estudios han establecido protocolos estandarizados de masaje para la investigación en animales. Un estudio previo desarrolló un protocolo estandarizado de acariciado en la espalda o abdomen a aproximadamente 20 cm/s y una presión de 100 mm H₂O para inhibir las respuestas excitatorias cardiovasculares16. Más recientemente, se ha demostrado que la estimulación táctil repetitiva unidireccional a lo largo del vaso gobernador (GV) mediante un estimulador mecánico promueve la remodelación sináptica en la corteza prefrontal medial de un modelo murino adolescente de autismo. En dicho protocolo, se aplicó una presión moderada de aproximadamente 30–50 g a una velocidad de alrededor de 15,3 cm/s sin causar molestias ni lesiones. La estimulación se administró de forma unidireccional desde la región caudal hasta la nuca (región occipital) dos veces al día durante 10 minutos durante un período de 21 días17. Sin embargo, la manipulación manual difiere fundamentalmente de la estimulación mecánica, y actualmente no existe ningún dispositivo mecánico que reproduzca los movimientos característicos de la SP. Además, aunque varios estudios han investigado los mecanismos de la SP en modelos de rata de asma y otros trastornos pediátricos18, no se ha establecido un protocolo estandarizado que defina la fuerza y velocidad de estimulación necesarias para la SP en estudios con animales. Por lo tanto, el desarrollo de un protocolo estandarizado de SP es esencial para mejorar la reproducibilidad y facilitar las investigaciones mecanicistas.

El asma alérgica es el fenotipo más común del asma pediátrica19. Por consiguiente, la sensibilización y el desafío con ovoalbúmina (OVA) son los métodos más utilizados para establecer un modelo experimental de asma pediátrica20. Las ratas son particularmente adecuadas para investigar intervenciones basadas en masajes debido a que su mayor tamaño corporal facilita la manipulación manual. Además, los modelos con ratas reproducen de manera confiable las características patológicas clave del asma alérgica, incluyendo inflamación polarizada hacia Th2, HRA y remodelación de las vías respiratorias21.

Estudios previos demostraron que el SP alivió la inflamación de las vías respiratorias en ratas jóvenes tras la sensibilización y exposición a OVA11,14. Por lo tanto, el presente estudio tuvo como objetivo establecer un protocolo estandarizado de SP para un modelo de rata joven de asma pediátrico, con el fin de facilitar futuras investigaciones sobre los mecanismos subyacentes del SP. Este protocolo estandarizado proporciona un marco experimental reproducible para estudios mecanicistas y futuras investigaciones traslacionales sobre el SP en modelos animales de asma pediátrico.

Protocolo

Este estudio fue aprobado por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Medicina China de Nanjing (n.º 202306A032). Todos los procedimientos se realizaron de acuerdo con las Guías de los Institutos Nacionales de Salud para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio y con las directrices ARRIVE 2.0.

Se utilizaron treinta ratas macho Sprague-Dawley (SD) libres de patógenos específicos (SPF), de 3 semanas de edad y con un peso de 45–55 g. Las ratas se alojaron (tres por jaula) en una instalación con barrera SPF bajo un ciclo de luz/oscuridad de 12 h, a 22 ± 2 °C y una humedad relativa del 30%–40%, con acceso libre a alimento estándar y agua. Con base en estudios previos que utilizaron modelos de ratas jóvenes de asma11,14, el tamaño de la muestra se determinó para minimizar el uso de animales, de acuerdo con el principio de reducción de las 3R. Tras un período de aclimatación de 7 días, se registró el peso corporal basal y a cada rata se le asignó un número de identificación único. Las ratas se estratificaron según el peso corporal basal y luego se asignaron dentro de cada estrato a uno de cinco grupos mediante una tabla de números aleatorios, con una proporción de asignación de 1:1:1:1:1 (n = 6 por grupo): control (CN), asma (AS), asma + SP (AS+SP), asma + metilprednisolona (AS+MP) y asma + SP + metilprednisolona (AS+SP+MP). La secuencia de aleatorización y la asignación a grupos fueron generadas por un investigador que no participó en las intervenciones posteriores ni en la evaluación de los resultados.

Los criterios de inclusión fueron ratas macho SPF sanas de la cepa SD de 3 semanas de edad, con un peso de 45–55 g al inicio, que presentaran un patrón respiratorio normal y actividad física regular. Se excluyeron las ratas que mostraran signos de enfermedad o una desviación del peso corporal del >20 % respecto a la media del grupo durante el periodo de aclimatación, o que murieran antes de finalizar la fase de intervención. Durante todo el procedimiento se utilizó equipo de protección personal adecuado, incluyendo bata de laboratorio, mascarilla desechable y guantes. Los cadáveres animales y los tejidos se colocaron en bolsas para material biopeligroso de doble capa y se almacenaron a −20 °C antes de su eliminación. La cama contaminada se eliminó como residuo sólido biopeligroso, y los objetos punzantes se deseché en contenedores resistentes a la perforación aprobados para objetos cortopunzantes. Para la recolección terminal de tejidos, se administró uretano al 20 % (5 mL/kg, i.p.) y se confirmó la anestesia profunda mediante la ausencia de reflejo de retirada del pie y reflejo corneal.

1. Establecimiento del modelo de asma en ratas jóvenes

NOTA: El siguiente procedimiento se utilizó para establecer el modelo de asma en ratas jóvenes12.

  1. Prepare la suspensión de OVA/Al(OH)₃ inmediatamente antes de cada inyección. Disuelva 2 mg de OVA grado V directamente en 1 mL de gel de Al(OH)₃ al 4% y agite en vórtex hasta obtener una suspensión homogénea.
    NOTA: Asegúrese de que la suspensión sea homogénea antes de la inyección. Si ocurre precipitación, agite brevemente en vórtex para resuspender la mezcla. Almacene la suspensión sobre hielo y úsela dentro de las 2 h posteriores a su preparación.
  2. Administre 1 mL de la suspensión de OVA/Al(OH)₃ por vía intraperitoneal en los días experimentales 1, 8 y 15. Inyecte 1 mL de solución salina normal estéril (NaCl al 0,9%) en las ratas del grupo CN según el mismo calendario.
  3. Someta a las ratas a una solución de OVA al 2% (grado II) desde el día experimental 21 hasta el día 42 mediante un nebulizador ultrasónico. Administre los dos últimos desafíos consecutivos con OVA al 3% para inducir una exacerbación tras la sensibilización.
  4. Realice la nebulización cada dos días durante 30 minutos a lo largo de un período de 3 semanas. Coloque cada rata individualmente en una cámara de exposición sellada conectada al nebulizador ultrasónico (frecuencia ultrasónica: 1,7 MHz ± 10%; tasa de nebulización: ≥3 mL/min; diámetro de partícula: <5 µm).
    NOTA: Confirme el establecimiento exitoso del modelo de asma observando estornudos, movimiento de asentimiento de cabeza durante la respiración, respiración con la boca abierta, contracción del músculo abdominal y sibilancias.

2. Funcionamiento y aplicación del software del sistema Finger TPS

  1. Inserte el enchufe del sensor verticalmente en la interfaz de la placa de circuito. Conecte la placa de circuito al ordenador mediante un cable USB-C de aproximadamente 40 cm de longitud para permitir una flexibilidad operativa suficiente.
  2. Desinfecte las manos y los protectores para los dedos. Introduzca el pulgar y el dedo índice derecho del operador en las fundas sensorizadas para los dedos. Coloque los sensores flexibles sobre el centro de las yemas de los dedos y asegúrese de que tengan un contacto estrecho y sin arrugas con la piel.
  3. Realice la calibración del sistema y el control de calidad para la medición de fuerza
    1. Inspeccione los sensores y los cables de conexión antes de cada sesión de entrenamiento del operador y verifique que el dispositivo esté correctamente conectado.
    2. Seleccione «N» como unidad de medida y establezca el rango de medición entre −3,5 y 32 N.
    3. Asegúrese de que no se aplique ninguna fuerza externa sobre los sensores. Ejecute la función «Tara» para ajustar a cero el sistema.
    4. Registre la línea base sin carga durante 30 s. Comience la medición de fuerza solo cuando la variación de la línea base permanezca por debajo de 0,02 N.
    5. Repita el procedimiento de ajuste a cero siempre que se ajuste la posición del sensor o la tensión de la funda, o cuando se observe una deriva en la línea base.
    6. Utilice el sistema Finger TPS para monitorear la fuerza aplicada durante el entrenamiento del operador. Mantenga una fuerza de 5 ± 0,6 N durante el movimiento de retroceso y de 12 ± 2 N durante el SP, manteniendo la velocidad y frecuencia prescritas.
    7. Acepte la curva de fuerza solo cuando la línea base permanezca estable, no ocurra interrupción ni saturación de la señal, y la fuerza aplicada permanezca dentro de los rangos objetivo especificados.
  4. Realice la manipulación de retroceso y el SP mientras monitorea la curva dinámica de fuerza. Ajuste la tensión de las fundas para los dedos según sea necesario hasta obtener una curva de fuerza estable.
  5. Practique las manipulaciones mientras monitorea la curva de fuerza en tiempo real. Mantenga una fuerza objetivo de 5 ± 0,6 N y una velocidad de aproximadamente 5 cm/s durante el retroceso, y una fuerza objetivo de 12 ± 2 N con una frecuencia de 6–8 repeticiones/min durante el SP. Considere que el operador es competente solo después de que cinco sesiones de práctica consecutivas cumplan con los criterios de técnica de manipulación, fuerza digital y frecuencia del SP.
    NOTA: Considere que el operador está cualificado solo tras lograr consistentemente los parámetros objetivo de fuerza y movimiento. Retire los protectores para los dedos antes de realizar el procedimiento formal de SP para evitar una estimulación táctil adicional en las ratas. Sin embargo, ninguna de las pruebas de reproducibilidad entre operadores en este estudio debe considerarse al adoptar este protocolo como referencia para el estudio de SP.

3. Procedimiento detallado de la manipulación por compresión de espinas

  1. Sujete la rata suavemente en posición prona sobre una palma. Sostenga las extremidades delanteras rodeando suavemente las axilas frontales con el pulgar y el dedo índice, y permita que las extremidades delanteras cuelguen naturalmente. Asegúrese de que la rata permanezca tranquila con una respiración constante. Si se produce vocalización, forcejeo o defecación, suelte a la rata y déjela aclimatarse durante 2–3 min antes de reposicionarla (Figura 1).
  2. Acariacie la espalda dos veces desde la región del hombro hasta la base de la cola a lo largo del vaso gobernador (GV) utilizando los dedos índice, medio y anular de la mano derecha. Aplique una fuerza de aproximadamente 5 N para calmar a la rata antes de la presión espinal (SP).
  3. Pellizque la piel en la raíz de la cola usando el pulgar derecho posicionado posteriormente y los dedos índice y medio posicionados anteriormente. Levante suavemente la piel, luego gire y avance los dedos cranealmente a lo largo de la columna hacia Dazhui (GV14). Evite causar signos evidentes de incomodidad. Mantenga una presión digital de aproximadamente 12 N y realice la manipulación con una frecuencia de 6–8 repeticiones/min. Realice 15 repeticiones desde el día 1 hasta el día 21 del experimento y 25 repeticiones desde el día 22 hasta el día 44.
  4. Repita el procedimiento de acariciar la espalda descrito en el paso 3.2 para concluir la sesión de tratamiento y calmar a la rata.
    NOTA: Según la teoría de la medicina tradicional china (MTC), la presión espinal (SP) se realiza a lo largo de la columna para estimular los meridianos GV y de la vejiga (BL) (Figura 2). El meridiano GV discurre por la línea media dorsal desde la raíz de la cola hasta Dazhui (GV14), mientras que el meridiano BL se encuentra aproximadamente a 3–6 mm lateral a la línea media, dependiendo del tamaño corporal22. Dazhui (GV14) se localiza en el punto medio entre la séptima vértebra cervical y la primera vértebra torácica. Aumente el número de repeticiones de SP con la edad para imitar el régimen clínico de tratamiento. Durante el acariciado de la espalda, asegúrese de que la rata permanezca relajada, respire con calma y no muestre comportamientos defensivos. Durante la SP, espere una ligera elevación de la espalda y la separación de los bigotes, sin micción ni defecación inducidas por estrés, forcejeo violento, vocalización ni intentos de huida.

4. Protocolos de intervención

  1. Asignar a las ratas del grupo CN la ausencia de intervención específica para la enfermedad. Manipular suavemente a las ratas durante la misma duración que el grupo AS+SP para controlar los efectos de la manipulación. Administrar suero fisiológico intraperitoneal (1 mL/kg) según el mismo horario utilizado para las inyecciones de metilprednisolona.
  2. Someter a las ratas del grupo AS a sensibilización y desafío con OVA. Aplicar los mismos procedimientos de manipulación y control de inyección de suero fisiológico utilizados para el grupo CN.
  3. Someter a las ratas del grupo AS+SP a sensibilización y desafío con OVA. Aplicar el protocolo de SP una vez al día antes de la inducción del modelo.
  4. Someter a las ratas del grupo AS+MP a sensibilización y desafío con OVA. Administrar metilprednisolona (10 mg/kg; 2 mg/mL preparada en suero fisiológico) mediante inyección intraperitoneal 30 min antes de cada desafío con OVA.
  5. Someter a las ratas del grupo AS+SP+MP a los mismos procedimientos utilizados para el grupo AS+MP. Aplicar el protocolo de SP una vez al día antes de la inyección de metilprednisolona.
    NOTA: Excepto para los grupos AS+SP y AS+SP+MP, aplicar los mismos procedimientos de manipulación a todos los demás grupos para controlar los efectos inespecíficos de la manipulación. Utilizar jeringas desechables estériles para todas las inyecciones y desechar las agujas en contenedores resistentes a perforaciones. Insertar la aguja para inyección intraperitoneal lateral a la línea media abdominal para minimizar el riesgo de lesión visceral. Para controlar la estimulación táctil en los grupos no SP, acariciar a las ratas cuatro veces durante la misma intervención que el grupo SP cada día. Utilizar el mismo procedimiento de acariciado dorsal que el empleado en los grupos SP.

Resultados

El peso corporal es un indicador importante del crecimiento en ratas jóvenes. No se observaron diferencias significativas en el peso corporal entre los cinco grupos antes del tratamiento experimental. Tras la inducción del modelo de asma, el grupo AS presentó un peso corporal significativamente menor que el grupo CN (P = 0.000; Figura 3A). En comparación con el grupo AS, el grupo AS+SP mostró un peso corporal significativamente mayor (P = 0.008; Figura 3A), mientras que el grupo AS+MP no mostró diferencia significativa (P = 0.975; Figura 3A). De manera similar, el grupo AS+SP+MP no mostró un aumento significativo en el peso corporal en comparación con el grupo AS (P = 0.925; Figura 3A). Los resultados sugieren que la SP promueve la ganancia de peso durante la modelización del asma pediátrico y el tratamiento con metilprednisolona (MP) en ratas jóvenes.

Después del desafío con OVA, las ratas del grupo CN no presentaron signos de dificultad respiratoria, incluyendo dificultad para respirar, estornudos, movimiento rítmico de la cabeza, respiración bucal, contracción de los músculos abdominales o sibilancias. En contraste, las ratas del grupo AS mostraron manifestaciones típicas del asma pediátrico, incluyendo dificultad para respirar, estornudos, movimiento rítmico de la cabeza y respiración bucal. Estos signos clínicos se aliviaron notablemente tras el tratamiento con SP, MP o su aplicación combinada.

Para evaluar los efectos antiinflamatorios de SP en ratas jóvenes con asma experimental, se recolectaron tejidos pulmonares tras la anestesia profunda con uretano al 20% (5 mL/kg, i.p.) según procedimientos descritos previamente12. Se realizó tinción y análisis de la expresión génica de genes proinflamatorios con hematoxilina y eosina (HE) para evaluar la inflamación crónica de las vías respiratorias, mientras que la tinción de Masson se utilizó para evaluar el remodelado de las vías respiratorias. La hiperreactividad de las vías respiratorias (AHR) se evaluó mediante plestimografía de cuerpo entero (WBP) midiendo la pausa mejorada (Penh).

Después de seguir procedimientos rutinarios de tinción con H&E y de Masson23, se tiñeron secciones pulmonares con hematoxilina y eosina y se puntuaron según la inflamación peribronquial utilizando una escala modificada de 0 a 424. El grupo del modelo de asma presentó puntuaciones de inflamación significativamente más altas que el grupo CN (P = 0,000). En comparación con el grupo AS, los grupos AS+SP, AS+MP y AS+SP+MP mostraron todos puntuaciones de inflamación significativamente reducidas (P = 0,005, P = 0,006 y P = 0,000, respectivamente), sin diferencias significativas entre los tres grupos de tratamiento (Figura 4A, Tabla 1).

La remodelación de las vías respiratorias se evaluó cuantificando el depósito de colágeno alrededor de los bronquiolos mediante tinción de Masson. El depósito de colágeno se expresó como el área positiva para colágeno normalizada respecto al perímetro de la membrana basal (µm2/µm). El grupo AS mostró un depósito de colágeno significativamente mayor que el grupo CN (P = 0.000). En comparación con el grupo CN, los grupos AS+SP y AS+MP presentaron un depósito de colágeno moderadamente mayor (P = 0.050 y P = 0.051, respectivamente), pero significativamente menor que el del grupo AS (P = 0.001 en ambas comparaciones). El grupo AS+SP+MP no mostró diferencias significativas respecto al grupo CN (P = 0.105), pero presentó una reducción significativa en el depósito de colágeno en comparación con el grupo AS (P = 0.001). No se observaron diferencias significativas entre los tres grupos de intervención (Figura 4B, Tabla 1).

Se muestran curvas de fuerza representativas obtenidas mediante el sistema Finger TPS en la Figura 5. Durante la capacitación del operador, la curva de fuerza registrada durante el movimiento de retroceso se mantuvo estable en aproximadamente 5 N (Figura 5A), mientras que la curva de fuerza registrada durante el SP mostró picos repetidos de fuerza correspondientes a la manipulación de pellizco, con la fuerza aplicada mantenida dentro del rango objetivo predeterminado (Figura 5B). Estos perfiles de fuerza demuestran las características de fuerza estandarizadas utilizadas durante la capacitación del operador.

La cronología general del experimento se resume en la Figura 6. Tras el período de aclimatación de 7 días, se realizó la sensibilización con OVA según el cronograma especificado, seguida de desafíos repetidos con OVA. Se administró SP a los grupos AS+SP y AS+SP+MP durante el período de intervención designado, mientras que se administró metilprednisolona antes del desafío con OVA en los grupos de tratamiento correspondientes. La evaluación mediante WBP y la recolección de tejidos se realizaron tras el desafío final (Figura 6).

La plestimografía corporal completa se utiliza ampliamente para evaluar el Penh en roedores conscientes y sin restricción, sin causar lesiones ni malestar significativos25. Aunque el Penh es un indicador indirecto influenciado por el patrón respiratorio y factores ambientales, la medición directa de la resistencia de las vías respiratorias requiere anestesia y traqueostomía, lo cual podría alterar la fisiología de las vías respiratorias26. Sin embargo, se ha informado que el Penh se correlaciona con mediciones invasivas de la resistencia pulmonar27. Veinticuatro horas después del último desafío con OVA, las ratas se colocaron en cámaras sin restricción y se expusieron secuencialmente a PBS aerosolizado seguido de acetilcolina (Ach) en concentraciones de 3,125, 6,25, 12,5, 25 y 50 mg/mL. Cada desafío con aerosol duró 2 min y fue seguido por un período de registro de 5 min28. El grupo AS presentó valores de Penh significativamente más altos que el grupo CN, mientras que el tratamiento con SP, MP o su aplicación combinada redujo significativamente los valores de Penh (P = 0,005; Figura 3B). Este resultado indicó que el SP mejoró la función respiratoria en ratas asmáticas, un hallazgo que aún requiere mayor validación, combinado con mediciones directas de la resistencia de las vías respiratorias (Raw).

La interleucina-4 (IL-4) inicia la inflamación eosinofílica mediada por Th2, mientras que el factor de necrosis tumoral-α (TNF-α) contribuye a la HRA y al remodelado de las vías respiratorias, desempeñando conjuntamente un papel central en la patogénesis del asma pediátrico29. Para evaluar más a fondo la inflamación de las vías respiratorias, los niveles de expresión de IL-4 y TNF-α en tejidos pulmonares se cuantificaron mediante reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa cuantitativa (qRT-PCR). En comparación con el grupo CN, el grupo AS mostró un aumento significativo en la expresión de IL-4 y TNF-α (P = 0.000 y P = 0.000, respectivamente; Figura 3C,D). La expresión de ambas citocinas se redujo significativamente tras el tratamiento con SP o MP, y la combinación de SP y MP produjo la mayor reducción (P = 0.001 y P = 0.000, respectivamente; Figura 3C,D).

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Figura 1: Procedimiento detallado de la manipulación de pellizco vertebral (SP) en ratas. (A) Sostenga la rata en posición prona sobre la palma de la mano del operador. (B) Pellizque la piel en la base de la cola. (C) Levante la piel pellizcada. (D) Gire y avance los dedos cranealmente a lo largo de la columna vertebral hacia Dazhui (GV14). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 2: Ilustración esquemática del Vaso Gobernador (GV), meridiano de la Vejiga (BL) y Dazhui (GV14) en ratas. El diagrama muestra la ubicación anatómica del GV, el meridiano de la Vejiga (BL) y Dazhui (GV14), que sirven como sitios diana para la manipulación por pellizco de la columna vertebral. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 3: Efectos de la manipulación por compresión de las apófisis espinosas sobre el peso corporal, la hiperreactividad de las vías respiratorias y los factores inflamatorios pulmonares en ratas jóvenes. (AComparación del peso corporal entre los grupos experimentales.BComparación de los valores de pausa mejorada (Penh).C) Expresión génica relativa de la interleucina-4 (IL-4) en tejido pulmonar. (D) Expresión génica relativa del factor de necrosis tumoral-α (TNF-α) en tejido pulmonar. Los datos se presentan como media ± SD. *P < 0,05 y **P < 0.01 frente al grupo CN; #P < 0,05 y ##P < 0,01 frente al grupo AS. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 4: Cambios histopatológicos representativos en el tejido pulmonar. (A) Tinción con hematoxilina y eosina (HE) que muestra inflamación peribronquiolar. (B) Tinción con tricrómico de Masson que muestra depósito de colágeno y remodelación de las vías respiratorias. Las imágenes se obtuvieron con un aumento de 200×. Barras de escala = 100 µm. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 5: Curvas de fuerza representativas registradas durante la manipulación de pellizco en la espina utilizando el sistema Finger TPS. (A) Curva de fuerza registrada durante la manipulación de retroceso. (B) Curva de fuerza registrada durante la manipulación de pellizco en la espina (SP). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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Figura 6: Cronograma experimental. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

GrupoPuntuación de inflamación en HEÁrea de colágeno/perímetro de la membrana basal (μm²/μm)
CN1.10 ± 0.252.50 ± 0.43
AS2.32 ± 0.50**4.23 ± 0.53**
AS+SP1.66 ± 0.27##3.12 ± 0.56*##
AS+MP1.67 ± 0.31##3.12 ± 0.50*##
AS+SP+MP1.34 ± 0.27##3.01 ± 0.33##

Tabla 1: Puntuaciones de histopatología pulmonar. La inflamación peribronquiolar se evaluó mediante tinción con HE, y el remodelado de las vías respiratorias se cuantificó como el área positiva para colágeno normalizada respecto al perímetro de la membrana basal (µm2/µm). Los datos se presentan como media ± SD (n = 5 por grupo). *P < 0.05 y **P < 0,01 frente al grupo CN; #P < 0,05 y ##P < 0,01 frente al grupo AS.

Discusión

La sensibilización y el desafío con ovoalbúmina (OVA) son uno de los modelos experimentales más utilizados para estudiar el asma pediátrico30,31. El presente estudio demostró que el protocolo estandarizado de manipulación mediante compresión de la espina dorsal (SP) alivió la inflamación crónica de las vías respiratorias, la hiperreactividad de las vías respiratorias (AHR) y la remodelación de las vías respiratorias. Estudios clínicos previos han mostrado que el masaje pediátrico tradicional, incluyendo SP, mejora el asma y otras enfermedades alérgicas en niños11,13,32. Además, estudios previos en animales han demostrado que SP atenuó la inflamación de las vías respiratorias en modelos de rata joven con asma mediante la modulación de la microbiota intestinal12,15. El presente estudio demostró además que la aplicación de un protocolo estandarizado de SP mejoró la inflamación crónica de las vías respiratorias, la AHR y la remodelación de las vías respiratorias en un modelo de rata joven con asma. Asimismo, SP potenció los efectos terapéuticos de la metilprednisolona (MP) mientras reducía sus efectos secundarios que retrasan el crecimiento.

La técnica SP se ha practicado en China durante más de 1.000 años y sigue siendo una de las técnicas de masaje pediátrico más utilizadas para la prevención y el tratamiento del asma y otras enfermedades infantiles12,15,33,34,35. A pesar de su larga historia de aplicación clínica, la técnica SP sigue siendo relativamente desconocida fuera de China. Según la teoría de la medicina tradicional china, los meridianos GV y BL recorren o están adyacentes a la columna vertebral y se comunican con los órganos internos. Por consiguiente, se cree que la estimulación de los meridianos GV y BL regula la función visceral, modula la actividad inmunitaria y mejora la resistencia a las enfermedades. La técnica SP consiste en pellizcar, levantar, torcer y avanzar sobre la piel a lo largo de la columna vertebral, estimulando así tanto el meridiano GV como el BL. Esta manipulación aplica simultáneamente fuerzas compresivas y de tracción sobre la piel y la fascia subyacente, generando una estimulación mecánica moderada. En la práctica clínica, habitualmente se realiza antes y después de la técnica SP una manipulación suave de frotación dorsal para reducir la estimulación y mejorar la comodidad del paciente. La frotación dorsal consiste en movimientos suaves descendentes a lo largo de la espalda y se utiliza ampliamente en el masaje pediátrico. Por lo tanto, basándose en los principios de relevancia clínica, viabilidad, simplicidad y reproductibilidad, el protocolo estandarizado incluye tanto la técnica SP como la manipulación de frotación dorsal.

Estudios previos han demostrado que el SP reduce la inflamación tanto en los pulmones como en el hipocampo mediante mecanismos inmunomoduladores12,36. El asma pediátrico se caracteriza por una inflamación sesgada hacia el tipo Th2, estrechamente asociada con una desregulación inmunitaria37. Estudios experimentales anteriores informaron que el acariciado manual o con cepillo regulaba las respuestas inmunitarias en ratones cuando se realizaba con una presión de 100–150 mmH₂O (7–11 mmHg) y una velocidad de aproximadamente 3 cm/s38. Además, un estudio clínico indicó que el acariciado realizado a una velocidad de aproximadamente 1–10 cm/s era percibido como más agradable39. Con base en estos hallazgos, el protocolo estandarizado adoptó una fuerza de acariciado dorsal de 5 ± 0,6 N y una velocidad de 5 cm/s para lograr un efecto calmante adecuado. La presión, frecuencia y número de repeticiones del SP se determinaron según estudios previos12,15 e investigaciones relacionadas de otros grupos de investigación40,41. Aunque estudios anteriores han estandarizado ya sea el acariciado manual dorsal (20 cm/s; aproximadamente 100 mmH₂O) o la estimulación mecánica del vaso sanguíneo (GV) (30–50 g; aproximadamente 15,3 cm/s) para lograr la inhibición cardiovascular o promover la remodelación sináptica en roedores, el SP manual representa una intervención biomecánica distinta que depende de la retroalimentación táctil y propioceptiva y, por lo tanto, no puede replicarse completamente mediante dispositivos mecánicos existentes. Esta diferencia resalta la importancia de los protocolos estandarizados por el practicante para futuras investigaciones traslacionales sobre intervenciones táctiles en el asma alérgico.

Numerosos estudios publicados en chino han demostrado que el SP modula la función inmunitaria y suprime la inflamación42,43,44. Sin embargo, hasta donde se sabe actualmente, ningún estudio previo fuera del grupo de investigación del autor ha estandarizado la presión y velocidad del SP para investigar una enfermedad específica en modelos animales de asma pediátrico. Estudios anteriores investigaron los mecanismos subyacentes del SP en modelos de rata joven con asma, incluyendo la modulación de la microbiota intestinal, el aumento en la producción de ácidos grasos de cadena corta, la mejora de la función muscular respiratoria (por ejemplo, la fuerza del diafragma) y la atenuación de la inflamación de las vías respiratorias y la disfunción pulmonar11. El presente estudio se centró principalmente en establecer un protocolo estandarizado, en lugar de elucidar exhaustivamente los mecanismos de acción subyacentes. Se utilizó un sistema de medición y registro táctil de alta precisión para estandarizar la fuerza aplicada tanto durante el masaje de la espalda como durante el SP, mientras que la velocidad y frecuencia de las manipulaciones se estandarizaron según estudios previos. Se seleccionaron ratas porque su tamaño corporal facilita un manejo estable y la aplicación manual del SP, al tiempo que se aproxima estrechamente al procedimiento clínico. El masaje de la espalda se realizó con los dedos de una sola mano, tal como se hace en la práctica clínica pediátrica. Debido al tamaño corporal más pequeño de las ratas, el SP se realizó con tres dedos de una mano en lugar de con ambas, manteniendo al mismo tiempo las características biomecánicas esenciales de la técnica clínica. Esta modificación reproduce fielmente la estimulación de los meridianos GV y BL en el modelo de rata. Dado que los parámetros de medición pueden variar entre diferentes sistemas de medición de presión táctil, la estandarización de la manipulación manual basada en las respuestas conductuales de las ratas durante el masaje de la espalda y el SP podría ofrecer una mayor reproducibilidad que depender únicamente de mediciones de fuerza específicas del dispositivo. Estudios previos también demostraron que el masaje de la espalda ejerce efectos antidepresivos en ratas jóvenes inducidas con CUMS9, aunque el SP produjo efectos terapéuticos significativamente mayores. Por consiguiente, los efectos beneficiosos observados en el presente estudio podrían reflejar parcialmente la contribución de la manipulación mediante masaje de la espalda, además de los efectos principales del SP.

Se deben reconocer varias limitaciones. En primer lugar, el tamaño de la muestra fue relativamente pequeño, lo cual podría limitar la solidez y la generalización de los hallazgos. En segundo lugar, el presente estudio se centró principalmente en establecer y validar un protocolo estandarizado de SP; por lo tanto, investigó solo un conjunto limitado de resultados mecanicistas, en lugar de delinear exhaustivamente los mecanismos biológicos subyacentes. Por consiguiente, no se realizó la validación mecanicista, que incluye recuentos de células inflamatorias en el lavado broncoalveolar (BALF), niveles de IgE específica contra OVA, perfilado de citocinas Th2 (por ejemplo, IL-5, IL-13) y análisis de vías de señalización intracelular. Este resultado indicó que el SP mejoró la función respiratoria en ratas asmáticas, un hallazgo que aún requiere mayor validación, junto con mediciones directas de la resistencia de las vías aéreas (Raw). En tercer lugar, todas las manipulaciones fueron realizadas por un único operador capacitado, y no se evaluó la reproducibilidad entre diferentes operadores entrenados. Por último, no se incluyó un grupo de intervención con solo masaje de espalda para distinguir los efectos independientes del masaje de espalda de los del SP. Los estudios futuros deberían incluir tamaños de muestra más grandes, evaluar la reproducibilidad entre operadores, incorporar grupos de control adicionales e investigar más a fondo los mecanismos moleculares subyacentes a los efectos terapéuticos del SP.

Divulgaciones

Los autores declaran que no tienen nada que revelar. Durante el proceso de elaboración del manuscrito, no se utilizaron herramientas de inteligencia artificial en la preparación de este manuscrito. Los autores asumen la responsabilidad completa sobre la integridad y exactitud del manuscrito final.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (líder del proyecto Xiong Ying, No.81973970, dependiente de la Universidad de Medicina China de Nanjing). Los autores agradecen al Instituto de Pediatría, al Laboratorio Clave de Jiangsu para la Salud Infantil y la Medicina China, y al Laboratorio Clave de Investigación de Acupuntura y Medicina del Ministerio de Educación por proporcionar instalaciones, instrumentos y equipos.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Gel de 4% Al(OH)3Shanxi ZHHC Biomedical Technology Co., LTD, ChinaBS010N/A
Ach (acetilcolina)Sigma, USAA2251N/A
Portaobjetos adhesivosCitotest, Jiangsu, ChinaREF.188105
P/N.80312-3161		N/A
Bolsas para residuos biopeligrososNanjing Xinyuan plastic Co., Ltd.HJ421-2008N/A
Máquina para calentar tejidos biológicosKedee, Zhejiang, ChinaKD-HIIN/A
Máquina para incluir tejidos biológicosKedee, Zhejiang, ChinaKD-BMN/A
Máquina para extender tejidos biológicosKedee, Zhejiang, ChinaKD-PIN/A
Buxco Research SystemsDSI Buxco,Wilmington, NC,USAPFTN/A
Mezclador ajustable (MX-S)DLAB, Beijing, China8031102000N/A
Centrífuga para microplacasScilogex, USASCI-CF2800M E050S11B000798N/A
Banca de flujo laminar Sanfa, Shanghai, ChinaSF-CJ-1AN/A
Centrífuga convencionalDLAB, Beijing, ChinaD100BE: 9031001011N/A
Guantes estériles desechablesShanghai Kebang Medical Latex Equipment Co., Ltd.22010739https://www.sh-kebang.com/products_detail/6.html
Balanza electrónicaJinghai, ShanghaiYP3001NN/A
Balanza electrónicaJinghai,  Shanghai, ChinaYP3001NN/A
Sistema Finger TPSPressure Profile System, Inc, USAVersión de software aplicable: Chameleon 2018https://pressureprofile.com/body-pressure-mapping/finger-tps
 Microscopio óptico de fluorescenciaOlympus, Tokyo, JapanDP70N/A
Sterilizador de vapor a alta presiónTomy, JapanSX-500N/A
Centrífuga congeladora de alta velocidadEppendorf5418RN/A
Kit de tinción tricrómica de MassonSolarbio, Shanghai, ChinaG1340N/A
Micropipetas y puntas estérileseppendorfJ48931Lhttps://www.eppendorf.com/hk-en/Products/Liquid-Handling/All-Pipettes-Dispensers-Automated-Liquid-Handlers/Eppendorf-Reference2-p-PF-222171
MicrotomosLeica, GermanRM2145N/A
MP (succinato sódico de metilprednisolona)Shyndec, Shanghai, ChinaH20070007N/A
Espectrofotómetro NanoDrop LiteThermo Fisher Scientific, USAnd-ndl-pr-2yrw-cccN/A
 Controlador de nebulizaciónEmka, FranceVENT4:14554N/A
Sobres opacos selladosNanjing Kongdu printing Co., Ltd201701N/A
OVA (Grado II)Sigma, USAA5253N/A
OVA (Grado V)Sigma, USAA5503N/A
Kit de PCRYeasen, Shanghai, China11201ES08N/A
Contenedor resistente a perforaciones para objetos punzantesNanjing Xinyuan plastic Co., Ltd.KMT-15YN/A
Kit de transcripción inversaBio.vazyme, Nanjing, ChinaR323N/A
Centrífugas pequeñasHettich, GermanMIKRO 220R D-78532N/A
Bolas de algodón estériles y secasZHENDE, Zhejiang, China202203121Bhttps://www.zhende.com/index.php?g=product&m=index&a=info&id=13
TrizolBio.vazyme, Nanjing, ChinaR771N/A
Freezer de almacenamiento ultrafríoThermo Fisher Scientific, USA950GP-ULTSN/A
Nebulizador ultrasónicoJiangsu Yuwell Medical Instruments Co., Ltd., China402AIN/A
Sistema de PCR en tiempo real ViiATM7Life TechnologiesTM , Singapore278882021N/A
Pletismógrafo de cuerpo enteroScrieq, Canada1185162,1184031,1185898FV-FXM1-01, cartucho espiratorio FX1: FV-FXM1 ET, cartucho inspiratorio FX1: FV-FXM1-IA

Referencias

  1. Bateman ED, et al. Global strategy for asthma management and prevention: GINA executive summary. Eur Respir J. 2008;31(1):143-178.
  2. Lizano-Barrantes C, et al. Impact of treatment adherence and inhalation technique on asthma outcomes of pediatric patients: A longitudinal study. Front Pharmacol. 2024;15:1340255.
  3. Vähätalo I, et al. Long-term adherence to inhaled corticosteroids and asthma control in adult-onset asthma. ERJ Open Res. 2021;7(1).
  4. Yılmaz İ, et al. Biological therapy management from the initial selection of biologics to switching between biologics in severe asthma. Tuberk Toraks. 2023;71(1):75-93.
  5. García-Marcos L, et al. Asthma management and control in children, adolescents, and adults in 25 countries: A Global Asthma Network phase I cross-sectional study. Lancet Glob Health. 2023;11(2):e218-e228.
  6. Kelly HW, et al. Effect of inhaled glucocorticoids in childhood on adult height. N Engl J Med. 2012;367(10):904-912.
  7. Wu J, Yang XW, Zhang M. Massage therapy in children with asthma: A systematic review and meta-analysis. Evid Based Complement Alternat Med. 2017:5620568.
  8. Yue QJ, et al. Effect of pediatric massage in the treatment of chronic persistent asthma in children: A systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. J Hainan Med Univ. 2019;25:1260-1266.
  9. Wu R, et al. Traditional pediatric massage enhanced hippocampal GR, BDNF, and IGF-1 expressions and exerted an antidepressant effect in an adolescent rat model of CUMS-induced depression. Neuroscience. 2024;542:47-58.
  10. Lin L, Yu L, Zhang S, Liu J. The positive effect of mother-performed infant massage on infantile eczema and maternal mental state: A randomized controlled trial. Front Public Health. 2022;10:1068043.
  11. Lin L, et al. Traditional pediatric massage enhanced skeletal muscle mass in OVA-exposed adolescent rats via regulating the SCFAs-FFAR2-IGF-1/AKT pathway. Front Microbiol. 2024;15:1492783.
  12. Xiong Y, Noraas AU, Yang X. The effect of chiropractic manipulation on atopic symptoms and gut microbiota in children with atopy. J Li Shizhen Tradit Chin Med. 2017;28:2440-2442.
  13. Liu Y, Gu Y, Xiong Y. Wrist-ankle acupuncture combined with spine-pinching manipulation for allergic rhinitis in children: A randomized controlled trial. World J Acupunct Moxibustion. 2019;29:259-263.
  14. Zhu Y, et al. Chiropractic therapy modulated gut microbiota and attenuated allergic airway inflammation in an immature rat model. Med Sci Monit. 2020;26:e926039.
  15. Lu W, Fang M, Yang X. Observation on the influence of parent-child massage on children's psychological and behavioral problems. Chin Med Mod Distance Educ China. 2025;23(4):75-78.
  16. Lund I, Lundeberg T, Kurosawa M, Uvnäs-Moberg K. Sensory stimulation (massage) reduces blood pressure in unanesthetized rats. J Auton Nerv Syst. 1999;78(1):30-37.
  17. Chen YN, et al. Repetitive unidirectional spinal tactile stimulation engages microglial BMAL1 pathways to promote synaptic remodeling in the medial prefrontal cortex of adolescent VPA-exposed mice. J Neuroinflammation. 2025;23(1):23.
  18. Gorrell LM, et al. Spinal manipulation characteristics: A scoping literature review of force-time characteristics. Chiropr Man Therap. 2023;31(1):36.
  19. Papadopoulos NG, Miligkos M, Xepapadaki P. A current perspective of allergic asthma: From mechanisms to management. Handb Exp Pharmacol. 2022;268:69-93.
  20. Nials AT, Uddin S. Mouse models of allergic asthma: Acute and chronic allergen challenge. Dis Model Mech. 2008;1(4-5):213-220.
  21. Martin JG, Tamaoka M. Rat models of asthma and chronic obstructive lung disease. Pulm Pharmacol Ther. 2006;19(6):377-385.
  22. QDV, et al. Construction of an acupoint atlas for experimental rats. Acupunct Res. 2025;50(11):1339-1351.
  23. Dong L, et al. Hypoxic hUCMSC-derived extracellular vesicles attenuate allergic airway inflammation and airway remodeling in chronic asthma mice. Stem Cell Res Ther. 2021;12(1):4.
  24. Muhamad SA, et al. Intranasal administration of Lignosus rhinocerotis (Cooke) Ryvarden (Tiger Milk Mushroom) extract attenuates airway inflammation in a murine model of allergic asthma. Exp Ther Med. 2019;17(5):3867-3876.
  25. Vaickus LJ, Bouchard J, Kim J, Natarajan S. Assessing pulmonary pathology by detailed examination of respiratory function. Am J Pathol. 2010;177(4):1861-1869.
  26. Glaab T, Taube C, Braun A, Mitzner W. Invasive and noninvasive methods for studying pulmonary function in mice. Respir Res. 2007;8(1):63.
  27. Lomask M. Further exploration of the Penh parameter. Exp Toxicol Pathol. 2006;57(Suppl 2):13-20.
  28. Leung SY, et al. Effect of transforming growth factor-beta receptor I kinase inhibitor 2,4-disubstituted pteridine (SD-208) in chronic allergic airway inflammation and remodeling. J Pharmacol Exp Ther. 2006;319(2):586-594.
  29. Ogulur I, et al. Type 2 immunity in allergic diseases. Cell Mol Immunol. 2025;22(3):211-242.
  30. Lee JH, Son SH, Kim NJ, Im DS. NJK14047 suppression of the p38 MAPK pathway ameliorates OVA-induced allergic asthma during sensitization and challenge periods. Biomol Ther (Seoul). 2023;31(2):183-192.
  31. Li J, et al. Establishment of a juvenile mouse asthma model induced by postnatal hyperoxia exposure combined with early OVA sensitization. Heliyon. 2024;10(1):e23291.
  32. Wei J, Yang X. Efficacy of pediatric tuina on spleen deficiency syndrome and allergic constitution in children with bronchial asthma during the remission period: A study of 29 cases. J Pediatr Tradit Chin Med. 2023;19(3):86-89.
  33. Gao J, He J. Fifty-eight cases of allergic rhinitis treated with spine-pinching manipulation and acupuncture in Switzerland. World J Acupunct Moxibustion. 2010;20(3).
  34. Hu Y, et al. Clinical study of Yupingfeng Powder combined with spine-pinching manipulation for cough variant asthma in children. Heilongjiang J Tradit Chin Med. 2024;53(2):369-371.
  35. Yao D, Zhang Y, Deng L. Effect of spine-pinching manipulation on asthma control in children. Heilongjiang J Tradit Chin Med. 2020;49(2):157-158.
  36. Zhang X, et al. Traditional pediatric massage exerted an antidepressant effect and activated the IGF-1/NRF2 pathway in CUMS-exposed adolescent rats. J Neuroimmunol. 2025;400:578554.
  37. Lan J, McCray A, Brown E, Eddens T. Early-life viral infections and asthma: New cells and ideas. Curr Opin Pediatr. 2025;37(6):597-605.
  38. Major B, et al. Massage-like stroking boosts the immune system in mice. Sci Rep. 2015;5:10913.
  39. Ackerley R, Carlsson I, Wester H, Olausson H, Backlund Wasling H. Touch perceptions across skin sites: Differences between sensitivity, direction discrimination, and pleasantness. Front Behav Neurosci. 2014;8:54.
  40. Li Q, et al. Experimental study on the effects of different durations of spine-pinching manipulation on immune function in rats with Wei Qi deficiency. Jiangsu J Tradit Chin Med. 2017;49(9):75-77.
  41. Tang Q, Shen L, Lin L. Effects of spine-pinching manipulation with different stimulation intensities on hippocampal inflammation-related factors and behavioral disorders in autistic rats. J Hunan Univ Chin Med. 2025;45(7):1264-1270.
  42. Li Z, et al. Effects of spine-pinching therapy on thoracic duct lymph flow and mesenteric lymphatic microcirculation in rats with spleen deficiency. China J Tradit Chin Med Pharm. 2025;40(8):4246-4250.
  43. Ma W, et al. Effects of spine-pinching intervention on anorexia in young rats based on the 2-AG/CB1/AMPK1 pathway. Shaanxi J Tradit Chin Med. 2025;46(2):159-164.
  44. Tang Q, et al. Effects of spine-pinching manipulation on BDNF and CREB protein expression in different brain regions of rats with autism spectrum disorder. J Hunan Univ Chin Med. 2025;45(2):259-266.

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