Este estudio de laboratorio fue aprobado por el comité de ética institucional de la Universidad de Salud y Tecnología Kocaeli (número de aprobación 31/22) y se llevó a cabo de acuerdo con los principios éticos descritos en la Declaración de Helsinki y las directrices PRILE 202128 (Archivo Suplementario 1 y Archivo Suplementario 2). Se obtuvo el consentimiento informado de los donantes para el uso de los dientes extraídos. El modelo de espécimen, la preparación del surco y la calificación siguieron un protocolo descrito8. Todos los materiales, instrumentos y software utilizados en este protocolo se enumeran en la Tabla de Materiales.
Cálculo del tamaño de la muestra
El tamaño de la muestra se basó en una investigación previa que utilizó el mismo modelo de surco artificial y sistema de puntuación26. En ese estudio, un análisis de potencia a priori (tamaño del efecto = 0,6, α = 0,05, potencia = 0,95) indicó n = 12 por grupo, que los autores aumentaron a 15 para compensar posibles pérdidas. Para aumentar la precisión, el presente estudio utilizó n = 20 por grupo, lo que dio un total de 400 surcos. Este cálculo abordó el efecto principal de la técnica de eliminación; no se realizó un cálculo a priori separado para la interacción técnica × sellador. Un análisis de sensibilidad a posteriori basado en la distribución chi-cuadrado del estadístico de Scheirer-Ray-Hare (statsmodels 0.14.6) mostró que los 200 surcos analizados en cada región proporcionaron un 80 % de potencia (α = 0,05) para detectar una interacción con un tamaño del efecto w = 0,24 (4 grados de libertad) y un efecto principal del sellador de w = 0,20 (1 grado de libertad), por lo que efectos menores que estos, por debajo del tamaño del efecto medio de Cohen de w = 0,3, podrían no haber sido detectados.
Criterios de selección de la muestra
Se utilizaron doscientos incisivos centrales superiores humanos extraídos. Después de la extracción, los dientes se desinfectaron en NaOCl al 2%, se enjuagaron con agua destilada y se almacenaron en solución de timol hasta su uso. Se incluyeron dientes con un conducto radicular único y recto y ápice intacto, y se confirmó radiográficamente la presencia de un solo conducto. Se excluyeron los dientes con curvatura, calcificación, tratamiento previo, reabsorción o un tamaño apical inicial de #30 o mayor. Las coronas se seccionaron a una longitud estándar, con una longitud de trabajo de 18 mm. La aleatorización se realizó en dos etapas mediante un generador web de secuencias aleatorias (random.org): los 200 dientes se asignaron primero a los dos selladores (n = 100 cada uno), y luego los dientes de cada sellador se asignaron a las cinco técnicas de eliminación (n = 20/cada grupo), de modo que la asignación se estratificó por sellador. Las secuencias aleatorias fueron generadas y aplicadas por un investigador que no realizó la evaluación, y las muestras se etiquetaron con identificadores codificados para mantener a los observadores ciegos tanto respecto al sellador como a la técnica de eliminación.
PRECAUCIÓN: Los dientes humanos extraídos representan un peligro biológico potencial. Manipule todas las muestras con el equipo de protección personal adecuado, que incluya guantes, mascarilla y protección ocular.
Preparación de la muestra
Después de confirmar la permeabilidad con una lima K de tamaño ISO 10, los conductos se ampliaron hasta el tamaño 40/0,04 en la longitud de trabajo utilizando un sistema de instrumentación endodóntica rotatorio bajo irrigación con hipoclorito de sodio al 3% (NaOCl), seguido de un enjuague con 5 mL de NaOCl al 3% y 5 mL de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) al 17%. Todas las soluciones de NaOCl se prepararon a partir de una solución madre al 5,25% mediante dilución con agua destilada: NaOCl al 3% mezclando NaOCl al 5,25% y agua destilada en una proporción volumétrica de 4:3 (por ejemplo, 100 mL de NaOCl al 5,25% y 75 mL de agua destilada), y NaOCl al 5% en una proporción volumétrica de 20:1 (por ejemplo, 100 mL de NaOCl al 5,25% y 5 mL de agua destilada).
PRECAUCIÓN: El hipoclorito de sodio es cáustico para la piel, los ojos y las membranas mucosas. Prepare y manipule todas las soluciones con guantes y protección ocular, y evite la extrusión más allá del foramen apical.
Las raíces se incrustaron en material de impresión dentro de tubos de centrífuga y se dividieron longitudinalmente con un disco de diamante, sin penetrar el espacio del conducto. Cualquier raíz en la que se hubiera penetrado el espacio del conducto durante la división debía excluirse y sustituirse por un diente preparado de la misma manera; ninguna raíz cumplió este criterio en la serie actual. Se realizaron dos surcos artificiales, de 4 mm de largo, 0,2 mm de ancho y 0,5 mm de profundidad, en la pared del conducto con una punta de profilaxis montada en una unidad endodóntica ultrasónica piezoeléctrica al 40 % de potencia, bajo un microscopio operatorio dental a una magnificación de ×20. Los surcos se prepararon en las paredes opuestas del conducto, a 2-6 mm y 10-14 mm del ápice (Figura 1). Tras la preparación de los surcos, se eliminó la capa de esmalte utilizando 2 mL de EDTA al 17 %.
Las ranuras de 100 dientes se rellenaron con CeraSeal, y las de los 100 dientes restantes con BioRoot Flow utilizando conos de gutapercha. Se confirmó el relleno completo de las ranuras bajo el microscopio operativo dental a un aumento de ×20. Las mitades radiculares se volvieron a ensamblar dentro de los tubos Eppendorf, la cavidad de acceso se selló con un material de obturación temporal, el foramen apical y las superficies radiculares se cubrieron con cera, y los especímenes se mantuvieron a 37 °C y 100 % de humedad durante 30 días. Luego, se verificó la fragua del sellador bajo el microscopio operativo dental a un aumento de ×20.
Procedimientos de eliminación
Los especímenes para cada sellador se asignaron a cinco técnicas de eliminación (n = 20 por grupo), siendo SNI el control sin activación. Los grupos SNI, PUI, R-SWEEPS y Er,Cr:YSGG compartieron un régimen de irrigación compuesto por seis ciclos de administración-activación, tres con NaOCl al 5 % seguidos por tres con EDTA al 17 %. En cada ciclo, se administraron 5 mL de irrigante durante 150 s a 2 mL/min mediante una bomba de irrigación, y luego se activó el irrigante dentro del conducto durante 20 s con la técnica en evaluación. Se completaron los tres ciclos con NaOCl antes que los tres con EDTA, de modo que cada espécimen recibió 15 mL de NaOCl al 5 % y 15 mL de EDTA al 17 % (30 mL en total) y seis activaciones de 20 s (tres por irrigante, 120 s en total). Por lo tanto, el tiempo de tratamiento en los tres grupos activados fue de aproximadamente 17 min (6 × 150 s de administración más 6 × 20 s de activación).
En el grupo SNI, los irrigantes se administraron mediante una aguja de 30 G colocada a 2 mm del largo de trabajo sin activación; este grupo recibió los mismos volúmenes, velocidad de flujo y secuencia de irrigantes que los grupos activados, pero no se intercaló ningún intervalo de espera entre las aplicaciones en lugar de los períodos de activación, de modo que su tiempo total de exposición fue aproximadamente de 15 min (6 × 150 s).
En el grupo PUI, el irrigante se activó utilizando una punta IrriSafe tamaño 20 montada en la unidad endodóntica piezoeléctrica ultrasónica al 40 % de potencia, con la punta colocada a 2 mm corto de la longitud de trabajo, durante tres ciclos de 20 s por cada irrigante.
En el grupo R-SWEEPS, el irrigante se activó con un láser Er:YAG de 2940 nm en modo R-SWEEPS utilizando una punta radial (diámetro de 400 µm, longitud de 14 mm) colocada en la orificio del conducto sin ingresar al conducto, durante tres ciclos de 20 s por irrigante, con la pulverización de aire y agua desactivada. En este modo, cada pulso de 15 mJ se entrega como uno de un par sincronizado con una frecuencia de repetición de pares de pulsos de 15 Hz (30 mJ por par), lo que proporciona una potencia promedio de 0,45 W, 9 J por activación de 20 s y 54 J por espécimen; la energía del pulso corresponde a una densidad de energía de 11,9 J/cm2 en la cara terminal de la punta de 400 µm.
En el grupo Er,Cr:YSGG, el irrigante se activó con un láser Er,Cr:YSGG de 2780 nm en modo H (25 mJ por pulso, 50 Hz, 1,25 W; 25 J por activación de 20 s y 150 J por espécimen) utilizando una punta radial emisora RFT2 colocada a 2 mm del largo de trabajo, durante tres ciclos de 20 s por irrigante con la pulverización de aire y agua desactivada. En ambos grupos con láser, el conducto se llenó con el irrigante suministrado por la bomba antes de activar el láser, y los parámetros fueron los ajustes preestablecidos del fabricante para la activación de irrigantes endodónticos, aplicados sin modificaciones. Tabla 1 muestra los parámetros completos de irradiación, incluyendo la energía por pulso, la densidad de energía y la energía total entregada.
En el grupo GentleWave G4, el espécimen reensamblado se mantuvo en el tubo de centrífuga; se construyó una plataforma sobre el extremo coronal de la raíz con la resina SoundSeal del fabricante para crear un sello hermético entre el instrumento de irrigación endodóntica y la abertura del conducto, y se realizó el ciclo automatizado del sistema GentleWave G4 con software ProControl utilizando los fluidos de procedimiento del fabricante en la siguiente secuencia: NaOCl al 3% durante 5 min, agua destilada durante 30 s, EDTA al 8% durante 2 min, y un enjuague final con agua destilada durante 30 s (aproximadamente 8 min en total). El instrumento de procedimiento permaneció sujeto por la plataforma durante todo el ciclo. Las concentraciones de irrigantes, los caudales, la desgasificación y los tiempos de ciclo están preestablecidos por el fabricante y no pueden ser modificados por el operador, por lo que este grupo difirió de los otros cuatro grupos en cuanto a concentración de irrigante, volumen y tiempo de tratamiento (véase la sección de Discusión).
Evaluación del sellador residual
Las mitades de la raíz se separaron y examinaron bajo el microscopio operatorio dental con un aumento de ×20. El sellador residual en cada surco se calificó según una escala de cuatro puntos29: 0, ausencia de sellador en el surco; 1, sellador en menos de la mitad; 2, sellador en más de la mitad; y 3, surco completamente lleno. Dos observadores calibrados, ciegos respecto al tipo de sellador y a la técnica de eliminación, calificaron de forma independiente los surcos; el acuerdo entre observadores fue κ = 0,92 (kappa de Cohen). Las discrepancias se resolvieron por consenso.
Análisis estadístico
Los datos se analizaron utilizando Python 3.9.6 con las bibliotecas SciPy 1.13.1, statsmodels 0.14.6 y scikit-posthocs 0.14.0. Las ranuras apicales y coronales se analizaron por separado. Los puntajes residuales de sellador en los 10 grupos se compararon mediante la prueba de Kruskal-Wallis, seguida de la prueba de Dunn con corrección de Bonferroni. Se calculó el cuadrado de epsilon como tamaño del efecto. Los efectos del sellador y la técnica de eliminación, junto con su interacción, se examinaron mediante la prueba de Scheirer-Ray-Hare. Dentro de cada técnica de eliminación, los dos selladores se compararon utilizando la prueba U de Mann-Whitney con corrección de Bonferroni, y se informó delta de Cliff con intervalos de confianza del 95 % obtenidos por bootstrap como tamaño del efecto. El nivel de significancia se estableció en 5 %.