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Artículo de investigación
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11 de septiembre de 2026
* These authors contributed equally
Este estudio evalúa la expresión de miR-21-5p, su asociación con la molécula de adhesión celular 1 y sus relaciones con la migración, proliferación, expresión de marcadores inflamatorios y supervivencia en tejidos y líneas celulares de cáncer de pulmón de células no pequeñas.
Existen evidencias que indican que el miR-21-5p es un regulador molecular importante en el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC). La molécula de adhesión celular 1 (CADM1) es un posible supresor tumoral, pero la relación reguladora entre el miR-21-5p y CADM1 en la progresión del NSCLC aún no está clara. Se utilizó la PCR cuantitativa de transcripción inversa (qRT-PCR) para detectar la expresión del miR-21-5p y de CADM1 en tejidos y células de NSCLC; la unión específica entre el miR-21-5p y CADM1 se verificó mediante un ensayo de gen reportero de luciferasa dual; la capacidad de migración celular se evaluó mediante el ensayo Transwell; se combinaron los datos clínico-patológicos y el análisis de supervivencia para explorar el significado clínico del miR-21-5p; el enriquecimiento funcional de los genes diana del miR-21-5p se analizó mediante bioinformática. La expresión del miR-21-5p en tejidos de NSCLC fue significativamente mayor que en los tejidos normales adyacentes, y los pacientes con alta expresión de miR-21-5p presentaron una supervivencia general más corta. Una expresión elevada de miR-21-5p constituye un factor de riesgo independiente para la supervivencia de los pacientes con NSCLC; la sobreexpresión del miR-21-5p promovió la migración celular en células de NSCLC y aumentó la expresión de factores inflamatorios; el ensayo de gen reportero de luciferasa dual confirmó que el miR-21-5p se une directamente a CADM1; la sobreexpresión de CADM1 inhibió la migración celular en células de NSCLC y redujo la expresión de factores inflamatorios; el análisis bioinformático mostró que los genes diana del miR-21-5p estaban enriquecidos en múltiples vías de señalización relacionadas con la aparición y el desarrollo tumoral. El miR-21-5p promueve la progresión del NSCLC al dirigirse e inhibir CADM1 y podría servir como biomarcador pronóstico y como diana terapéutica.
En todo el mundo, el cáncer de pulmón se encuentra entre las principales causas de mortalidad relacionada con el cáncer, con una incidencia en constante aumento1,2. Entre las poblaciones del este de Asia, la incidencia y la mortalidad por cáncer de pulmón alcanzan 222,1 y 155,5 por cada 100 000 hombres, frente a 158,1 y 87,3 por cada 100 000 mujeres, respectivamente. El carcinoma de pulmón de células no pequeñas (CPCNP) representa aproximadamente el 80 % de todos los casos de cáncer de pulmón y comprende tres subtipos histológicos principales3. En comparación con el cáncer de pulmón de ....
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Este estudio retrospectivo fue revisado y aprobado por el Comité de Ética del Hospital de Medicina Tradicional China de Quzhou (número de aprobación: 202402208). Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de cada paciente incluido o de un tutor legal antes de la recolección de muestras.
Recolección de muestras
Los tejidos tumorales primarios de CPNM se obtuvieron quirúrgicamente de pacientes inscritos, mientras que sus tejidos pulmonares normales adyacentes apareados se recopilaron retrospectivamente del Centro Nacional de Investigación e Ingeniería para Biopsia Clínica (Ciudad de Quzhou, provincia de Zhejiang,....
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Correlación entre la expresión de miR-21-5p y las características clinicopatológicas de pacientes con NSCLC
Un total de 157 muestras tumorales de NSCLC se estratificaron en grupos de baja expresión (n = 61) y alta expresión (n = 96) de miR-21-5p según los niveles medianos de miR-21-5p, y los análisis de chi-cuadrado no revelaron correlaciones significativas entre la expresión de miR-21-5p y la edad del paciente (χ2 = 1,36, P = 0,2435), el sexo (χ2 = 1,06, P = 0,3032), el tipo hi.......
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Este estudio confirmó sistemáticamente una expresión elevada de miR-21-5p en tejidos clínicos de CPNM, lo cual se correlacionó con una transcripción aumentada de factores inflamatorios, una mayor capacidad de migración y proliferación celular, mientras que experimentos de luciferasa dual, qRT-PCR y de rescate identificaron a CADM1 como su blanco funcional directo; asimismo, la predicción mediante bioinformática indicó que los blancos downstream de miR-21-5p estaban enriquecidos en las cascadas oncogénicas de MAP.......
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Los autores no tienen intereses financieros ni no financieros relevantes que revelar.
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Formol tamponado neutro al 10 % | Fisher Scientific (Fisherbrand)™) | SF100-4 (típico) | Fijador de tejidos; tejidos seccionados para &espesor <5 mm, fijado a temperatura ambiente durante 14-26 horas |
| Placa de cultivo celular de 24 pocillos | Corning | 3526 | Placa para sembrar células transfectadas y realizar el ensayo de cicatrización (raspado) |
| Línea celular A549 | ATCC (o Centro de Recursos de Shanghái) | CCL-185 | Línea celular de cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) humano (adenocarcinoma) |
| kit de ensayo CCK-8 | Dojindo | CK04 | Detección de proliferación |
| Medio de cultivo celular (no especificado) | Gibco (Thermo Fisher Scientific) | Varios (por ejemplo, RPMI-1640: 11875093, F-12K: 21127022) | Medio basal para líneas celulares de CPHN; la composición exacta depende de la línea celular utilizada |
| cel-miR-39 (control exógeno de calibración) | GenePharma (Shanghái, China) | Personalizado (por ejemplo, B010302) | Referencia externa para la normalización de la expresión de miARN, añadida durante el aislamiento de ARN |
| CO2 Incubadora (humidificada) | Thermo Fisher Scientific (Heracell) | Heracell 150i (50116047) | Proporciona 37°C, 5% CO₂2, y humedad saturada para cultivo celular |
| PCR/TNFα/parejas de cebadores para IL-6 | Sangon Biotech | síntesis personalizada | Secuencias completas en el Archivo Suplementario 1 |
| Solución de tinción con violeta de cristal | Solarbio | G1062 | Tinción de células migradas |
| medio DMEM | Gibco | 11965092 | Para el cultivo de H1299/293T |
| Kit de ensayo de luciferasa dual | Promega | E1910 | Detección de la región 3'UTR de CADM1 WT/MUT |
| miR-39 exógeno de C. elegans | Qiagen | control interno personalizado | Añadido tras el aislamiento de ARN para normalización |
| Suero bovino fetal (SBF) | Gibco (Thermo Fisher Scientific) | 10437028 | Suplemento añadido al medio de cultivo en una concentración final del 10 % para favorecer el crecimiento celular |
| Punta de pipeta fina (por ejemplo, 10 µL punta | Axygen (Corning) | T-300 | Utilizado para raspar manualmente una monocapa de células y crear un "herida" hueco |
| GAPDH (control endógeno) | Varios proveedores (por ejemplo, Sangon Biotech, RiboBio; cebadores personalizados) | Personalizado | Gen de referencia para la normalización de ARNm utilizado en qRT-PCR |
| GO/KEGG (anotación clusterProfiler) | Bioconductor | construcción 2026 | |
| GraphPad Prism | GraphPad Software | v9.5.1 | Representación gráfica & estadísticas in vitro |
| Línea celular H1299 | ATCC (o Centro de Recursos de Shanghái) | CRL-5803 | Línea celular de cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) humano derivada de metástasis en ganglio linfático |
| SFB inactivado por calor | Gibco | 10099141 | concentración de trabajo al 10 % |
| línea celular HEK-293T | ATCC | CRL-3216 | RRID:CVCL_0063; STR probado mensualmente, detección de micoplasma negativa |
| Mezcla para empaquetamiento de lentivirus | Genecopoeia (o Takara Bio) | HPK-LvT-100 (Genecopoeia) | Proporciona plásmidos de empaquetamiento (gag/pol, rev, vsv-g) para la producción de lentivirus |
| Vector Lentivirus-21 (LV-21) | GeneChem (Shanghái, China) o Genecopoeia | Personalizado | Vector lentiviral que contiene miR-21-5p para la construcción de líneas celulares con expresión estable |
| Vector de lentivirus-NC (LV-NC) | GeneChem (Shanghái, China) o Genecopoeia | Personalizado | Vector lentiviral de control negativo sin inserto de miR-21-5p |
| Reactivo de transfección lipídica | Thermo Fisher | L3000015 | Para transfección transitoria |
| Reactivo de transfección Lipofectamine 3000 | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | L3000015 o L3000008 | Reactivo de transfección basado en lípidos; 50 horas post-transfección para experimentos posteriores |
| Metanol | Sinopharm | 67-56-1 | Fijación celular |
| Metanol (fijador/diluyente para tinción) | Sigma-Aldrich | 34860 | Utilizado como fijador o diluyente para la tinción con violeta de cristal |
| inhibidor de miR-21-5p/inhibidor-NC | GenePharma | síntesis personalizada | Secuencias en el Archivo Suplementario 1 |
| mimético de miR-21-5p/mimético-NC | GenePharma | síntesis personalizada | Secuencias en el Archivo Suplementario 1 |
| miRDB | Washington University | v6.0 | |
| miRWalk | Universidad de Heidelberg | v3.0 | |
| Centro Nacional de Ingeniería de Biopsias | Centro Nacional de Ingeniería de Biopsias (China) | N/A | Proveedor institucional de muestras de tejido de cáncer de pulmón con datos clínicos registrados y diagnóstico histopatológico |
| Tejido de CPNM (para cultivo primario) | Shanghai Rui Bao He Biotechnology Co. | Pedido personalizado | Fuente del tejido; cultivado en medio con 10 % de suero bovino fetal 37°C; células con buena morfología en fase de crecimiento logarítmico seleccionadas para la transfección |
| Instrumento de PCR | Applied Biosystems (Thermo Fisher Scientific) | 7500 Fast (4406984) | Obtener productos de amplificación para qRT-PCR |
| Penicilina-Estreptomicina | Solarbio | P1400 | 100 U/mL de penicilina, 100 μg/mL estreptomicina |
| Pipetas (individuales & Multicanal | Eppendorf | Serie Investigación Plus | Para un manejo preciso de líquidos en todos los experimentos |
| Polibreno | Sigma-Aldrich | H9268 | Final 5 μg/mL para la infección con lentivirus |
| Puromicina | InvivoGen | ant-pr-1 | 5 μg/mL para el cribado de células estables |
| Clorhidrato de puromicina | Thermo Fisher Scientific (InvivoGen) | ant-pr-1 (InvivoGen); P7255 (Sigma-Aldrich) | antibiótico de selección, utilizado en 5 μg/mL para establecer líneas celulares transfectadas de manera estable |
| R | Fundación R | v4.2.1 | Paquete: clusterProfiler, ggplot2 |
| Kit de transcripción inversa | Takara | RR047 | RT de horquilla para miARN, oligo(dT) para ARNm |
| Tubos EP libres de RNasa | Axygen (Corning) | MCT-150-C | Tubos de 1,5 mL libres de RNasa para almacenamiento y procesamiento de ARN |
| medio RPMI-1640 | Gibco | 11875093 | Para el cultivo de A549 |
| si-CADM1 | GenePharma | síntesis personalizada | Secuencias en el Archivo Suplementario 1 |
| si-NC | GenePharma | síntesis personalizada | Secuencias en el Archivo Suplementario 1 |
| SPSS | IBM | v26.0 | Análisis clínico/regresión de Cox |
| Mezcla maestra de qPCR con SYBR Green | Roche | 4913914001 | amplificación por qRT-PCR |
| TargetScan | MIT | v8.2 | |
| Reactivo para la extracción de ARN total | Takara | 9109 | Lisis basada en fenol/guanidina |
| Cámara tipo Trans-well | Corning (Costar) | 3422 (24 pocillos, 8.0 µm) | Para la transfección celular en medio a temperatura ambiente; se añadieron los cebadores químicos y se incubaron durante 48 h |
| Cámaras de migración Transwell | Corning | 3422 | 8 μm tamaño de poro |
| TRIzol Reagente | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | 15596026 | Extracción de ARN total a partir de muestras de tejido; evaluación de la calidad del ARN mediante las relaciones OD260/280 y OD260/230 |
| Tripsina-EDTA (0,25 %) | Gibco (Thermo Fisher Scientific) | 25200072 | Para desprender las células de los recipientes de cultivo antes de sembrarlas en placas de 24 pozos |
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