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Artículo de investigación

La inhibición de LINC00707 alivia la inflamación y el estrés oxidativo en microglía BV2 estimulada con LPS mediante el eje miR-145-5p/TRAF6 en la lesión de la médula espinal

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11 de septiembre de 2026

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1Department of Nursing, Zhangjiakou First Hospital, 2Department of Orthopedics, Zhangjiakou First Hospital, 3Department of Pediatrics, Zhangjiakou First Hospital

* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

La expresión de LINC00707 en plasma está elevada en la lesión de la médula espinal y promueve la inflamación y el estrés oxidativo mediados por microglía a través del eje de señalización miR-145-5p/TRAF6. La silenciación de LINC00707 atenúa estas respuestas patológicas, destacando su potencial como diana terapéutica.

Resumen

La lesión de la médula espinal (LME) provoca discapacidad permanente, reduce profundamente el bienestar y genera una carga socioeconómica considerable. Este estudio investigó el papel de LINC00707 en la LME mediante la regulación del eje de señalización miR-145-5p/TRAF6. Se analizaron muestras de plasma de 30 sujetos sanos y 75 pacientes con LME para evaluar la expresión de LINC00707, miR-145-5p y TRAF6 mediante RT-qPCR. Se evaluaron las asociaciones entre los niveles plasmáticos de LINC00707 y los factores proinflamatorios en pacientes con LME. Las células microgliales BV2 fueron expuestas a 100 ng/mL de LPS, y se midieron factores relacionados con la inflamación y el estrés oxidativo. Las interacciones moleculares se evaluaron mediante un ensayo de luciferasa dual. Se utilizó un análisis de regresión logística para identificar factores asociados con la expresión de LINC00707. Los niveles plasmáticos de LINC00707 y TRAF6 estaban aumentados en pacientes con LME, mientras que los niveles de miR-145-5p estaban reducidos. Los niveles plasmáticos de LINC00707 mostraron una correlación positiva con los niveles plasmáticos de factores inflamatorios. LINC00707 actuó como esponja molecular para miR-145-5p, y TRAF6 fue un gen diana de miR-145-5p. La inhibición de LINC00707 redujo los factores inflamatorios, las sustancias pro-oxidativas y los niveles de ARNm de TRAF6 en células BV2. La inhibición de miR-145-5p produjo efectos opuestos. Estos hallazgos sugieren que el aumento en la expresión de LINC00707 está asociado con la gravedad de la LME y que la reducción de LINC00707 podría aliviar la inflamación y el estrés oxidativo mediados por microglía mediante la regulación del eje de señalización miR-145-5p/TRAF6.

Introducción

La lesión de la médula espinal (LME) es una afección traumática que daña la médula espinal, un componente crítico del sistema nervioso central. La LME interrumpe directamente las vías de conducción neural entre la médula espinal y el cerebro, provocando importantes deterioros en la función motora, sensorial y autónoma1,2. Estudios epidemiológicos han reportado una incidencia anual de aproximadamente 5 casos por cada 100 000 individuos, con una mortalidad relacionada con la enfermedad que alcanza hasta un 16,7 %3,4. Una encuesta canadiense estimó que el costo vitalicio de rehabilitación para cada paciente con LME puede alcanzar hasta 336 000 dólares estadounidenses5. La alta incidencia, mortalidad y los costos sustanciales asociados al diagnóstico, tratamiento y rehabilitación convierten a la LME en un importante desafío clínico que requiere estrategias terapéuticas mejoradas.

La progresión patológica de la lesión medular (SCI) consta de dos etapas: lesión primaria y lesión secundaria. La lesión primaria resulta de la compresión mecánica traumática o la alteración del tejido medular, mientras que la lesión secundaria está mediada por procesos patológicos, incluyendo inflamación y estrés oxidativo6,7. Bajo condiciones fisiológicas, la neuroinflamación mediada por microglía contribuye a la homeostasis del sistema nervioso central8,9,10. Sin embargo, tras una lesión medular, la microglía se activa excesivamente y libera grandes cantidades de mediadores proinflamatorios11,12. Estos mediadores inducen una producción excesiva de especies reactivas de oxígeno (ROS), lo que provoca daño y muerte neuronal y agrava la lesión medular secundaria13,14. Por lo tanto, suprimir la activación excesiva de la microglía e interrumpir la cascada inflamatoria representan estrategias terapéuticas prometedoras para favorecer la recuperación neurológica y mejorar los resultados tras una lesión medular.

Los ARN no codificantes largos (lncARN) son una clase de ARN no codificantes con una longitud superior a 200 nucleótidos que carecen de potencial codificante de proteínas15. Inicialmente considerados como «ruido» transcripcional, actualmente se reconoce que los lncARN son reguladores importantes de diversos procesos fisiológicos y patológicos16. Estudios recientes han demostrado que los lncARN desempeñan funciones cruciales en la lesión neural. El ARN no codificante largo intergénico 707 (LINC00707) ha surgido como un regulador importante de los trastornos del sistema nervioso. Estudios previos han informado que LINC00707 agrava la lesión cerebral traumática al potenciar la inflamación mediada por microglía17. Además, Zhu et al. demostraron que la inhibición de LINC00707 atenuó significativamente la inflamación y la apoptosis inducidas por lipopolisacárido (LPS) en células PC1218. Estos hallazgos proporcionan una base teórica preliminar para explorar la participación de LINC00707 en la lesión de la médula espinal (SCI). Sin embargo, aún no se ha esclarecido si LINC00707 regula la inflamación mediada por microglía durante la lesión de la médula espinal.

Los ARNl actúan como esponjas moleculares mediante el mecanismo de ARN endógeno competitivo (ceARN), secuestrando microARNs (miARNs) y regulando la expresión de genes diana downstream19. Este patrón regulador está ampliamente implicado en la patogénesis de diversas enfermedades. En particular, miR-145-5p se encuentra significativamente regulado a la baja en tejidos de LME20 y durante lesiones inducidas por LPS21, y su sobreexpresión atenúa eficazmente las respuestas inflamatorias y de estrés oxidativo en microglía22. El factor asociado al receptor de factor de necrosis tumoral 6 (TRAF6) también desempeña un papel fundamental en la patología de la LME23,24,25. Sin embargo, aún no se ha esclarecido si LINC00707, miR-145-5p y TRAF6 ejercen funciones reguladoras coordinadas en la LME.

En el presente estudio, la expresión de LINC00707 se reguló significativamente hacia arriba en células microgliales estimuladas con LPS. Por lo tanto, planteamos la hipótesis de que LINC00707 podría actuar como un regulador proinflamatorio en la microglía y que su silenciamiento podría atenuar la respuesta neuroinflamatoria, mejorando así la progresión patológica de la lesión medular (SCI). Este estudio investigó si LINC00707 regula las respuestas inflamatorias de la microglía y contribuye a la patogénesis de la lesión medular.

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Protocolo

Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital Zhangjiakou Primero (número de aprobación 2024-KY-18). Se informó a todos los participantes sobre los objetivos del estudio y los posibles riesgos, y proporcionaron consentimiento informado por escrito antes de su inclusión. Se recogieron muestras de sangre venosa de controles sanos durante exámenes físicos de rutina y de pacientes con LME inmediatamente después de su ingreso hospitalario. Las mediciones de laboratorio fueron realizadas por el laboratorio clínico del hospital. Las herramientas de investigación utilizadas en este protocolo se enumeran en la Tabla de Materiales.

1. Sujetos
Un total de 75 pacientes con lesión medular (SCI) fueron reclutados en el Hospital Zhangjiakou Primero entre enero de 2023 y enero de 2025. Los criterios de inclusión fueron lesión medular confirmada mediante tomografía computarizada (CT) o resonancia magnética (MRI), y un tiempo desde la lesión hasta el ingreso hospitalario de ≤ 12 h. Los criterios de exclusión fueron antecedentes de trauma o cirugía de médula espinal o cerebro en los últimos 6 meses; enfermedad cardiovascular grave, incluyendo infarto de miocardio o arritmia; embarazo o lactancia; y tumores malignos, función hepática o renal alterada, enfermedad cerebrovascular grave o enfermedades infecciosas.

Según los estándares de clasificación neurológica de la Asociación Estadounidense de Lesiones de la Médula Espinal (ASIA)26, 75 pacientes con lesión medular fueron clasificados en los grupos de función neurológica normal (n = 21), lesión medular incompleta (n = 36) y lesión medular completa (n = 18). La distribución de los sitios de lesión fue la siguiente: cervical, 36,0 %; torácica, 30,7 %; y lumbar, 33,3 %. Se reclutaron aleatoriamente 30 individuos sanos emparejados con la población de estudio para servir como grupo control. Se recopiló información clínica basal de todos los participantes. Los criterios de inclusión para los individuos sanos fueron: ausencia de antecedentes de trauma o cirugía de médula espinal o cerebro, o trastornos neurológicos; ausencia de antecedentes de enfermedades inflamatorias crónicas, trastornos autoinmunes o malignidades; ausencia de enfermedad cardiovascular, hepática o renal grave; ausencia de infección aguda o crónica en las últimas 4 semanas; y no estar embarazada ni en período de lactancia; además de estar emparejados por edad y sexo con el grupo de lesión medular.

La Medida de Independencia Funcional (FIM) se utilizó para evaluar la independencia funcional en las actividades diarias. La puntuación máxima de la FIM es 126. Se utilizaron las puntuaciones de sensación táctil, acmestesia y motora para evaluar la función sensorial y motora. Las puntuaciones máximas de sensación táctil y acmestesia fueron 112, y la puntuación motora máxima fue 100. Puntuaciones más bajas indican un deterioro neurológico más grave.

2. Cultivo celular, construcción del modelo y transfección
Las células microgliales inmortalizadas de ratón BV2 se obtuvieron del Centro de Recursos Celulares del Instituto de Biotecnología de Shanghái. Las células se cultivaron en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) con alta glucosa, suplementado con 10% de suero bovino fetal (FBS), penicilina (100 U/mL) y estreptomicina (100 U/mL). Las células se mantuvieron a 37 °C en un incubador humedecido que contenía 5% de CO₂.

Para la construcción del modelo, las células BV2 fueron estimuladas con 0, 10, 20, 50, 100, 150 o 200 ng/mL de lipopolisacárido (LPS) durante 24 h. La concentración óptima de LPS se seleccionó en función de los resultados experimentales.

Para la transfección, las células BV2 se sembraron en placas de 6 pocillos y se transfectaron una vez que alcanzaron la confluencia adecuada. Se utilizó un reactivo de transfección a 1,5 µL/pocillo según las instrucciones del fabricante. Después de 6 h, el medio de cultivo se reemplazó con medio fresco y las células se cultivaron durante 24 h adicionales. El constructo de silenciamiento de LINC00707, el control negativo correspondiente, el oligonucleótido de miR-145-5p y el oligonucleótido de control correspondiente se utilizaron cada uno a una concentración de 50 nM por pocillo. Todos los experimentos de transfección se repitieron independientemente al menos 5 veces, con 3 réplicas paralelas por experimento independiente. Los datos se analizaron estadísticamente utilizando los resultados de al menos 5 experimentos independientes.

3. ELISA
Los sobrenadantes de cultivo de células BV2 transfectadas y estimuladas con LPS se recolectaron mediante centrifugación a 12.000 × g durante 10 min, y los niveles de interleucina-1β (IL-1β), IL-6 y factor de necrosis tumoral-α (TNF-α) se midieron utilizando los kits de ELISA correspondientes. En resumen, el ensayo se realizó incubando secuencialmente con un anticuerpo biotinilado, un conjugado de estreptavidina-HRP y un sustrato TMB según las instrucciones del fabricante. La absorbancia se registró a 450 nm utilizando un lector de microplacas. Los niveles de citocinas se determinaron a partir de curvas estándar. Cada muestra se midió por triplicado y se realizaron 6 experimentos independientes.

4. Medición de ERO
Los niveles intracelulares de ERO en células BV2 estimuladas con LPS se midieron utilizando un kit de ensayo de especies reactivas de oxígeno. Breve­mente, las células se incubaron con 10 µmol/L de DCFH-DA a 37 °C durante 20 min. Tras la incubación, se descartó el sobrenadante y las células se lavaron 3 veces con solución salina tamponada con fosfato (PBS) para eliminar el exceso de sonda extracelular. La intensidad de fluorescencia se midió utilizando un lector de microplacas con longitudes de onda de excitación y emisión de 488 nm y 525 nm, respectivamente. Los niveles relativos de ERO se calcularon en función de la intensidad de fluorescencia. Todas las muestras se analizaron por triplicado, y todo el experimento se repitió de forma independiente al menos 5 veces.

5. Detección del malondialdehído, la superóxido dismutasa y el glutatión
Se recolectaron las células BV2 tratadas y se prepararon homogeneizados celulares. Las muestras se centrifugaron a 12.000 × g durante 10 min a 4 °C para obtener el sobrenadante. Se utilizaron kits comerciales de detección para malondialdehído (MDA), superóxido dismutasa (SOD) y glutatión (GSH), siguiendo las instrucciones del fabricante, para determinar sus niveles en los sobrenadantes celulares. Todas las muestras se analizaron por triplicado, y todo el experimento se repitió de forma independiente al menos 5 veces.

6. Ensayo de luciferasa dual
Los fragmentos de la región no traducida 3' (3' UTR) de LINC00707 y TRAF6 que contienen los sitios de unión predichos para miR-145-5p, junto con las secuencias mutantes correspondientes, se clonaron en el vector reportero de luciferasa pmirGLO para generar los constructos reporteros de tipo silvestre (WT-LINC00707 y WT-TRAF6) y mutantes (MUT-LINC00707 y MUT-TRAF6). Las células BV2 se co-transfectaron con los constructos reporteros y oligonucleótidos de miR-145-5p, y se cultivaron durante 24 h. Posteriormente, las células se recolectaron y las actividades de luciferasa de luciérnaga y Renilla se midieron utilizando un lector de microplacas.

7. RT-qPCR
El ARN total se extrajo utilizando un reactivo de extracción de ARN. La calidad del ARN se evaluó mediante la relación OD₂₆₀/OD₂₈₀, considerándose aceptables valores entre 1,8 y 2,0. Aproximadamente 1 µg de ARN total se transcribió inversamente a ADNc utilizando un kit de transcripción inversa. La expresión génica se cuantificó mediante RT-qPCR utilizando una mezcla maestra de PCR con SYBR Green. La transcripción inversa se realizó a 42 °C durante 15 min, seguida de la inactivación de la transcriptasa inversa a 95 °C durante 3 min. El ADNc sintetizado se almacenó a −20 °C hasta su análisis. La PCR cuantitativa en tiempo real se realizó con una pre-desnaturalización a 95 °C durante 1 min, seguida de 40 ciclos de desnaturalización a 95 °C durante 5 s y hibridación y extensión a 60 °C durante 15 s. Las señales de fluorescencia se registraron al final de cada paso de hibridación y extensión. El análisis de la curva de fusión se realizó a 95 °C durante 15 s, seguido de 60 °C durante 1 min. Los niveles relativos de expresión se calcularon utilizando el método 2⁻ΔΔCt. GAPDH o 5S se utilizó como referencia interna para la normalización de la expresión génica. Las secuencias de los cebadores fueron las siguientes: LINC00707, sentido 5'-CCAACAGGGTATCAGAATTCTC-3' y antisentido 5'-TGCTGACAATAGCCATTAGG-3'; miR-145-5p, sentido 5'-GCCGAGGTCCAGTTTTCCCA-3' y antisentido 5'-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3'; TRAF6, sentido 5'-ATTACAACTGAGGTGCTTCT-3' y antisentido 5'-GCATCTGGTTCTGTTATAGGA-3'; GAPDH, sentido 5'-ATCCCATCACCATCTTCCAGG-3' y antisentido 5'-CGCCCCACTTGATTTTGG-3'; y 5S, sentido 5'-TCGTCTGATCTCGGAAGCTAA-3' y antisentido 5'-AAGCCTACAGCACCCGGTAT-3'.

8. Análisis estadístico
Los análisis estadísticos se realizaron utilizando software estadístico. La normalidad de la distribución de los datos se evaluó mediante la prueba de Shapiro-Wilk, donde un valor de P > 0,05 indicaba una distribución normal. Los datos con distribución normal se presentaron como media ± DE, mientras que los datos con distribución no normal se presentaron como mediana (P25, P75). Para variables continuas con distribución normal, las comparaciones entre dos grupos se realizaron mediante la prueba t de Student, y las comparaciones entre múltiples grupos se realizaron mediante ANOVA de un factor seguido de la prueba post hoc de Tukey. Para datos con distribución no normal, se utilizó la prueba U de Mann-Whitney para comparaciones entre dos grupos y la prueba de Kruskal-Wallis para comparaciones entre múltiples grupos. La prueba de chi-cuadrado se utilizó para analizar las variables categóricas entre grupos. Se realizaron análisis de regresión logística univariante y multivariante para evaluar los factores clínicos asociados con la expresión de LINC00707. Las variables continuas se dicotomizaron en la mediana de la cohorte (grupo de valor alto = 1; grupo de valor bajo = 0). Las variables con P < 0,05 en el análisis de regresión logística univariante se incluyeron en el análisis de regresión logística multivariante. Los resultados se presentaron como odds ratios (OR) con intervalos de confianza del 95 % (IC), donde un OR > 1 indicaba una asociación positiva y un OR < 1 indicaba una asociación negativa. Todos los experimentos de fenotipo celular incluyeron al menos 4 réplicas biológicas independientes, con 3 réplicas técnicas por réplica biológica. Se consideró estadísticamente significativo un valor de P < 0,05.

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Resultados

Los niveles plasmáticos de LINC00707 estaban elevados en pacientes con LME
Se analizaron las características clínicas basales de 30 sujetos sanos y 75 pacientes con LME. En comparación con los sujetos sanos, los pacientes con LME presentaron puntuaciones notablemente más bajas en sensación táctil, acmestesia, función motora y medida de independencia funcional (FIM), lo que indica una función sensorial y motora deteriorada. Además, los niveles séricos de citocinas proinflamatorias fueron significativa...

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Discusión

La lesión de la médula espinal (LME) es un trastorno traumático grave del sistema nervioso central que provoca una alteración o pérdida completa de la conducción neural a través de la médula espinal, lo que lleva a disfunciones motoras, sensoriales y autonómicas permanentes, así como a consecuencias fisiológicas y psicológicas profundas29˒30. La gravedad de estas alteraciones generalmente aumenta con la extensión de la LME. En el presente estudio, la expresión plasmática de...

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Divulgaciones

Los autores declaran que no tienen intereses en competencia.

Agradecimientos

Este trabajo fue apoyado por el Proyecto de Investigación de Ciencias Médicas de Hebei (Concesión No. 20251479).

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
tubo microcentrífugo de 1,5 mLKIRGENKG2211Tubo de polipropileno con tapa de rosca, libre de DNasa/RNasa, no pirógeno, fuerza centrífuga máxima 20.000 × g, para el almacenamiento y centrifugación de muestras de ARN/proteína.
Placa de cultivo celular de 6 pocillosCorning3516Placa de poliestireno tratada para cultivo celular, con fondo plano, estéril y envuelta individualmente; volumen de la pocillo es de 16,8 mL con un área de crecimiento de 9,5 cm²
Aguja para la extracción de sangreBecton, Dickinson and Company367283Aguja de colección de sangre BD Vacutainer de un solo uso. Diseño de aguja de doble extremo, con un extremo para punción venosa y el otro para conectar al portador y al tubo al vacío para la recolección en múltiples tubos. Recubierta con silicona para minimizar la molestia al paciente durante la inserción.
Tubos para la recolección de sangreBecton, Dickinson and Company367605Tubos de recolección de sangre al vacío BD Vacutainer. Tapones codificados por colores indican diversos aditivos, correspondientes a pruebas de laboratorio específicas.
Línea celular inmortalizada de microglía murina BV2Centro de Recursos Celulares del Instituto de Biotecnología de ShangháiRRID: CVCL_0182Línea celular inmortalizada de microglía murina que expresa establemente marcadores específicos de microglía (Iba1, CD11b, F4/80). Tras la estimulación con LPS, las células BV2 secretan citocinas proinflamatorias (IL-1β, IL-6, TNFα) y acumulan ROS intracelulares, MDA para imitar la activación inflamatoria de microglía in vivo tras una lesión de la médula espinal. Las células se cultivan en DMEM con alta glucosa suplementado con 10 % de suero bovino fetal (FBS) y 1× penicilina-estreptomicina, mantenida a 37 °C con 5% de CO2 incubadora humedecida; pasadas cuando alcancen el 70 %–80 % de confluencia para evitar la sobreactivación.
Kit de ensayo de malondialdehído (MDA) celularInstituto de Bioingeniería Nanjing JianchengA003-4-2Kit colorimétrico basado en microplaca para la detección cuantitativa del malondialdehído celular, un marcador de la peroxidación lipídica. El MDA reacciona con el ácido tiobarbitúrico (TBA) mediante calentamiento para formar aductos rojos; la absorbancia se mide a 532 nm mediante espectrofotómetro de microplaca. Optimizado para muestras de lisados celulares, operación de alto rendimiento en placas de 96 pocillos, rango lineal de cuantificación que abarca niveles bajos a moderados de oxidación lipídica en microglía.
CO2 incubadoraThermo Scientific3111CO₂ con camisa de agua humedecida2 incubadora con volumen interno de 184 L, CO₂ por IR2 sensor, sistema de filtración de aire HEPA para minimizar la contaminación microbiana. Mantiene un entorno de cultivo estable a 37 °C, 5% CO₂2 y humedad saturada para el cultivo prolongado de células adherentes.
Kit de ensayo de gen reportero luciferasa dualBeyotime BiotechnologyRG028Este kit de luciferasa dual permite la detección cuantitativa secuencial de luciferasa de luciérnaga y luciferasa de Renilla en lisados celulares. Primero se mide la señal de luciferasa de luciérnaga utilizando el sustrato luciferina; el reactivo subsiguiente para la detección de Renilla contiene un potente inhibidor que elimina >99,9 % de luminiscencia residual de luciérnaga, lo que garantiza una lectura de señal pura de Renilla con sustrato de coelenteracina. El kit incluye un tampón de lisis celular específico para la lisis de células adherentes, compatible con luminómetros de microplacas de 96 pocillos. El reactivo de luciérnaga es un líquido premezclado listo para usar; los valores de luminiscencia de luciérnaga y Renilla se registran secuencialmente para calcular la actividad luciferasa relativa normalizada (relación luciérnaga/Renilla) en la validación de dianas de ceARN.
Medio Eagle Modificado de DulbeccoGibco11995065DMEM es un medio basal ampliamente utilizado para favorecer el crecimiento de muchas células mamíferas diferentes. Esta formulación contiene glucosa alta, L-glutamina, rojo de fenol y piruvato de sodio. Requiere suplementación, comúnmente con 10% de suero bovino fetal (FBS), y un 5–10% CO2 ambiente para mantener el pH fisiológico.
Suero bovino fetalCADA VERDE13011-8611Suero bovino fetal de grado premium, bajo en endotoxinas, libre de micoplasma & bacteriófago negativo, suplementado al DMEM al 10% v/v para favorecer el crecimiento celular.
GraphPad Prism versión 9GraphPad Software, San Diego, CA, EE. UU.NASoftware especializado en graficación científica y análisis estadístico para datos experimentales de células in vitro. Todos los valores brutos de qPCR, ELISA, estrés oxidativo y absorbancia de luminiscencia dual-luciferasa se importaron a Prism 9 para realizar la verificación de normalidad, comparaciones paramétricas/no paramétricas entre grupos, generar todas las figuras cuantitativas y calcular la media ± DE, valores exactos de P e IC del 95 %, y exportar figuras de alta resolución (300 ppp) que cumplan con los estándares de publicación de revistas. Los archivos fuente originales del proyecto .prism de todos los gráficos se depositan en el repositorio público de datos según lo requerido.
IBM SPSS Statistics Versión 26.0Corporación IBM, Armonk, NY, EE. UU.NAPaquete estadístico integral utilizado para el ordenamiento de datos basales de muestras clínicas, pruebas de normalidad (prueba de Shapiro-Wilk), prueba t independiente/no apareada, ANOVA de un factor con corrección de Tukey’corrección para comparaciones múltiples, prueba no paramétrica U de Mann-Whitney y cálculo de valores P exactos e intervalos de confianza del 95 % para todos los conjuntos de datos cuantitativos humanos y celulares. Todos los datos demográficos y de laboratorio de pacientes clínicos se procesaron y analizaron dentro de esta plataforma.
IL-1β Kit SimpleStep ELISAAbcamab255730Este kit ELISA colorimétrico sandwich con un solo lavado utiliza la tecnología SimpleStep de propiedad exclusiva, completando todo el procedimiento de detección en 90 minutos. Mide cuantitativamente la interleucina-1 de rataβ en el sobrenadante de cultivo celular, suero y muestras de plasma con EDTA/citrato/heparina. La sensibilidad de detección alcanza 26,58 pg/mL, con un rango de cuantificación lineal de 54,69–3500 pg/mL. Se incluye una microplaca de tira desmontable de 8 pocillos pre-revestida. Las señales de absorbancia se detectan a 450 nm mediante un lector de microplacas para calcular la IL-1β concentración
Kit SimpleStep ELISA para IL-6Abcamab234570Un kit colorimétrico SimpleStep ELISA tipo sándwich optimizado para la detección cuantitativa de interleucina-6 (IL-6) de rata en sobrenadantes de cultivo celular, suero y muestras de plasma con citrato/EDTA/heparina. Emplea una incubación en un solo paso y un protocolo con un solo lavado, lo que reduce el tiempo total del ensayo a 90 minutos, con una sensibilidad de detección de 43 pg/mL y un rango de cuantificación lineal de 125 pg/mL a 8000 pg/mL. Incluye una microplaca de tira desmontable pre-revestida de 8 pocillos; los valores de absorbancia se leen a 450 nm utilizando un espectrofotómetro de microplacas para el cálculo final de la concentración de IL-6.
Placa multipozo LightCycler de 96 pocillos, blancaRoche LifeScience, Suiza4729692001Placas de reacción de polipropileno blanco con cubierta parcial de 96 pocillos, especialmente optimizadas para el instrumento de PCR en tiempo real LightCycler 96. Las paredes blancas de los pocillos reducen la interferencia de fluorescencia de fondo y mejoran la reflexión de la señal, lo que aumenta la sensibilidad de detección para transcritos de baja abundancia. El diseño uniforme de pared delgada garantiza una conductividad térmica constante en todos los pocillos, compatible con volúmenes de reacción que van desde 10 hasta 50 μL. Libre de DNasa/RNasa y pirogénos para ensayos de amplificación de ADNc derivado de ARN.
Reactivo de transfección LipofectamineTM 3000Thermo Fisher ScientificL3000015El reactivo de transfección con nanopartículas lipídicas, combinado con el potenciador P3000, permite una transfección de ARNip y plásmidos con alta eficiencia y baja citotoxicidad en microglía BV2.
Kit de Síntesis de ADNc de Primera Cadena lnRcute lncRNATIANGENKR202-02Este kit está especialmente optimizado para la transcripción inversa de ARN no codificantes largos (lncARN) de baja abundancia, contenido de GC variable y estructuras secundarias complejas. Contiene un tampón independiente para la eliminación de ADN genómico (gADN) que elimina la contaminación por ADN genómico antes de la transcripción inversa, y una mezcla especializada de cebadores lnR-RT para enriquecer las plantillas de lncARN de longitud completa. La transcriptasa inversa modificada permite la síntesis eficiente de ADNc de cadena larga a partir de ARN total con una cantidad de entrada que varía entre 10 ng y 2 ng.
Kit de detección de lncARN mediante qPCR lnRcute (SYBR Green)TIANGENFP402Una mezcla previa cuantitativa específica basada en SYBR Green para la cuantificación de ARNl. La polimerasa de ADN con inicio térmico mediado por anticuerpo garantiza una alta especificidad de amplificación; los componentes competidores H alivian la interferencia de la estructura secundaria en plantillas de ARNl con alto contenido de GC. Compatible con ADNc generado a partir del kit de transcripción inversa lnRcute para ARNl, y adecuada para la cuantificación de la expresión relativa de ARNl de baja abundancia.
oligonucleótidos de miR-145-5pGeneralbiol (Wuhan, China)NAMimético sintético de miR-145-5p, inhibidor y oligonucleótidos correspondientes de control negativo utilizados para modular la actividad del miR-145-5p en células BV2. Utilizados en ensayos de expresión, inflamación, estrés oxidativo y de represa luciferasa dual.
Kit de ADNc de primera cadena miRcute Plus para miARNTIANGENKR211-02Adopta una reacción combinada de poliadenilación y transcripción inversa en un solo tubo para simplificar el flujo de trabajo experimental. La mezcla de enzimas contiene poli(A) polimerasa de E. coli, transcriptasa inversa deficiente en RNasa H e inhibidor de RNasa, que se dirige específicamente al miARN maduro de cadena sencilla y evita la interferencia en la amplificación por pre-miARN con estructuras en horquilla. Adecuado para miARN extraído de lisados celulares, plasma y muestras de tejido.
Kit de detección qPCR de miARN miRcute Plus (SYBR Green)TIANGENFP411Mezcla previa de SYBR Green optimizada para la cuantificación de miARN maduros, compatible perfectamente con los productos de transcripción inversa miRcute. El sistema de tampón mejora la eficiencia de hibridación de cebadores para amplicones cortos de miARN, proporciona señales de fluorescencia estables y alta sensibilidad para la detección de miARN de baja expresión. El ARNsn U6 se utiliza comúnmente como referencia interna para la normalización.
Solución de penicilina-estreptomicina (100×)Beyotime BiotecnologíaC0222Mezcla filtrada estéril que contiene 10 000 U/mL de penicilina y 10 mg/mL de estreptomicina; dilución de trabajo 1:100 en medio de cultivo para prevenir contaminación bacteriana.
Kit de ensayo de especies reactivas de oxígeno con diluyenteBeyotime BiotechnologyS0034MEste kit utiliza la sonda fluorescente DCFH-DA para cuantificar especies reactivas de oxígeno (ROS) intracelulares. La DCFH-DA atraviesa la membrana celular y es hidrolizada por esterasas intracelulares a DCFH, la cual es oxidada por las ROS para generar DCF fluorescente. Es compatible con placas microtituladoras de 96 pocillos y lectores de fluorescencia para detección de alto rendimiento (Ex = 488 nm, Em = 525 nm). Incluye un diluyente específico para la sonda y el reactivo de control positivo Rosup para estabilizar las señales de tinción, adecuado para la detección de estrés oxidativo en microglía BV2 adherente sin lisis celular.
Kit de ensayo de glutatión reducido (GSH)Instituto de Bioingeniería Nanjing JianchengA006-1-2Kit colorimétrico en microplaca para la detección de glutatión reducido (GSH), el principal antioxidante intracelular. El GSH reacciona con ácido ditiobisnitrobenzoico (DTNB) para producir un producto cromogénico amarillo, cuya absorbancia se mide a 405 nm en un lector de microplacas. El kit adapta el protocolo estándar en tubo a una detección de alto rendimiento en microplacas de 96 pocillos para el análisis de antioxidantes en lisados celulares.
si-LINC00707GenePharma (Shanghái, China)NAARNi pequeño diseñado para reducir la expresión de LINC00707 en células BV2. Utilizado en experimentos de pérdida de función para evaluar los efectos del silenciamiento de LINC00707 sobre las respuestas inflamatorias, el estrés oxidativo, la expresión de miR-145-5p y la expresión de TRAF6.
si-LINC00707 NCGenePharma (Shanghái, China)NAARNi de secuencia no dirigida utilizado como control negativo para la transfección de si-LINC00707. Se utiliza para controlar los efectos no específicos del procedimiento de transfección y de la exposición al ARNi.
SuperReal PreMix Plus (SYBR Green)TIANGEN4992777Mezcla universal lista para usar de PCR cuantitativa con SYBR Green para la cuantificación relativa de ARNm, que contiene ADN polimerasa Taq con activación térmica (hot-start), dNTPs, SYBR Green I y colorante de referencia ROX para la normalización de fluorescencia. Baja amplificación no específica, eficiencia de amplificación estable, aplicada ampliamente para la cuantificación de genes diana de ARNm (TRAF6, GAPDH, etc.).
Centrífuga de sobremesa pequeña Thermo Scientific™ Sorvall™ ST 8Thermo Scientific75200709La opción clásica para laboratorios clínicos, capaz de manejar hasta 24 × Tubos de recolección de sangre de 5/7 mL a la vez. La serie R es una versión refrigerada, que puede proteger mejor las muestras que requieren centrifugación a baja temperatura.
Kit de Síntesis de ADNc de Primera Cadena TIANScript IITIANGENGKR107-02Diseñado para la transcripción inversa de ARNm en general, con el fin de generar ADNc de longitud larga hasta 12 kb. Equipado con cebadores Oligo (dT) 15 y hexámeros aleatorios para estrategias de cebado flexibles. La transcriptasa inversa M-MLV modificada lee eficientemente estructuras secundarias complejas y regiones de alto contenido de GC en el ARNm, con amplia compatibilidad para la amplificación posterior de ARNm mediante qPCR.
TNF-α Kit SimpleStep ELISAAbcamab236712Un kit ELISA sandwich SimpleStep de un solo lavado rápido optimizado para la detección cuantitativa del factor de necrosis tumoral de rataα (TNF-α) en sobrenadante de cultivo celular, suero y diversas muestras de plasma. La duración total del ensayo es de 90 min, con una sensibilidad ultrarrápida de 1,04 pg/mL y un rango de detección lineal desde 15,63 pg/mL hasta 1000 pg/mL. Equipado con 8 desmontable×placa pre-recubierta de 12 pocillos; se registran los valores de DO a 450 nm para el TNF finalα cálculo cuantitativo
Kit de ensayo de superóxido dismutasa total (T-SOD)Instituto de Bioingeniería Nanjing JianchengA001-3-2Kit cromogénico en microplaca WST-1 para detectar la actividad enzimática total de SOD. La SOD elimina los radicales anión superóxido e inhibe la reacción de reducción de WST-1. La absorbancia se registra a 450 nm mediante un lector de microplacas para el cálculo de la actividad. Adecuado para homogenados celulares, suero y muestras de tejido, con desarrollo de color estable y alta repetibilidad para la evaluación de la capacidad antioxidante.
Reactivo TRIzolThermo Fisher Scientific15596018Reactivo monofásico de fenol-guanidina isotiocianato para el aislamiento en un solo paso de ARN total a partir de células de microglía en cultivo; extrae simultáneamente ADN y proteína a partir de muestras idénticas.

Referencias

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