Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de investigación
* These authors contributed equally
Este estudio evalúa el peeling químico con compuestos ácidos en pacientes con acné vulgaris moderado. En el ensayo con diseño de cara dividida realizado en 30 pacientes, el tratamiento redujo los puntajes del sistema de clasificación global del acné, la eritema cutáneo, los porfirinos y la expresión de IL-1α, IL-6, IL-17, TGF-β y TLR2. La diversidad del microbioma cutáneo disminuyó, especialmente Staphylococcus, sin que se reportaran eventos adversos durante el seguimiento.
La exfoliación química compuesta con ácidos se utiliza ampliamente para tratar el acné vulgar (AV), pero los mecanismos biológicos subyacentes a sus efectos clínicos aún no se comprenden completamente. Planteamos la hipótesis de que la exfoliación química compuesta con ácidos mejorarían la gravedad del acné y estarían asociadas con cambios en el microbioma cutáneo y una reducción de las respuestas inflamatorias locales en pacientes con AV moderado. Este estudio tuvo como objetivo investigar los efectos clínicos, microbiológicos e inflamatorios de la exfoliación con ácidos compuestos en esta población. Realizamos un ensayo prospectivo, aleatorizado y de cara dividida, que incluyó a 30 pacientes con AV moderado. Una hemifaz recibió exfoliación química compuesta con ácidos dos veces por semana durante 3 semanas (6 sesiones en total), seguido de un período de observación de 9 semanas. La hemifaz contralateral no recibió tratamiento durante las primeras 3 semanas y luego siguió el mismo protocolo de exfoliación durante 3 semanas, con un seguimiento de 6 semanas. Las medidas de resultado incluyeron el Sistema Global de Clasificación del Acné (GAGS), la autoevaluación del paciente, imágenes faciales estandarizadas, biopsia cutánea con inmunohistoquímica, extracción de ADN bacteriano, amplificación por PCR y secuenciación del gen del ARNr 16S. Los pacientes mostraron una mejora estadísticamente significativa en las puntuaciones del GAGS (P < 0,001). El análisis de las imágenes faciales reveló reducciones en el enrojecimiento y en las lecturas de porfirinas. La tinción inmunohistoquímica para interleucina (IL)-1α, IL-6, IL-17, factor de crecimiento transformante-β (TGF-β) y receptor tipo toll 2 (TLR2) disminuyó. La diversidad alfa del microbioma cutáneo disminuyó, con una reducción notable en la abundancia relativa de Staphylococcus (P < 0,05). Durante todo el estudio, no se notificaron eventos adversos. La exfoliación con ácidos compuestos fue eficaz y bien tolerada durante el período de observación, y se asoció con cambios en el microbioma cutáneo y en la tinción de marcadores inflamatorios locales.
El acné vulgar (AV), comúnmente conocido como acné, es un trastorno cutáneo inflamatorio crónico que afecta principalmente los folículos pilosos y las glándulas sebáceas. Se caracteriza por el desarrollo de pápulas, pústulas, nódulos y quistes, predominantemente en la cara, el pecho y la espalda. Aunque el acné afecta principalmente a adolescentes y adultos jóvenes, puede presentarse a cualquier edad, con una prevalencia mundial estimada entre el 70% y el 87% en individuos de 12 a 24 años1,2. Destacable es que el acné puede persistir en la edad adulta, especialmente en mujeres, con una incidencia creciente observada en personas de 25 años o más. El desarrollo del acné está influenciado por múltiples factores, incluida la producción elevada de sebo3, la hiperqueratinización folicular4, la colonización bacteriana5 y la inflamación6. Cutibacterium acnes (C. acnes) y Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis) son dos bacterias clave de la microbiota cutánea que desempeñan funciones cruciales en la regulación de la respuesta inflamatoria. Se ha encontrado que el equilibrio entre C. acnes y S. epidermidis es fundamental para mantener una respuesta inflamatoria normal en la piel5. Cuando se altera el equilibrio entre estas dos bacterias, se activan marcadores relacionados con la inflamación que desencadenan el acné.
Las estrategias actuales de tratamiento del acné incluyen opciones tópicas y sistémicas destinadas a abordar diferentes aspectos de esta afección. Entre ellas se encuentran los retinoides tópicos, el peróxido de benzoilo7, los antibióticos tópicos y los agentes sistémicos como los antibióticos orales y la isotretinoína para casos más graves8. En años recientes, el peeling químico ha surgido como un tratamiento prometedor para el acné. Esta técnica consiste en la aplicación de ácidos específicos para exfoliar la piel, mejorar su textura y reducir la apariencia de lesiones y cicatrices por acné9. Los ácidos comúnmente utilizados en los peelings químicos incluyen los ácidos alfa hidroxi (AAH), como el ácido glicólico, y los ácidos beta hidroxi (ABH), como el ácido salicílico. Estos ácidos actúan mediante diversos mecanismos, entre ellos la reducción de la inflamación y la prevención de la formación de comedones. En particular, las formulaciones con ácidos compuestos, que combinan varios tipos de ácidos o diferentes concentraciones de un mismo ácido, han recibido atención por sus posibles beneficios terapéuticos. La principal ventaja de los ácidos compuestos radica en su capacidad para actuar simultáneamente sobre múltiples vías implicadas en la patogénesis del acné10.
La investigación clínica que examina la eficacia del peeling con ácidos compuestos para el acné ha mostrado resultados prometedores, incluyendo reducciones significativas en la severidad del acné y el número de lesiones, así como mejoras en la textura de la piel, en pacientes que recibieron el tratamiento11. Aunque estudios previos han reportado los beneficios clínicos de los peelings químicos para el acné, la mayor parte de las evidencias disponibles se ha centrado en formulaciones de un solo ácido o en resultados clínicos como el recuento de lesiones y la severidad del acné. Si bien se hipotetiza que la combinación de propiedades exfoliantes, antiinflamatorias y antimicrobianas de estos ácidos contribuye a su eficacia, las vías moleculares precisas involucradas aún no se han elucidado completamente. Hasta donde sabemos, este es el primer estudio que investiga el efecto de los ácidos compuestos sobre la composición del microbiota cutáneo y las respuestas inflamatorias en individuos con acné moderado.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
El protocolo del estudio fue revisado y aprobado por el Comité de Ética del Hospital Afiliado N.º 1 de la Universidad Médica de Chongqing (n.º 2024-020-01). El estudio se registró prospectivamente en el Registro Nacional de Investigación Médica de China (número de registro: MR-50-24-036087; fecha de registro: 6 de septiembre de 2024). Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de todos los participantes antes de su inclusión, incluido el consentimiento para la publicación de fotografías faciales desidentificadas. El estudio se llevó a cabo de acuerdo con la Declaración de Helsinki.
Diseño del estudio
Este fue un estudio clínico aleatorizado, prospectivo y de cara dividida de 12 semanas. La exfoliación con ácidos compuestos utilizada en este estudio consistió en AHA (4 %), ácido salicílico (2 %) y ácido azelaico (1,5 %), con una concentración total de ácidos de aproximadamente 7,5 %. El pH de la formulación fue de 3,6. Antes de iniciar el estudio, la asignación de los participantes a los grupos de tratamiento y control se determinó mediante una secuencia aleatoria generada en una hoja de cálculo por un estadístico ciego y aplicada por un médico ciego. El lado de tratamiento recibió la exfoliación con ácidos compuestos dos veces por semana durante 3 semanas (seis sesiones en total). La zona de tratamiento se limpió suavemente con un limpiador suave y no oleoso y se secó completamente, luego se aplicó la exfoliación en una capa fina y uniforme (~2 mL por hemifaz). La formulación se aplicó en una secuencia estandarizada desde la frente y las sienes hasta las mejillas, la nariz, la región peribucal y el mentón, evitando los párpados, los labios, las superficies mucosas y la piel dañada. El producto permaneció en contacto con la piel durante 15 minutos, luego se neutralizó con agua. El punto final clínico fue eritema leve y uniforme, con hormigueo o calor tolerable y sin quemazón excesiva, edema, ampollas ni formación extensa de escarcha. Tras la eliminación, se aplicó una mascarilla calmante e hidratante durante 15 minutos.
Se instruyó a los participantes a evitar productos tópicos irritantes, exfoliaciones, rascado y exposición directa al sol, y a utilizar protector solar de amplio espectro durante el día. Esta fase de tratamiento de 3 semanas fue seguida por un período de seguimiento de 9 semanas. El lado control no recibió ninguna intervención durante las primeras 3 semanas. Después de este período inicial de espera, al lado control se le administró el mismo tratamiento de 3 semanas con peeling de ácidos compuestos, seguido de un seguimiento de 6 semanas. Cinco sesiones por hemifaz fueron administradas por personal médico capacitado en el hospital, mientras que una sesión por hemifaz fue realizada por el participante en casa siguiendo instrucciones estandarizadas proporcionadas por los investigadores. Se proporcionaron al participante instrucciones escritas y verbales estandarizadas sobre la cantidad y distribución del producto, la secuencia de aplicación y la zona de tratamiento, el tiempo de exposición prescrito y el procedimiento de eliminación. En Figura 1 se presenta una visión general esquemática del diseño del estudio y del flujo experimental.
Reclutamiento de pacientes
Se incluyeron en el estudio a treinta pacientes de entre 18 y 60 años con diagnóstico clínico de acné vulgar moderado (AV). Los participantes elegibles, de cualquier sexo, cumplían los criterios diagnósticos de AV moderado, correspondientes al grado 2 (31–50 lesiones, incluyendo comedones, pápulas y pústulas) o al grado 3 (51–100 lesiones, incluyendo numerosas pápulas y pústulas, ocasionales lesiones inflamatorias grandes y menos de tres nódulos). Se excluyeron a los pacientes con piel fotosensible o que hubieran utilizado medicamentos fotosensibilizantes en las últimas 4 semanas; con antecedentes de exposición intensa al sol en el mes previo o con exposición solar significativa prevista en el mes posterior al tratamiento; con cicatrices, infección activa o heridas no curadas en el sitio de tratamiento; con trastorno diagnosticado de inmunodeficiencia; con disfunción cardíaca, hepática o renal grave; o con enfermedad psiquiátrica documentada. Los 30 participantes elegibles completaron el estudio y fueron incluidos en el análisis final.
Evaluaciones de resultados
Evaluaciones objetivas
Análisis de eritema y porfirinas
En condiciones ambientales estandarizadas (temperatura, humedad e iluminación fijas), se utilizó un sistema de imagen facial para capturar imágenes de la frente bilateral, las mejillas, la mandíbula y otras áreas afectadas al inicio y en cada seguimiento. Este sistema permitió la cuantificación objetiva de la intensidad del eritema y de los niveles de porfirinas.
Muestreo de microbiota e inmunohistoquímica
El perfilado del microbioma cutáneo se realizó en hisopos microbianos recolectados del lado tratado antes del tratamiento y en la semana 3. El ADN microbiano se extrajo de los hisopos con el kit de extracción especificado, siguiendo el protocolo del fabricante, y el ADN recuperado se cuantificó posteriormente. Se amplificó la región 16S ARNr bacteriana con los cebadores universales 341F (5’-CCTACGGGNGGCWGCAG-3’) y 805R (5’-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3’). La amplificación comenzó con una desnaturalización a 98 °C durante 30 s, seguida de 32 ciclos de 98 °C durante 10 s, 54 °C durante 30 s y 72 °C durante 45 s. Una extensión final se llevó a cabo a 72 °C durante 10 min.
Los amplicones de PCR se purificaron utilizando las perlas especificadas y se cuantificaron antes de la evaluación de la biblioteca. La calidad del producto se evaluó mediante un bioanalizador y un kit de PCR cuantitativa, tras lo cual los amplicones aptos se agruparon para su secuenciación. Las lecturas brutas desmultiplexadas se procesaron eliminando primero las secuencias de los cebadores con Cutadapt. Las lecturas emparejadas se ensamblaron con FLASH, y fqtrim se utilizó para excluir lecturas con puntuaciones de calidad inferiores a 20, longitudes inferiores a 100 pb o bases ambiguas que representaran más del 5 % de la secuencia. Las etiquetas limpias que superaron el filtrado de calidad se conservaron para el análisis posterior. Los quimeras se eliminaron con Vsearch, y DADA2 se utilizó para eliminar el ruido de las lecturas restantes y generar variantes de secuencia de amplicón (ASV).
La anotación de especies se completó en QIIME2 con el complemento feature-classifier frente a las bases de datos SILVA y NT-16S. QIIME2 también se utilizó para calcular la diversidad alfa y beta. La composición bacteriana se evaluó a partir de perfiles de abundancia relativa. Las diferencias en la abundancia a nivel de género se analizaron mediante la prueba de Wilcoxon, considerándose significativas si P < 0,05. Se realizó el análisis de tamaño del efecto mediante el discriminante lineal de Fisher con nsegata-lefse, utilizando LDA ≥3,0 y P < 0,05 como umbrales.
De los participantes inscritos, se seleccionaron aleatoriamente 10 pacientes para el análisis inmunohistoquímico de mediadores inflamatorios, incluyendo IL-1α, IL-6, IL-17, TGF-β y TLR2. Se recolectaron muestras de biopsia de piel (2 mm) de lesiones activas de acné al inicio (semana 0) y en la semana 3 después de la desinfección con yodóforo. Las muestras se fijaron en paraformaldehído al 4 %, se incluyeron en parafina y se cortaron en secciones de 4 μm. Las secciones embebidas en parafina (4 μm) se desparafinizaron y rehidrataron. La recuperación de antígenos se realizó utilizando tampón de EDTA (pH 9,0) con calentamiento en microondas. La peroxidasa endógena se bloqueó con H2O2 al 3 %, tras lo cual las secciones se trataron con suero de cabra al 3 % para reducir la unión inespecífica de anticuerpos. Luego, las secciones se incubaron con los anticuerpos primarios durante toda la noche a 4 °C: IL-1α (1:400), IL-6 (1:400), IL-17A (1:400), TGF-β (1:400) y TLR2 (1:300). Posteriormente, las secciones se incubaron con un kit de anticuerpo secundario Polymer-HRP durante 30 minutos a temperatura ambiente, seguido de detección con cromógeno DAB y contraste con hematoxilina. Los controles negativos se incubaron con PBS en lugar de anticuerpos primarios. Las imágenes se obtuvieron mediante un escáner digital con un aumento de 400×. Se seleccionaron aleatoriamente cinco campos por sección, y la puntuación fue realizada por dos dermatólogos enmascarados.
Evaluaciones subjetivas
Evaluación global del investigador
En la línea base y en la semana 12, un dermatólogo cegado respecto a la asignación del tratamiento evaluó la gravedad del acné en toda la cara utilizando el Sistema de Clasificación Global del Acné (GAGS).
Autoevaluación del paciente
Al final del período de tratamiento y seguimiento, los participantes calificaron su mejora clínica percibida utilizando una escala de autoevaluación de cuatro puntos. Las puntuaciones se definieron de la siguiente manera: 0, sin mejoría o empeoramiento; 1, mejoría leve; 2, mejoría moderada; y 3, mejoría evidente.
Evaluación ciega de los resultados
Para reducir el sesgo de evaluación, un dermatólogo ciego respecto a la asignación del tratamiento evaluó de forma independiente la mejoría clínica utilizando fotografías basales.
Monitoreo de seguridad
Los eventos adversos se evaluaron en cada visita de seguimiento para evaluar la seguridad del tratamiento.
Análisis estadístico
Antes del inicio del estudio, se estimó el tamaño de la muestra para detectar un cambio en la puntuación GAGS de toda la cara desde la línea basal hasta la semana 12. El cálculo del tamaño de la muestra se basó en un estudio piloto de peeling con ácido compuesto, asumiendo un tamaño del efecto estandarizado dentro del participante de 0,60, un nivel de significación bilateral de 0,05 y una potencia del 80 %; se requirieron 24 participantes evaluables. Considerando una tasa de abandono del 20 %, la inscripción prevista fue de 30 participantes.
El análisis estadístico se realizó utilizando software estadístico y software de graficación (véase la Tabla de materiales). Los datos continuos se describieron según su distribución. Las variables con distribución aproximadamente normal se presentaron como la media ± desviación estándar, mientras que las variables con distribución no normal se resumieron como la mediana con rango intercuartílico o rango, según correspondiera. Los datos categóricos se expresaron como frecuencias absolutas y porcentajes.
La distribución de los datos se evaluó mediante la prueba de Shapiro-Wilk y se complementó con la revisión visual de histogramas y gráficos Q-Q. Debido al tamaño pequeño de la muestra y al hecho de que varias variables no seguían una distribución normal, los análisis principales se realizaron utilizando pruebas no paramétricas. Los resultados principales, incluyendo los puntajes de GAGS, el área roja y los niveles de porfirina, se analizaron usando la prueba de rangos con signo de Wilcoxon para muestras apareadas.
Se calcularon los tamaños del efecto y los intervalos de confianza del 95 % para los resultados clínicos primarios. Para comparaciones no paramétricas apareadas, se utilizó la correlación de rangos biserial para pares apareados como medida del tamaño del efecto. Se aplicó la correlación de rangos de Spearman para evaluar las relaciones entre variables continuas u ordinales. Las pruebas estadísticas fueron bilaterales, y los resultados se consideraron significativos con un valor de P < 0,05.
Se realizaron análisis del microbioma en muestras obtenidas del lado del tratamiento de los mismos participantes. La diversidad alfa se evaluó utilizando los índices de Shannon y Simpson. Los cambios en los índices de diversidad alfa entre las muestras basales y las posteriores al tratamiento se analizaron mediante la prueba de rangos con signo de Wilcoxon para muestras apareadas.
La composición de la comunidad bacteriana se resumió mediante la abundancia relativa a los niveles de filo, familia y género. Se mantuvieron los taxa con baja abundancia o baja prevalencia para el análisis descriptivo. Las diferencias en la abundancia relativa de taxa específicos entre las muestras basales y posteriores al tratamiento se evaluaron utilizando pruebas no paramétricas pareadas. Para los análisis del microbioma, las pruebas a nivel de taxa fueron exploratorias y se presentan valores de P sin ajustar. Todas las pruebas fueron bilaterales, con un umbral de significancia de P < 0,05.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Características basales de los pacientes
Treinta pacientes fueron reclutados y completaron todos los procedimientos del estudio. Las características demográficas y clínicas basales se resumieron en Tabla 1.
Análisis de la piel con VISIA
El tratamiento con peeling de ácido compuesto provocó una mejora visible en las lesiones de acné en ambas hemifacies. El análisis con VISIA confirmó reducciones significativas en los niveles de eritema ...
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Nuestros hallazgos ofrecen nuevas perspectivas sobre los efectos terapéuticos del tratamiento con peeling de ácido compuesto en el manejo del acné vulgar moderado. Tras el tratamiento, los pacientes mostraron una mejora notable en sus puntuaciones GAGS. También se observaron mejoras en las puntuaciones VISIA, específicamente en el área roja y en la porfirina. Además, los niveles de expresión de marcadores inflamatorios clave, incluidos IL-1α, IL-6, IL-17, TGF-β y el receptor tipo toll 2, se redujeron en el tejido cutáneo...
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Los autores no tienen conflictos de interés que declarar.
Esta investigación fue financiada por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (No. 82573987).
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Agilent 2100 Bioanalyzer | Agilent, EE. UU. | ||
| AMPure XP beads | Beckman Coulter Genomics, Danvers, MA, EE. UU. | ||
| Punzón de biopsia | 2 mm | ||
| Peeling ácido compuesto | XIMEIEN | A363 | Ácido alfa-hidroxi 4 %, ácido salicílico 2 % y ácido azelaico 1,5 %; concentración nominal total de ácidos activos aproximadamente 7,5 %; pH: 3,6, 12 g |
| cutadapt (v1.9) | eliminación de cebadores de secuenciación | ||
| DADA2 | desenruido y generación de variantes de secuencias de amplicones | ||
| perlas de purificación de ADN | Vazyme | VAHTS DNA Clean Beads; utilizados para purificar productos de PCR | |
| kit de extracción de ADN | TIANGEN | DP302-02 | Kit de ADN para tejido cutáneo |
| Kit de ensayo para la cuantificación de ADN | Invitrogen | Kit de ensayo Quant-iT PicoGreen de ADN bicatenario | |
| Sistema de imagen facial | sistema VISIA; modelo/versión no proporcionados | ||
| FLASH (v1.2.8) | unión de lecturas apareadas | ||
| fqtrim (v0.94) | recortar lecturas que contienen >5% de registros N | ||
| Kits cuantitativos para bibliotecas Illumina | Kapa Biosciences, Woburn, MA, EE. UU. | ||
| anticuerpos de inmunohistoquímica | Proteintech; Youpin Biology | 66148-1-Ig; YP-Ab-01185; YP-Ab-04780; YP-Ab-16022; YP-Ab-01522; YP-Ab-15931 | Descripciones suministradas: anticuerpo monoclonal contra IL-17A; anticuerpo policlonal contra TLR2; TGF-β anticuerpo monoclonal de ratón (1F12); anticuerpo policlonal contra IL-6; IL-1α anticuerpo policlonal |
| Iodóforo | Lierkang, Shandong, China | Utilizado para desinfectar los sitios de biopsia | |
| escáner digital KF-PRO-120 | Jiangfeng Bio | ||
| Microscopio óptico | Utilizado para examinar secciones de inmunohistoquímica | ||
| nsegata-lefse | tamaño del efecto LDA | ||
| NT-16S | base de datos de alineamiento | ||
| Plataforma de secuenciación de extremos emparejados | Illumina (LC-Bio Technology Co., Ltd., Hangzhou, China) | Kit de reactivo NovaSeq 6000 SP | Secuenciación de lecturas pareadas de 250 pb |
| Parafina | Utilizado para incluir muestras de biopsia | ||
| Paraformaldehído | solución al 4 % utilizada para fijar muestras de biopsia | ||
| Cebadores de PCR 338F y 806R | 338F: 5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′; 806R: 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′ | ||
| Máscara post-exfoliación | XIMEIEN | C85Y | Máscara calmante e hidratante; 28 mL × 6 piezas |
| QIIME2 | alineamiento de secuencias de la anotación de especies | ||
| Qubit | Invitrogen, EE. UU. | Cuantificación de ADN | |
| Kit de reactivo para secuenciación | Illumina | Kit de reactivo NovaSeq 6000 SP | Utilizado para secuenciación de extremos emparejados |
| SILV A | base de datos de alineamiento | ||
| Software, gráficos | Origin Software Inc. | Origin 2021 | Software para gráficos |
| Software, estadístico | IBM | SPSS 27.0 | Software de análisis estadístico |
| Software Vsearch (v2.3.4) | filtrado de secuencias quiméricas |
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.