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Artículo de investigación

Lesión de la mucosa gástrica inducida por clopidogrel asociada al estrés del retículo endoplasmático en ratas

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DOI:

10.3791/72097

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28 de agosto de 2026

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1Gastroenterology Department, Dagang Hospital of Binhai New Area, 2Clinical Laboratory, Tianjin Adicon Clinical Laboratories Co., Ltd.

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Este estudio investiga la lesión de la mucosa gástrica asociada al tratamiento con clopidogrel en ratas y células epiteliales gástricas, destacando su asociación con cambios moleculares relacionados con el estrés del retículo endoplásmico, apoptosis e inflamación sistémica.

Resumen

El clopidogrel se utiliza ampliamente como agente antiagregante plaquetario para la prevención y el tratamiento de enfermedades trombóticas arteriales, pero su aplicación clínica podría verse limitada por efectos adversos gastrointestinales, incluyendo lesión de la mucosa gástrica. Dado que la supervivencia de las células epiteliales es esencial para mantener la integridad de la mucosa gástrica, planteamos la hipótesis de que la lesión epitelial gástrica inducida por clopidogrel iría acompañada de alteraciones en los marcadores relacionados con el estrés del retículo endoplásmico (ER) y la apoptosis. Para comprobar esta hipótesis, se trataron células epiteliales gástricas humanas GES-1 con diferentes concentraciones de clopidogrel, y se evaluó la viabilidad celular, la apoptosis, la distribución del ciclo celular y los cambios moleculares mediante el ensayo con el kit de conteo celular-8 (CCK-8), citometría de flujo, reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) e inmunotransferencia Western. Paralelamente, se administró clopidogrel por sonda gástrica a ratas Sprague-Dawley para establecer un modelo de lesión gástrica in vivo. Los cambios patológicos en la mucosa gástrica se evaluaron mediante tinción con hematoxilina y eosina, y los niveles séricos de citocinas inflamatorias se midieron mediante ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). El clopidogrel redujo la viabilidad de las células GES-1, promovió la apoptosis y alteró la progresión del ciclo celular. En las ratas, el clopidogrel indujo erosión, edema e infiltración de células inflamatorias en la mucosa gástrica, acompañado por un aumento en los niveles séricos de interleucina (IL)-1β, IL-6 y factor de necrosis tumoral-α (TNF-α). El clopidogrel también incrementó la expresión de los marcadores de estrés del retículo endoplásmico proteína homóloga a C/EBP (CHOP) y factor de transcripción activador 5 (ATF5), aumentó la expresión de la proteína Bcl-2 asociada a X (Bax), disminuyó la expresión de la linfoma de células B 2 (Bcl-2) y elevó la relación Bax/Bcl-2 tanto en tejidos gástricos como en células GES-1. Estos hallazgos sugieren que la lesión de la mucosa gástrica inducida por clopidogrel está asociada con un aumento en la expresión de marcadores relacionados con el estrés del retículo endoplásmico y con la alteración del equilibrio Bax/Bcl-2, aunque en este estudio no se estableció una relación causal directa entre la vía del estrés del retículo endoplásmico y la apoptosis mitocondrial.

Introducción

Los sistemas inmunitarios innato y adaptativo de la mucosa gástrica, que comprenden células epiteliales, células inmunitarias y moléculas de señalización, trabajan juntos para mantener la integridad de la mucosa y actúan como una barrera fisiológica crítica contra factores dañinos1,2. Esta función protectora es esencial para la homeostasis gastrointestinal, y su alteración puede contribuir al desarrollo de enfermedades gástricas, incluyendo la gastritis3. Clínicamente, la lesión de la mucosa gástrica inducida por fármacos es una complicación común, siendo los medicamentos antiinflamatorios no esteroideos y los agentes antiagregantes plaquetarios algunas de las causas más frecuentes4. La integridad de la mucosa gástrica depende de un equilibrio dinámico entre la proliferación celular y la apoptosis5. La exposición crónica a factores ambientales, incluyendo medicamentos, puede alterar este equilibrio, promover la apoptosis y provocar lesión de la mucosa6,7. El retículo endoplásmico desempeña un papel central en el mantenimiento de la homeostasis intracelular. Bajo condiciones de estrés celular, la acumulación de proteínas mal plegadas o desplegadas activa la respuesta de proteínas desplegadas, que incluye la señalización PERK/eIF2α/ATF4/CHOP, la cual puede promover la apoptosis y alterar la expresión de proteínas de la familia de linfoma de células B (Bcl-2)8. ATF5 también participa en las respuestas al estrés mitocondrial y en la interacción entre la disfunción mitocondrial y el estrés del retículo endoplásmico9. Evidencia clínica reciente indica que la terapia antiagregante continua, incluyendo clopidogrel, se asocia con una lesión progresiva de la mucosa gástrica e intestinal10.

El clopidogrel es un agente antiplaquetario ampliamente recetado que requiere una activación metabólica antes de unirse de forma irreversible a los receptores plaquetarios P2Y12, inhibiendo así la agregación plaquetaria mediada por difosfato de adenosina y produciendo efectos antitrombóticos11. Esta bioactivación ocurre principalmente a través de las enzimas hepáticas del citocromo P450. Por lo tanto, la exposición directa de células epiteliales gástricas cultivadas al compuesto progenitor del clopidogrel no reproduce el contexto metabólico y farmacocinético completo del tratamiento con clopidogrel in vivo. Sin embargo, hay evidencia creciente de que el tratamiento con clopidogrel podría estar asociado con úlceras gástricas recurrentes y hemorragia gastrointestinal, lo que resalta la importancia de equilibrar la eficacia antitrombótica con la seguridad gastrointestinal12,13,14. Aunque se han descrito estos efectos adversos, los mecanismos subyacentes a la lesión de la mucosa gástrica asociada al clopidogrel aún no se comprenden completamente, lo que limita el desarrollo de estrategias preventivas y terapéuticas específicas. En el presente estudio, investigamos los efectos del clopidogrel sobre la mucosa gástrica utilizando ratas Sprague–Dawley y células GES-1. Las ratas recibieron clopidogrel por gavaje, y se realizaron experimentos complementarios in vitro utilizando células GES-1. Se llevaron a cabo análisis histopatológicos, moleculares y celulares para investigar si la lesión de la mucosa gástrica inducida por clopidogrel está asociada con estrés del retículo endoplásmico y apoptosis. Por consiguiente, el presente estudio se centró en caracterizar los cambios moleculares asociados con la lesión gástrica inducida por clopidogrel, más que en establecer una vía de señalización causal. Nuestros hallazgos aportan información adicional sobre los cambios moleculares relacionados con la lesión de la mucosa gástrica inducida por clopidogrel y podrían contribuir a estudios futuros dirigidos a prevenir y manejar estos efectos adversos.

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Protocolo

Todos los procedimientos experimentales con animales fueron revisados y aprobados por el Comité de Ética en Experimentación Animal de Dr. Can Biotechnology (Zhejiang) Co., Ltd. El estudio se realizó de acuerdo con las directrices institucionales para el cuidado y uso de animales de laboratorio. El número de aprobación de ética animal fue DRK-20251015210.

Animales y líneas celulares

La aprobación ética cubrió el uso de 20 ratas Sprague–Dawley de grado SPF. En el presente estudio se incluyeron un total de 12 ratas Sprague–Dawley de grado SPF, machos, de 6 a 8 semanas de edad y con un peso de 280 a 300 g al inicio del experimento. Las ratas fueron obtenidas de Hangzhou Ziyuan Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (Hangzhou, China; Licencia de producción n.º SCXK [Zhejiang] 2024-0004) y asignadas aleatoriamente a los grupos control y tratado con clopidogrel, con seis ratas por grupo. Las ratas se mantuvieron en un ambiente controlado a aproximadamente 22 °C bajo un ciclo de luz/oscuridad de 12 h, con acceso libre a alimento estándar y agua potable esterilizada. A todas las ratas se les permitió aclimatarse durante una semana antes del experimento. El hidrogenosulfato de clopidogrel se suspendió en carboximetilcelulosa sódica (CMC-Na) al 0,5 % a una concentración de 0,781 mg/mL. Las ratas del grupo tratado con clopidogrel recibieron hidrogenosulfato de clopidogrel por gavaje oral a 10 mL/kg de peso corporal (equivalente a 1 mL/100 g de peso corporal y a una dosis de 7,81 mg/kg) una vez al día durante 3 días consecutivos. Las ratas del grupo control recibieron un volumen igual de CMC-Na al 0,5 %. La dosis y la duración del tratamiento de 3 días se seleccionaron en base a un modelo previamente descrito en ratas para la administración oral aguda de clopidogrel. Tras el último gavaje en el día 3, se les retiró el alimento durante 12 h, mientras que el agua se proporcionó ad libitum. Las ratas fueron anestesiadas en una cámara de inducción con 3 % de isoflurano en oxígeno, y la anestesia se mantuvo con 1,5 %–2,0 % de isoflurano administrado mediante cono nasal. Se confirmó una profundidad anestésica adecuada por la ausencia de reflejos corneal y de retirada plantar. Se obtuvo sangre mediante punción cardíaca terminal bajo anestesia profunda. Mientras permanecían profundamente anestesiadas, las ratas fueron sacrificadas mediante exsanguinación seguida de toracotomía bilateral. Se confirmó la muerte por la ausencia de respiración espontánea y actividad cardíaca durante al menos 5 minutos, junto con la ausencia de reflejos corneal y de retirada plantar. Luego se extrajo rápidamente el estómago, se abrió a lo largo de la curvatura mayor y se enjuagó suavemente con solución salina fría.

La línea celular epitelial de la mucosa gástrica humana GES-1 fue obtenida de iCell Bioscience Inc. (Shanghai, China; N.º de catálogo iCell-h062) y fue autenticada mediante perfilado de repeticiones en tándem cortas por el proveedor. Las células se cultivaron en medio RPMI-1640 suplementado con 10% de suero bovino fetal (FBS) y 1% de penicilina-estreptomicina en un incubador humedecido a 37 °C con 5% de CO₂. Para los experimentos se utilizaron células de pasajes tempranos, entre los pasajes 3 y 10. Cuando el grado de confluencia celular alcanzó aproximadamente entre el 80% y el 90%, las células se subpasaron con una relación de división de 1:3. Para experimentos posteriores se utilizaron células en fase logarítmica de crecimiento. Para el ensayo CCK-8, las células se sembraron en placas de 96 pozos a una densidad de 6 × 103 células/pozo. Para los análisis de apoptosis y ciclo celular, las células se sembraron en placas de 6 pozos a aproximadamente 5 × 105 células/pozo y se dejaron adherir antes del tratamiento con clopidogrel.

Productos químicos y soluciones

Se utilizó clopidogrel hidrogenosulfato (n.º de cat. C874834; pureza ≥ 99 %) para los experimentos con animales y células. Se preparó una solución stock de clopidogrel disolviendo 100 mg de polvo de clopidogrel en dimetilsulfóxido (DMSO) para obtener una solución stock de 1 M. La solución stock se diluyó posteriormente a las concentraciones de trabajo requeridas antes de su uso. La solución stock de 1 M se diluyó seriadamente con DMSO para preparar soluciones de dosificación 1000× a concentraciones de 10, 100, 200, 400, 600, 800 y 1000 mM. Inmediatamente antes del tratamiento, cada solución de dosificación 1000× se añadió al medio de cultivo completo en una proporción de 1:1000 (v/v) para obtener concentraciones finales de clopidogrel de 0,01, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 y 1,0 mM, respectivamente. El grupo control de vehículo recibió un volumen igual de DMSO sin clopidogrel. Por lo tanto, la concentración final de DMSO se mantuvo en 0,1 % (v/v) en todos los grupos. Las células GES-1 en cultivo no reproducen la bioactivación mediada por citocromo P450 hepático del clopidogrel. Por consiguiente, se utilizó el tratamiento directo con clopidogrel como un modelo exploratorio de exposición al compuesto parental. El rango de concentraciones se seleccionó para caracterizar las respuestas celulares dependientes de la concentración bajo las condiciones experimentales y no debe interpretarse como equivalente a concentraciones plasmáticas o tisulares gástricas clínicamente alcanzables.

Subcultivo de Células

El medio completo se preparó suplementando el medio de cultivo basal con suero bovino fetal (FBS) y penicilina-estreptomicina. Cuando la confluencia celular alcanzó aproximadamente el 80 %, se eliminó el medio de cultivo y las células se lavaron tres veces con solución salina tamponada con fosfato estéril (PBS). A continuación, las células se digirieron con una solución de tripsina-etilendiaminotetraacético (EDTA) durante aproximadamente 1–2 min. Tras la desprendimiento parcial de las células, se añadió medio completo para detener la digestión. La suspensión celular se centrifugó a 1.200 × g durante 3 min. Tras la eliminación del sobrenadante, el sedimento celular se resuspendió en 1–2 mL de medio completo y se sembró en nuevas placas de cultivo según los requisitos del experimento.

Ensayo de viabilidad celular CCK-8

Las células GES-1 en fase de crecimiento logarítmico se sembraron en placas de 96 pocillos a una densidad de 6 × 103 células/pocillo y se cultivaron durante la noche para permitir la adhesión celular. Tras la adhesión, las células se trataron con diferentes concentraciones de clopidogrel (0, 0,01, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 y 1,0 mM) durante 24 h. Al grupo control se le administró la misma concentración final de vehículo. Después del tratamiento, se añadió solución CCK-8 a cada pocillo y se incubó a 37 °C según las instrucciones del kit. Se midió la absorbancia a 450 nm utilizando un lector de microplacas. La viabilidad celular se calculó como un porcentaje respecto al grupo control. En función de los resultados de la curva concentración-respuesta, se seleccionó el tratamiento con 0,1 mM de clopidogrel durante 24 h para los análisis posteriores de apoptosis, ciclo celular, qPCR y Western blot.

Análisis de citometría de flujo

Las células GES-1 se sembraron en placas de 6 pocillos y se trataron con clopidogrel 0,1 mM durante 24 h tras la adhesión celular. Tras el tratamiento, se recolectaron tanto las células en suspensión como las adherentes. Las células adherentes se digirieron con tripsina sin EDTA, se lavaron dos veces con PBS frío y se resuspendieron en tampón de enlace. Las células se tiñeron utilizando un Kit de Apoptosis Annexina V-FITC/PI siguiendo las instrucciones del fabricante. Tras la incubación a temperatura ambiente y en oscuridad, las células apoptóticas se detectaron mediante un citómetro de flujo RaiseCyte 2L6C. Los datos se adquirieron con el software RaiseFlower y se analizaron con el software FlowJo (versión 10.8.1). Las poblaciones de células apoptóticas tempranas, tardías y el total de células apoptóticas se cuantificaron utilizando el software FlowJo.

Análisis citométrico de flujo de la distribución del ciclo celular

Las células GES-1 se sembraron en placas de 6 pocillos y se trataron con clopidogrel 0,1 mM durante 24 h. Después del tratamiento, las células se recolectaron, lavaron con PBS y fijaron en etanol al 70 % previamente enfriado a 4 °C. Las células fijadas se lavaron luego para eliminar el etanol residual e incubadas con solución de tinción de RNasa A y yoduro de propidio a oscuras según las instrucciones del fabricante. La distribución del ciclo celular se analizó mediante citometría de flujo. Los datos se adquirieron utilizando el software de adquisición y se analizaron con el software FlowJo. Las distribuciones del ciclo celular se ajustaron utilizando el modelo de Watson, y se calcularon los porcentajes de células en las fases G0/G1, S y G2/M.

Reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qPCR)

Se extrajo ARN total de las células GES-1 y de muestras de tejido gástrico de rata utilizando un kit de extracción de ARN según las instrucciones del fabricante. Para las muestras de tejido, los tejidos de la mucosa gástrica se recolectaron rápidamente, se homogenizaron en condiciones de baja temperatura y se sometieron a la extracción de ARN. La concentración y pureza del ARN se determinaron midiendo la absorbancia a 260 y 280 nm. Cantidades iguales de ARN se transcribieron inversamente a ADN complementario (cADN) utilizando un kit de transcripción inversa con eliminación de ADN genómico. Se realizó PCR cuantitativa en tiempo real utilizando una mezcla maestra de PCR basada en SYBR Green. Cada reacción se llevó a cabo en un volumen total de 20 µL que contenía 10 µL de mezcla maestra 2×, 1 µL de cADN, 0,4 µL del cebador directo, 0,4 µL del cebador inverso y 8,2 µL de agua ddH₂O libre de RNasa. Las condiciones del ciclo térmico fueron las siguientes: desnaturalización inicial a 95 °C durante 10 min, seguida de 40 ciclos de desnaturalización a 95 °C durante 10 s, hibridación a 60 °C durante 30 s y extensión a 72 °C durante 30 s. Se determinaron los niveles de expresión de CHOP, ATF5, Bcl-2 y Bax. Se utilizó GAPDH como gen de referencia interno. La expresión génica relativa se calculó mediante el método 2−ΔΔCt. Las secuencias de los cebadores se listan en Tabla Suplementaria 1.

Western Blot

Se extrajo la proteína total de células GES-1 y muestras de tejido gástrico de rata. Para las muestras celulares, las células GES-1 tratadas se lavaron con PBS frío y se lisaron utilizando un tampón de lisis RIPA (ensayo de inmunoprecipitación con radioinmunoensayo) que contenía un inhibidor de proteasas. Para las muestras de tejido, los tejidos de la mucosa gástrica se homogenizaron en tampón RIPA bajo condiciones de baja temperatura y luego se centrifugaron para recoger el sobrenadante. Las concentraciones de proteína se determinaron mediante un ensayo de proteína BCA. Se separaron 20 µg de proteína por pocillo mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato sódico (SDS-PAGE) y se transfirieron a membranas de difluoruro de polivinilideno (PVDF). Después de bloquear con albúmina sérica bovina (BSA), las membranas se incubaron durante toda la noche a 4°C con anticuerpos primarios contra CHOP (1:1000), ATF5 (1:1000), Bcl-2 (1:1000), Bax (1:1000) y β-actina (1:5000). Tras lavarlas, las membranas se incubaron con los correspondientes anticuerpos secundarios conjugados con peroxidasa de rábano picante (1:10000). Las bandas proteicas se visualizaron utilizando un reactivo de quimioluminiscencia mejorado y se capturaron con un sistema de imagen de quimioluminiscencia. Las intensidades de las bandas se cuantificaron mediante software de análisis de imágenes y se normalizaron respecto a β-actina.

Evaluación histopatológica

Se recolectaron muestras de tejido gástrico de ratas Sprague–Dawley tras el tratamiento con clopidogrel y se fijaron en formalina tamponada neutra al 10%. Las muestras se deshidrataron, aclararon, embebieron en parafina y seccionaron con un grosor de 4 µm. Los cortes en parafina se tiñeron con hematoxilina y eosina. Los cambios histopatológicos se evaluaron cualitativamente mediante microscopía óptica basándose en la morfología de la mucosa, la integridad epitelial, el edema y la infiltración de células inflamatorias. Se capturaron imágenes representativas. No se aplicó ningún sistema de puntuación histológica.

Inmunohistoquímica

Las secciones de tejido gástrico embebido en parafina se desparafinizaron en xileno y se rehidrataron mediante una serie graduada de etanol. Se realizó la recuperación de antígenos inducida por calor en tampón citrato. La actividad peroxidásica endógena se bloqueó con peróxido de hidrógeno al 3 % durante 10 minutos, y el enlace no específico se bloqueó con suero de cabra normal durante 30 minutos a temperatura ambiente. Luego, las secciones se incubaron durante la noche a 4 °C con anticuerpos primarios contra CHOP, ATF5, Bcl-2 y Bax. Después de lavar con PBS, las secciones se incubaron con el anticuerpo secundario correspondiente conjugado con peroxidasa de rábano picante. Las señales inmunorreactivas se visualizaron utilizando una solución cromógena de DAB, seguido de contraste con hematoxilina. Las secciones se deshidrataron, aclararon, montaron y examinaron al microscopio óptico. Se capturaron imágenes representativas, y el área de tinción positiva se cuantificó mediante software de análisis de imágenes.

Tinción por inmunofluorescencia

Las secciones de tejido gástrico embebido en parafina se desparafinizaron, rehidrataron y sometieron a recuperación de antígenos inducida por calor en tampón citrato. Después de bloquear con suero de cabra normal durante 30 min, las secciones se incubaron durante la noche a 4 °C con anticuerpos primarios contra CHOP (1:50), ATF5 (1:100), Bcl-2 (1:50) y Bax (1:200). Tras lavar con PBS, las secciones se incubaron con los anticuerpos secundarios fluorescentes correspondientes (1:500) durante 1 h a temperatura ambiente en la oscuridad y luego se contratiñeron con DAPI. Las imágenes se capturaron mediante un microscopio de fluorescencia a un aumento de ×200. Se analizaron tres campos seleccionados aleatoriamente y no superpuestos de cada animal utilizando Image-Pro Plus 6.0, y la intensidad de fluorescencia se expresó como IOD/Área. En el análisis se incluyeron tres animales por grupo.

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA)

Se recolectaron muestras de sangre de ratas Sprague–Dawley después del tratamiento y se dejaron coagular a temperatura ambiente. El suero se separó mediante centrifugación y se almacenó a −80 °C hasta el análisis. Los niveles séricos de IL-1β, IL-6 y TNF-α se midieron utilizando kits de ELISA según las instrucciones del fabricante. La absorbancia se midió usando un lector de microplacas, y las concentraciones de citocinas se calcularon según las curvas estándar.

Análisis estadístico

Los análisis estadísticos se realizaron utilizando software de análisis estadístico. Los datos se presentan como media ± DE. La normalidad y la homogeneidad de la varianza se evaluaron mediante la prueba de Shapiro-Wilk y la prueba de Levene, respectivamente. Las comparaciones entre dos grupos se realizaron utilizando la prueba t de Student. Las comparaciones entre múltiples grupos se realizaron mediante un análisis de varianza unidireccional seguido de la prueba post hoc de Dunnett. Un valor de P < 0,05 se consideró estadísticamente significativo. Todos los experimentos con células se realizaron con al menos tres réplicas biológicas independientes.

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Resultados

El clopidogrel reduce la viabilidad de las células GES-1 y aumenta la apoptosis In Vitro

Primero investigamos si el clopidogrel afecta la viabilidad celular y la apoptosis en células GES-1. Los ensayos CCK-8 mostraron que el tratamiento con clopidogrel redujo significativamente la viabilidad de las células GES-1 (Figura 1A,B), lo que indica una disminución en la viabilidad celular. Con base en la reducción general de la v...

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Discusión

El clopidogrel se utiliza ampliamente para la prevención y el tratamiento de enfermedades cardiovasculares; sin embargo, su uso clínico se asocia con riesgos de hemorragia y complicaciones gastrointestinales, incluyendo úlceras pépticas, hemorragia y perforación19. Por lo tanto, comprender los cambios moleculares asociados con la lesión gástrica inducida por clopidogrel es importante para mejorar la prevención y el manejo de estos efectos adversos. En el presente estudio, investigamos los efectos ...

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Divulgaciones

Declaración de intereses particulares:

Los autores declaran que no tienen intereses financieros competitivos conocidos ni relaciones personales que pudieran haber parecido influir en el trabajo descrito en este estudio.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por el proyecto «Investigación Fundamental sobre la Vía de Señalización CHOP/ATF5/Bcl-2 en la Apoptosis de las Células Epiteliales de la Mucosa Gástrica Inducida por Clopidogrel» (Número de Proyecto 2023BWKY009).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Kit de detección de apoptosis por V-FITC/PI de anexinaElabscienceE-CK-A211Kit para detección de apoptosis
Anticuerpo contra ATF5Proteintech67066-1-APAnticuerpo primario
Kit de ensayo de proteína BCASolarbioPC0020Ensayo de concentración de proteína
Anticuerpo contra BaxProteintech50599-1-APAnticuerpo primario
Anticuerpo contra Bcl-2Proteintech26593-1-APAnticuerpo primario
β-actina, anticuerpoProteintech66009-1-IgAnticuerpo primario
Tampón bloqueanteBeyotimeP0252Solución bloqueante para inmunotransferencia
Kit de recuento celular CCK-8KeyGen BiotechKGA317Ensayo de viabilidad celular
Kit de síntesis de ADNcTransGen BiotechAU341Kit de síntesis de ADNc de primera cadena con eliminación de ADN genómico
Kit de detección del ciclo celularLianke BiotechnologyCCS012Kit para análisis del ciclo celular
Anticuerpo contra CHOPProteintech15204-1-APAnticuerpo primario
Hidrogenosulfato de clopidogrel (Pureza ≥99 %)MacklinC874834Fármaco experimental
Kit cromógeno DABBeyotimeP0201MSustrato para inmunohistoquímica
Dimetilsulfóxido (DMSO)MedChemExpressHY-Y0320CDisolvente
Reactivo de quimioluminiscencia mejorado (ECL)MeilunbioMA0186Sustrato quimioluminiscente
Suero bovino fetal (FBS)Gibco10099-141Suplemento para cultivo celular
Línea celular epitelial gástrica humana GES-1iCell BioscienceiCell-h062Línea celular epitelial gástrica humana
Kit de tinción con hematoxilina y eosina (H&E)BeyotimeC0105STinción histológica
Anticuerpo secundario conjugado con peroxidasa de rábano picante (HRP)ProteintechRGAM001/RGAR001Anticuerpo secundario
Solución de peróxido de hidrógenoAbsinABS9333-100mLReactivo bloqueante de peroxidasa endógena
Kit ELISA para IL-1βMEIMIANMM-0047R2Ensayo de citocina sérica
Kit ELISA para IL-6MEIMIANMM-0190R2Ensayo de citocina sérica
Lector de microplacasBeijing Liuyi BiotechnologyWD-2102BMedición de absorbancia
Solución de penicilina-estreptomicinaSolarbioP1400Solución de antibiótico
Solución salina tamponada con fosfato (PBS)ServicebioG4202-500MLPBS 1×
Membrana de difluoruro de polivinilideno (PVDF)MilliporeIPVH00010Membrana para inmunotransferencia
Diluyente para anticuerpos primariosBeyotimeP0023ADiluyente de anticuerpos
Marcador de peso molecular proteicoYeasenWJ103Escala de proteínas preteñidas
Mezcla maestra para PCR cuantitativa en tiempo real (SYBR Green)CWBioCW3008Reactivo para qPCR
Tampón de lisis RIPA (Radioimmunoprecipitation Assay)SolarbioR0010Tampón de extracción de proteínas
RNasa ALianke BiotechnologyCCS012Reactivo para análisis del ciclo celular
Medio RPMI-1640ServicebioG4535-500MLMedio basal de cultivo celular
Ratas Sprague-DawleyHangzhou Ziyuan Laboratory Animal Technology Co., Ltd.N/AGrado SPF
Kit ELISA para TNF-αMEIMIANMM-0180R2Ensayo de citocina sérica
Kit de extracción de ARN totalTransGen BiotechER501-01Kit de extracción de ARN
Solución de tripsina-EDTASolarbioT1300Reactivo de disociación celular

Referencias

  1. Mills JC, Shivdasani RA. Gastric epithelial stem cells. Gastroenterology. 2011;140(2):412-424.
  2. Zhou CB, et al. The role of pyroptosis in gastrointestinal cancer and immune responses to intestinal microbial infection. Biochim Biophys Acta Rev Cancer. 2019;1872(1):1-10.
  3. Boltin D, Niv Y. Pharmacological and alimentary alteration of the gastric barrier. Best Pract Res Clin Gastroenterol. 2014;28(6):981-994.
  4. Kwon DA, et al. Protective effects of a standardized extract (HemoHIM) using indomethacin- and ethanol/HCl-induced gastric mucosal injury models. Pharm Biol. 2019;57(1):543-549.
  5. Guo XZ, et al. Effect of Bax, Bcl-2 and Bcl-xL on regulating apoptosis in tissues of normal liver and hepatocellular carcinoma. World J Gastroenterol. 2002;8(6):1059-1062.
  6. Gomi A, et al. Effect of Bifidobacterium bifidum BF-1 on gastric protection and mucin production in an acute gastric injury rat model. J Dairy Sci. 2013;96(2):832-837.
  7. Chiou SK, et al. Suppression of growth arrest and DNA damage-inducible 45alpha expression confers resistance to sulindac- and indomethacin-induced gastric mucosal injury. J Pharmacol Exp Ther. 2010;334(3):693-702.
  8. Chen X, et al. Endoplasmic reticulum stress: molecular mechanism and therapeutic targets. Signal Transduct Target Ther. 2023;8(1):352.
  9. Lian X, et al. ATF5-regulated mitochondrial unfolded protein response attenuates neuronal damage in epileptic rats by reducing endoplasmic reticulum stress through mitochondrial ROS. Neurochem Res. 2024;49(2):388-401.
  10. He C, et al. Progression of gastrointestinal injury during antiplatelet therapy after percutaneous coronary intervention: a secondary analysis of the OPT-PEACE randomized clinical trial. JAMA Netw Open. 2023;6(11):e2343219.
  11. Zongdan J, et al. The mechanism of miR-363-3p/DUSP10 signaling pathway involved in the gastric mucosal injury induced by clopidogrel. Toxicol Mech Methods. 2021;31(2):150-158.
  12. Chan FK, et al. Clopidogrel versus aspirin and esomeprazole to prevent recurrent ulcer bleeding. N Engl J Med. 2005;352(3):238-244.
  13. Taha AS, et al. Upper gastrointestinal mucosal abnormalities and blood loss complicating low-dose aspirin and antithrombotic therapy. Aliment Pharmacol Ther. 2006;23(4):489-495.
  14. Wu HL, et al. Increased endoplasmic reticulum stress response is involved in clopidogrel-induced apoptosis of gastric epithelial cells. PLoS One. 2013;8(9):e74381.
  15. Forsgard RA, et al. Intestinal permeability to iohexol as an in vivo marker of chemotherapy-induced gastrointestinal toxicity in Sprague-Dawley rats. Cancer Chemother Pharmacol. 2016;78(4):863-874.
  16. Wu H, et al. Clopidogrel-induced gastric injury in rats is attenuated by stable gastric pentadecapeptide BPC 157. Drug Des Devel Ther. 2020;14:5599-5610.
  17. Zhu XM, et al. The involvement of endoplasmic reticulum stress response in immune dysfunction of dendritic cells after severe thermal injury in mice. Oncotarget. 2017;8(6):9035-9052.
  18. Oakes SA, Papa FR. The role of endoplasmic reticulum stress in human pathology. Annu Rev Pathol. 2015;10:173-194.
  19. Abrignani MG, et al. Gastroprotection in patients on antiplatelet and/or anticoagulant therapy: a position paper of the National Association of Hospital Cardiologists (ANMCO) and the Italian Association of Hospital Gastroenterologists and Endoscopists (AIGO). Eur J Intern Med. 2021;85:1-13.
  20. Takahashi K, et al. Influence of antiplatelet drugs on gastric ulcer healing after endoscopic submucosal dissection in patients with early gastric cancer. DEN Open. 2025;5(1).
  21. Wu H, et al. Role of MKP-5-p38/MAPK pathway in clopidogrel-induced gastric mucosal epithelial cells apoptosis and tight junction dysfunction. Am J Transl Res. 2020;12(5):1741-1753.
  22. Fu X, et al. Protective effect of teprenone on gastric mucosal injury induced by dual antiplatelet therapy in rats. Am J Transl Res. 2021;13(4):2702-2709.
  23. Oyadomari S, Mori M. Roles of CHOP/GADD153 in endoplasmic reticulum stress. Cell Death Differ. 2004;11(4):381-389.
  24. Sears TK, Angelastro JM. The transcription factor ATF5: role in cellular differentiation, stress responses, and cancer. Oncotarget. 2017;8(48):84595-84609.
  25. Zhang Y, et al. Puerarin attenuates neurological deficits via Bcl-2/Bax/cleaved caspase-3 and Sirt3/SOD2 apoptotic pathways in subarachnoid hemorrhage mice. Biomed Pharmacother. 2019;109:726-733.
  26. Manas A, et al. Immunohistochemical detection of the pro-apoptotic BaxΔ2 protein in human tissues. Histochem Cell Biol. 2020;154(1):41-53.

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